IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2在不同子宫平滑肌肿瘤中的表达

刘裴丽 张亚军 蒋欣

子宫平滑肌肿瘤（uterine sommth muscle tumors，USMTs）是最为普遍的妇科肿瘤，严重地危害着女性的健康，往往多发生于育龄期妇女，并且发病率一直在逐年升高。根据肿瘤的不同病理形态（核分裂像、细胞异型性和凝固性坏死）可分为三种：良性型简称为子宫肌瘤（usual leiomyoma，UL）、恶性型即子宫平滑肌肉瘤（leiomyosarcoma，LMS）和交界性（borderline leiomyoma，BLM），其中子宫肉瘤较为少见，约在女性生殖道恶性肿瘤中不到1%[1-2]，但子宫肉瘤的恶性度高、预后也极差。由于USMTs的病理类型多样，良恶性各不相同[3]，导致其治疗的方法也有所不同，因此准确的鉴别诊断对于治疗方案的制定显得至关重要[4]。本文采用免疫组化法检测IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2在各组平滑肌肿瘤组织中的表达，旨在提高肿瘤诊断的正确率并对其预后的评估作进一步研究。

1 资料和方法

1.1 一般资料

UL、BLM、LMS病例分别为34例、40例与35例，均来源于江苏省连云港市妇幼保健院病理科存档蜡块（1995—2017年）。所有病例均经病理确诊，良性型呈现典型平滑肌瘤组织的病理学特征，即核分裂数＜5（每10个高倍视野）；恶性型即平滑肌肉瘤的核分裂数＞10，或同时伴有肿瘤细胞的弥漫性异型、凝固性坏死；交界性子宫平滑肌瘤介于两者之间。所有病例经证实术前3个月内无妊娠史及性激素等药物史。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫组化检测 所有标本经10%中性甲醛固定后，石蜡包埋、切片（5 μm厚），实验方法采用即用型二步法（免疫组化试剂盒购自北京中杉公司）。一抗IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2全为工作液，均为武汉博士德公司产品，采用柠檬酸盐（pH6.0）进行抗原修复，DAB显色，苏木精对比染色。实验以PBS代替一抗作空白对照，使用已知阳性片作为阳性对照。

1.2.2 结果判定 IMP3、Bcl-2阳性为棕黄色颗粒分布于细胞浆；Ki-67、P53阳性为棕黄色颗粒分布于细胞核；根据肿瘤细胞阳性数进行判断，≤5%为阴性（-），6%～25%为轻度阳性（+），26%～75%为中度阳性（++），＞75%以上为强阳性（+++）。

1.2.3 统计学方法 实验数据均采用SPSS 19.0软件对数据进行分析处理，计量资料以（均数±标准差）表示，采用t检验；计数资料以（n，%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 IMP3在各组子宫平滑肿瘤组织中的表达

见表1所示，IMP3在LMS中的表达率为54.3%，高于在UL、BLM中的表达率0%、5%，差异具有统计学意义（P＜0.01），且LMS阳性例数中强阳性表达所占比例较高（9/19）（图1），而UL与BLM中IMP3的表达率比较（P＞0.05）（详见表2）。

2.2 Ki-67、P53、Bcl-2在各组肿瘤组织中的表达

见表1所示，Ki-67、P53在UL、BLM及LMS中均有表达，且表达逐步增加，Ki-67、P53在三组病例中的表达差异均有统计学意义（P＜0.01）；Bcl-2在UL、BLM及LMS中亦均有表达且表达率逐步降低，Bcl-2三组病例中的表达差异有统计学意义（P＜0.01）（详见表2及图1～4）。

2.3 敏感度与特异度

在109例标本中，对LMS检测的敏感度分别为IMP3（54.3%）、Ki-67（85.7%）、P53（82.9%）、Bcl-2（42.9%）；而检测的特异度分别为IMP3（97.3%）、Ki-67（45.9%）、P53（51.4%）、Bcl-2（20.3%）（详见表3）。

3 讨论

胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3（IMP3）是近年来研究较频繁的一种癌胚蛋白，该蛋白可以通过促进肿瘤细胞的增生而发挥致癌作用，在多种肿瘤的诊断及评估中备受关注[5]。张著学等[6]研究者发现随着平滑肌肉瘤分化程度的降低及核分裂计数的增加，IMP3的阳性表达率伴随着升高，考虑其可作为鉴别诊断子宫平滑肌肉瘤的一种生物标记物。Ki-67作为特异性表达细胞增殖的一种核抗原，被认为是细胞增殖活性最可靠的检测指标之一[7]。有研究[8]证实Ki-67的阳性表达随着子宫平滑肌肿瘤从良性到恶性的变化而升高，由此认为子宫平滑肌肉瘤的形成可能与肿瘤细胞的增殖活性提高有关。在对人类肿瘤形成的研究中，P53被认为是与其相关性最高的抑制基因，能促进肿瘤细胞的增殖和转化，增加肿瘤的侵袭力[9]，当P53基因发生突变时，便会失去对肿瘤细胞生长、凋亡、DNA修复等的调控作用，由肿瘤抑制基因转变成癌基因，进而引起细胞的转化乃至于癌变。诸葛丽芳等[10]研究发现，子宫平滑肌肉瘤的病例中P53阳性表达明显高于子宫肌瘤，认为其可能与子宫平滑肌肉瘤的形成有关，并对子宫平滑肌肉瘤与子宫良性肌瘤鉴别有一定意义。Bcl-2是一种有重要的抗凋亡作用的线粒体内膜蛋白，在程序性细胞凋亡中起十分重要的作用[11]。有研究发现[12]Bcl-2在子宫肌瘤中具有较高的阳性表达，而在子宫肉瘤中表达最低，提示当细胞逐渐发生癌变时，Bcl-2的凋亡抑制作用在逐渐降低。

表1 IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2在子宫平滑肌肿瘤中的表达（例）

表2 IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2在UL、BLM、LMS中的表达差异

表3 IMP3、Ki-67、P53、Bcl-2蛋白在LMS组中的比较

图1 IMP3在LMS中的表达

图2 Ki-67在LMS中的表达

图3 P53在LMS中的表达

图4 Bcl-2在LMS中的表达

本研究发现IMP3在良性和交界性平滑肌病例中无阳性表达或少有表达，而在子宫平滑肌肉瘤中阳性率异常升高，与文献报道[6]相符合。此外，通过联合检测IMP3、Ki-67、P53及Bcl-2发现，子宫平滑肌肉瘤病例中IMP3、Ki-67、P53的阳性表达均明显增加而Bcl-2却显著降低，提示肿瘤细胞的增殖活性在逐步增强而凋亡进程受到抑制，当凋亡的速度明显高于增殖速度时，可能导致了肿瘤细胞的增殖和凋亡动态平衡被打破进而引起恶性肿瘤的发生。

此外，在35例LMS病例中，IMP3检测的敏感度（54.3%）仅仅略高于Bcl-2（42.9%），低于Ki-67、P53蛋白检测的敏感度（85.7%、82.9%），然而IMP3蛋白的特异度明显高于Ki-67、P53及Bcl-2蛋白。本研究认为该结果提示在对LMS病例的检测中，IMP3（相比较于Ki-67、P53及Bcl-2蛋白）具有较高的特异度而敏感度有限，但该结果尚需后续研究进行验证。

综上所述，IMP3蛋白对于鉴别良、恶性子宫平滑肌肿瘤具有较高的参考价值，可作为鉴别子宫平滑肌肉瘤的重要标记物，而联合检测Ki-67、P53及Bcl-2的表达更有助于提高诊断的准确率和预后的判断。