鸡传染性法氏囊病活疫苗（NF8株）生产工艺的参数优化

滕颖 葛俊伟

摘要：鸡传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病病毒引起的、主要侵害幼龄鸡的一种急性、高度接触性传染病。用于防治IBD的疫苗有活疫苗、灭活疫苗和其他疫苗。我国已经批准新兽药注册和进口注册的IBD活疫苗很多，包括低毒力株活疫苗、中等毒力株活疫苗和中等偏强毒力株活疫苗。中等毒力株活疫苗NF8株既具有一定毒力，可突破一定水平的母源抗体，又不引起法氏囊不可逆的损伤。在制苗用毒液的制备工艺环节中，由于毒种不同的稀释倍数、鸡胚不同的培养时间，对鸡胚死亡的高峰时间、收获单产结果都不同。为了得到更稳定的产品质量，适应大规模生产还需要进一步优化疫苗的生产工艺参数。

关键词：鸡;传染性法氏囊病活疫苗（NF8株）;鸡胚接种日龄;毒种稀释倍数;培养时间

中图分类号：S852.5     文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2019）05-0011-01

1 材料

毒种：鸡传染性法氏囊病病毒（NF8株），批号201802，由哈药集团生物疫苗有限公司提供，符合毒种标准要求。

鸡胚：选用哈药集团生物疫苗有限公司SPF鸡场提供的SPF种蛋，分别孵化成10～11日龄的鸡胚。

0.85%生理盐水：由哈药集团生物疫苗有限公司配制、灭菌。

2 方法

2.1 接毒量优化

将鸡传染性法氏囊病病毒（NF8株）毒种用生理盐水作50倍、100倍和500倍稀释，分别经尿囊腔接种10～11日龄SPF鸡胚150枚，接毒量为0.1 mL/枚，并设10枚10～11日龄SPF鸡胚作为空白对照，置37℃继续培养。鸡胚接种后，将24 h前死亡的鸡胚弃去，后每6 h捡胚1次，死胚取出气室向上，置2～8℃冷却12 h后，用碘酊消毒气室部位，然后无菌收取胎儿。在收取胎儿前对每枚鸡胚进行检查，凡胎儿腐败、胚液浑浊及有任何可疑污染者弃去;各组收取的胎儿放于不同灭菌的容器内，测定病毒含量和单胚收获量。

2.2 收毒时间优化

将鸡传染性法氏囊病病毒（NF8株）毒种作100倍稀释，分别经尿囊腔接种10～11日龄SPF鸡胚150枚，每胚0.1 mL，并设10枚10～11日龄SPF鸡胚作为空白对照，置36℃继续培养，鸡胚接种后，将24 h前死亡的鸡胚弃去，后每6 h捡胚1次，培养至96 h。取出死亡雞胚气室向上，置2～8℃冷却12 h后，用碘酊消毒气室部位，然后无菌收取胎儿。在收取胎儿前对每枚鸡胚进行检查，凡胎儿腐败、胚液浑浊及有任何可疑污染者弃去;各组收取的胎儿放于不同灭菌的容器内，测定病毒含量和单胚收获量。

3 结果与分析

3.1 病毒稀释度优化结果

将鸡传染性法氏囊病病毒（NF8株）毒种用生理盐水作50倍、100倍和500倍稀释，分别经尿囊腔接种10～11日龄SPF鸡胚50枚，从结果可见，当稀释倍数为50倍及100倍时，单产和病毒含量均相对较高，结果见表1。考虑到大规模生产的成本因素，选择100倍稀释为最佳病毒稀释度。

3.2 收毒时间优化结果

将鸡传染性法氏囊病病毒（NF8株）毒种以100倍稀释，分别经尿囊腔接种10～11日龄SPF鸡胚180枚。从结果可见，48 h和72 h收获的原液病毒含量（ELD50）均相对较高，96 h病毒含量有所下降。在胚液的收获量上，48 h获的量明显小于72 h和96 h获的胚液量，结果见表2。从大规模生产的成本出发，选择72 h获为最佳收毒时间。

4 讨论

本次鸡传染性法氏囊病活疫苗（NF8株）生产工艺的参数优化试验，意在寻找鸡传染性法氏囊病在鸡胚繁殖过程中，在确保半成品病毒含量达到规程标准要求的前提下提高收率，通过选择不同原液收获时间及毒种稀释倍数的试验比较，将鸡传染性法氏囊病活疫苗（NF8株）做100倍稀释接种10日龄鸡胚，鸡胚死亡高峰向后推迟，收获单产提高。

在该生产工艺条件下，收获的病毒原液的病毒含量及单胚收获量均可达到规程指标要求。