循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用价值

季福庆 张明坤 李梦斐

(西安市第三医院甲乳外科，陕西 西安 710018)

乳腺癌为女性群体中发病率较高的一种恶性肿瘤，属于全身性疾病，其肿瘤发展早期便可出现远处播散转移情况，而复发转移为致使该疾病患者死亡的重要原因[1]。有文献[2]指出，机体外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)与该疾病的转移以及复发具有相关性，而分析与检测CTCs对该疾病患者早期微转移、治疗方案选择、预后评估等方面均具有重要价值。基于此，本文旨在探讨CTCs与患者免疫组织化学指标、临床特征、不同分子类型的关联，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2016年4月至2018年3月在我院治疗的78例乳腺癌患者的临床资料组成观察组，同时，将同期于我院接受健康体检的30例健康志愿者的资料组成对照组，入选者均为女性。观察组年龄24～75岁，平均(49.81±3.27)岁；绝经前46例，绝经后32例。对照组年龄25～75岁，平均(50.07±3.29)岁；绝经前17例，绝经后13例。观察组纳入标准：通过术后病理证实或乳腺肿块空芯针穿刺活检病理检查证实为浸润性乳腺癌者；影像学资料以及临床资料完整者；将上腹部与胸部CT检查显示无肝、肺转移。排除标准：合并其它恶性肿瘤病史者；凝血功能障碍者；先天性心脏病者；肝肾功能衰竭者；近期接受内分泌外相关治疗者；表达障碍或精神疾病者。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 (1)采集两组7.5 mL肘静脉血，加入肝素进行抗凝操作，冷却10 min，加入5 mL磷酸缓冲盐溶液(PBS)稀释，再将3 mL淋巴细胞分离液(FICOLL配制)加入，离心，将血浆去除，加入PBS液2 mL，混匀并离心，将上清液去除，将BD公司(美国)提供的波形蛋白抗体、CD45、细胞角蛋白抗体以上皮细胞黏附分子抗体加入，各0.5 μL，混匀，避光，时长约30 min，而后离心进行检测。经流失细胞分析术分析，通过侧向反散射对前向散射作二维散射点，而后设R1门，选取R1门细胞，以向反散射对CD45-PE作为二维散射点，并选取CD45(-)细胞，以侧向反散射对细胞角蛋白作二维散射点，并选取细胞角蛋白(+)细胞，设置为R2门。而后取R2门细胞，以波形蛋白对上皮细胞黏附分子作二维散射点，取波形蛋白(+)与上皮细胞黏附分子(+)作为R3门，生成散点图，分析数据。将波形蛋白(+)、上皮细胞黏附分子(+)、CD45(-)、细胞角蛋白(+)定义为阳性，将CTCs≥5/7.5 mL视作外周血为转移阳性。(2)通过免疫组织化学法测定孕激素受体(PR)、雌激素受体(ER)、P53、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、Ki-67表达。当原发肿瘤细胞核染色不低于1%时，认为PR或ER视作阳性；HER-2(3+)视作阳性，HER-2(+或0)视作阴性，而HER-2(2+)应进行荧光原位杂交。

1.3统计学方法 采用SPSS18.0软件进行数据处理，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组CTCs阳性表达情况 观察组中检出CTCs阳性30例，阳性率为38.46%(30/78)，对照组未发现CTCs阳性表达，两组比较差异有统计学意义(χ2=15.976，P=0.000)。

2.2不同特征患者CTCs阳性表达情况 不同年龄及不同病理类型乳腺癌患者间CTCs阳性表达对比无明显差异(P>0.05)；不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs阳性表达对比，差异有统计学意义(P<0.05)；转移性乳腺癌患者(M1期)CTCs阳性表达显著高于非转移性乳腺癌患者(M0期)，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同特征患者CTCs阳性表达对比[n(%)]

2.3不同分子类型、免疫组织化学指标患者的CTCs阳性表达情况 不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表达的乳腺癌患者的CTCs阳性表达对比无明显差异(P>0.05)；并且不同分子分型的乳腺癌患者的CTCs阳性表达对比也无差异(P>0.05)。见表2。

表2 不同分子类型、免疫组织化学指标患者的CTCs阳性表达对比[n(%)]

续表 表2

3 讨 论

与传统影像学检查以及组织学检查比较，CTCs检测具有较高的敏感性以及可重复性，可作为临床实时液体活检检测的重要标志物，利于及早提供有效的评估信息[3]。CTCs在检测过程中，基本包括细胞的检测以及富集，其中，检测方法包括细胞检测、核酸检测技术、流式细胞术以及免疫细胞化学法；富集方法则包括密度梯度离心法、黏附分离法以及免疫磁珠分离法等[4]。本文结果显示，乳腺癌患者CTCs阳性率为38.46%，明显高于健康体检者。

有文献[5]指出，30.00%左右的早期乳腺癌患者术后很可能于辅助治疗中受益，而在晚期转移乳腺癌患者的外周血中可检测到CTCs，认为其在临床分期方面具有一定指导意义，利于临床TNM分期。本文结果显示， M1期CTCs阳性表达显著高于M0期，且不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs阳性表达均存在差异性，与上述研究结果相符。雌激素以及孕激素的表达为该疾病重要的预后因素，同时也是预测激素治疗效果的有效指标[6]。P53基因为判断患者预后的重要指标之一；Ki-67属于核抗原，与增殖细胞相关，其功能同有丝分裂存在密切关联，而Ki-67标记为处于人体增殖周期中的一种细胞，其标记阳性率越高，提示组织分化越差，肿瘤生长越快，其对化疗也愈加敏感，故预后较差[7]。除此之外，乳腺癌内分泌治疗主要根据PR与ER表达水平，靶向治疗则多依据HER-2表达水平，乳腺癌分子亚型将影响患者的预后以及生存情况[8]。有研究表明，CTCs阳性率与分子分型、HER-2、PR、ER、病理分级以及肿瘤大小均无明显相关性，但也有研究认为CTCs计数与分子分型、远处转移以及肿瘤分期有关，但与HER-2、PR、ER、Ki-67无相关性[9-10]。而本文结果显示，不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表达患者以及不同分子分型患者间CTCs阳性表达均无明显差异。

综上所述，CTCs与乳腺癌患者肿瘤细胞转移以及TNM分期存在关联，利于指导临床对该疾病进行诊断，并可依据检测结果评估治疗效果与预后。