牦牛出血性败血症病原的分离鉴定与药敏试验

郭占宏

青海省西宁市大通县桦林乡畜牧兽医站，青海大通810100

2019年3月5日，青海省大通县某牧民饲养的成年牦牛发病，发病率和死亡率分别为48%、50%，病程短，致死率高。发病初期牦牛体温升高达40 ℃，喜卧不食，咽喉、颈部和胸前部发生炎性水肿，随病情加重发展，病牦牛腹式呼吸、流涎，可视黏膜发绀，下痢。剖检病死牦牛可见淋巴结肿胀，皮下组织和肌肉有出血性胶样浸润，流出透明的淡黄色液体，胃肠黏膜出血，肺脏呈大理石样病变。通过采取病死牦牛脏器进行病原分离鉴定，结合临床症状和剖检病变，确诊为牦牛出血性败血症，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）病料采集。无菌采集青海省大通县某牧民牧场中病死牦牛实质脏器（心、肝、脾、肺、肾等）。

2）主要试剂和培养基。TSA 琼脂平板、TSB 肉汤、生化培养基、TSA 琼脂斜面、MH（A）培养基，兽医临床常用药敏纸片：卡那霉素、万古霉素、头孢哌酮、羧苄青霉素、链霉素、氟哌酸、头孢噻肟、红霉素、头孢呋新、妥布霉素、氯霉素、头孢唑啉。

3）试验动物。6 只健康昆明系小鼠，体重为16～18 g，不分雌雄。

1.2 方 法

1）病料触片、染色镜检。将无菌采集的实质脏器进行触片，革兰染色、美蓝染色镜检。

2）细菌分离与纯化。在TSB 肉汤上接种采集的病料，于37 ℃恒温培养箱中培养24 h，摇匀，然后在TSA 琼脂平板上划线接种勾取2～3 环TSB 肉汤培养物进行细菌的数次纯化培养，之后在TSA 血斜面上接种纯化好的细菌，于37 ℃培养24 h。

3）生化鉴定。将分离纯化的菌株分别接种于各种糖培养基、葡萄糖蛋白胨水、邓亨氏蛋白胨水、尿素、枸橼酸盐等生化培养基中，37 ℃温箱中培养24～48 h，观察生化反应特性。

4）动物试验。将6 只健康昆明系小鼠分成2 组：I 组（试验组）、II 组（对照组），每组3 只小鼠。将病料在无菌条件下制成乳剂，给I 组（试验组）3 只小鼠进行腹腔注射，0.5 mL/只；II 组（对照组）小鼠采用灭菌生理盐水进行腹腔注射，0.5 mL/只，对小鼠生长、病死情况进行观察。

5）药敏试验。通过灭菌棉拭子蘸取菌液涂布在MH（A）培养基表面，确保涂布均匀，分别贴上药敏纸片，37 ℃温箱培养24 h 后观察结果，并且测量抑菌圈直径（cm）大小。判定标准为：抑菌圈直径＜1.5 cm，耐药；1.5 cm≤抑菌圈直径≤2.0 cm，中介；抑菌圈直径＞2.0 cm，高敏。

2 结果与分析

1）触片、染色镜检。病死牦牛实质脏器触片，革兰和美蓝染色镜检可见阴性、大量两极浓染的小杆菌。

2）菌落形态。在TSA 琼脂平板上菌落边缘整齐、湿润光滑，TSB 肉汤培养后均匀浑浊。

3）生化鉴定结果。生化鉴定详细结果见表1。

表1 生化试验结果

4）动物试验结果。在注射24 h 后，I 组（试验组）3 只小鼠全部死亡，剖检病死小鼠观察到全身出血性变化显著，皮下组织水肿，肝脏有坏死灶呈灰白色，肠道出血显著。采集病死小鼠脾脏、肝脏等脏器病料进行触片、革兰与美蓝染色、镜检，发现阴性、两极浓染的小杆菌，与上述分离菌株形态一致。II 组（对照组）3 只小鼠健活，没有致病死亡。

5）药敏试验结果。分离菌株对药敏纸片的敏感性见表2。

表2 分离菌株抑菌圈直径测量结果

3 讨 论

1）本研究对分离自青海省大通县某牧民牧场病死牦牛实质脏器中的多杀性巴氏杆菌进行了鉴定与药敏试验，通过病原菌株分离鉴定，确诊为牦牛出血性败血症。药敏试验结果显示，该菌株对头孢哌酮、氟哌酸、红霉素、妥布霉素敏感，对万古霉素、头孢噻肟、头孢呋新、头孢唑啉中度敏感，对羧苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、链霉素耐药。

2）牦牛出血性败血症是一种由多杀性巴氏杆菌为主要病原体的传染疾病，又称牦牛巴氏杆菌病。多杀性巴氏杆菌属于条件性致病菌，该病原菌主要通过患病动物的分泌物和粪便进行传播[1]。本病常年发生，尤其是在青海牧区，因气温骤降致使牦牛抵抗力下降，病原菌经外源性和内源性传染侵入牦牛机体致病。

3）牦牛出血性败血症发病急，病程短，治疗不及时极易导致病牛死亡。一旦发病，需要尽早治疗，通过药敏试验，选取对病原菌敏感药物，如头孢哌酮、氟哌酸等，同时采用对病原菌中度敏感药物，如万古霉素、头孢噻肟等进行药物交替治疗，临床疗效显著，疫情得到控制，无新发病例。

4）控制牦牛出血性败血症重在日常预防，一方面加强牦牛饲养管理，适当进行季节性补饲，提高牦牛群抗病力，同时严格卫生消毒制度，切断病原菌传播[2]；另一方面对牦牛免疫接种牛出败氢氧化铝灭活疫苗，确保牦牛群保持较高的抗体水平，可以有效防控牦牛出血性败血症的发生。