一例猪流行性腹泻的诊断

陈 静 ，何广霞，麻胜红，路美兰，曾智勇＊，梁海英，张爱琼，何小莉，咸 文，陈 娟，吴好叶

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea，简称PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的，一种以患病猪食欲下降、呕吐及严重腹泻等为主要临床特征的急性、接触性肠道传染性疾病[1]。该病在寒冷季节多发, 特别是冬春交替时节。PEDV属于冠状病毒科冠状病毒属，猪舍的环境温度会对猪体内病毒的繁殖产生影响，在8～12℃比30～35℃的环境中所产生的毒力效价高, 这可能是本病在寒冷季节流行的一个重要因素[2]。PEDV仅发生于猪, 且不同年龄阶段的猪只均易感本病。症状的轻重随病猪年龄的大小而有差异, 年龄越小, 则其症状越重。感染发病的潜伏期各猪群不同，一般新生仔猪在24～36 h，育肥猪为48 h以上[3]。病猪是本病传播的主要传染源，主要感染途径为消化道，临床症状和病理变化与猪传染性胃肠炎极为相似。仔猪感染PEDV后，病猪的体温正常或稍偏高,精神不振,常出现脱水、呕吐和水样腹泻，患病猪体重下降，皮肤因脱水而干燥，被毛粗乱无光泽，继而发病猪食欲下降，严重脱水等临床症状[4]。本病发病急且死亡率高，主要破坏猪小肠上皮细胞，从而引起肠绒毛脱落，感染病猪多以仔猪为主，极易造成新生仔猪迅速脱水死亡。该病毒于1980年在我国分离出，近来该病已演化为世界流行趋势且已成为全球性危害。目前，PED已经成为导致世界多个养猪国家仔猪早期死亡的疫病之一,对世界养猪产业造成较大的经济损失[5]。

2018年1月，铜仁万山某猪场部分仔猪出现呕吐、消瘦及腹泻等临床症状，其中仔猪出现腹泻的症状尤为严重，最终病仔猪脱水死亡。这给猪场带来了严重的经济损失，为查明仔猪腹泻死亡原因，该猪场特将5头病死仔猪、3份母猪粪样和1份发病仔猪肠内容物进行实验室送检。现将检测过程报告如下：

1 临床及发病特征

据现场人员描述，该猪场患病仔猪被毛凌乱，精神状态不佳, 进食量显著降低。体温较为正常、有时稍高。同时出现呕吐、水样腹泻或是呕吐与腹泻并存等临床症状，排泄淡黄色恶臭稀粪。病猪发病急、病程短，部分新生仔猪在出生3 d左右因腹泻脱水而死亡。

2 病理解剖特征

对送检病死仔猪进行剖检（见图1），可见病猪胃内空虚无食物，内有黄色液体，胃底黏膜有轻度充血。剖检病猪的主要病变位置在小肠，肠扩张，小肠肠系膜充血。内容物稀薄如水，呈黄色且伴有泡沫。肠壁充血变薄，肠系膜充血且淋巴结出现水肿现象，小肠绒毛缩短。

3 实验室检测

取适量的脾、肾、淋巴结等组织进行混合；取送检病死猪肠内容物与送检3份仔猪肠内容物混合；取3份母猪粪样混合，使用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取试剂盒，分别提取混合组织/肠内容物核酸/粪样的RNA/DNA，应用一步法RT-PCR/PCR试剂盒，根据相关送检要求对混合组织核酸进行猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪伪狂犬病毒（PRV）检测；对仔猪混合肠内容物和母猪粪样进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。其中PEDV反应总体系（25.0 µL）：2×One step buffer 12.5 µL，10 µM PCV3 primer（F1/R1）各0.5 µL，核酸DNA模板4.5 µL，ddH2O 6.0 µL，一步法酶1.0 µL。PCR反应程序为：50 ℃ 40 min；94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共37个循环；72 ℃ 进行终延伸10 min。

RT-PCR/PCR 结束后，取 7 µL的PCR产物进行琼脂糖凝胶（1.5%）电泳检测，结果显示，病死仔猪混合组织中CSFV、PRRSV和PRV均呈阴性；混合粪样和肠内容物中PEDV均呈阳性（见图2）。

4 讨论

根据病原检测结果表明，送检病死仔猪及母猪粪样中均存在PEDV，说明该猪场中母猪和仔猪均有感染PEDV的情况。PED是猪养殖过程中十分常见的病毒性疾病之一，可引起猪的急性传染性肠道疾病，常发生于幼龄仔猪，病仔猪出现精神萎靡、食欲减退等现象，长期持续性腹泻表现为明显消瘦、被毛粗乱，严重腹泻仔猪排水样稀粪，常因脱水而死。该病季节性非常强，春冬多发，不同种类及不同日龄的猪均可感染，死亡率可高达100%[6]。对于该病，应当及时采取有效地防治措施。

4.1 遵循预防为主，防大于治的原则

图1 病死仔猪内脏

图2 病原RT-PCR/PCR产物凝胶电泳检测结果

对于PED，目前没有针对该病的特效治疗药物，故猪场应以预防为主。种猪带毒散毒是引起新生仔猪感染的主要途径。首先，发生疫情时, 疫苗免疫是预防猪传染病的有效方式，制定合理的疫苗免疫方案进行疫苗免疫接种，重点加强母猪的PED疫苗免疫。对全场生猪进行紧急免疫，可有效降低猪群发病率和病死率，这也是亚洲国家PED防疫控制的主要方式之一[7]。其次，加强场地和环境消毒。在冬、春多发季节，应保证猪舍干燥、整洁，做到保暖防寒，同时做好母猪进入产房前的粪便排毒情况检测以及进入产房时针对母猪的清洁消毒，采取综合性防治措施，重视免疫预防，加强对猪只的饲养管理[8]。

4.2 患病后及时采取治疗措施

若PED在猪场已发生，则建议猪场饲养管理人员立即停止饲喂饲料，液体类饲料可能会加剧生猪的腹泻，因此尤其注意液体类饲料的饲喂；针对已感染的病猪要及时为其提供干净的饮水和易消化的饲料，尽可能的控制对病猪饲料的投喂量，及时对健康猪与病猪进行隔离；对病死猪、粪尿排泄物及污染物做无害化处理，可有效控制本病的传播。可采取对症治疗措施：病初，可对患病仔猪采用口服补液盐，以纠正病仔猪体内的酸碱平衡。必要时可适当添加土霉素碱或诺氟沙星或阿莫西林进行灌服，每天4～5次；肥猪群和母猪可采用青链霉素加安痛定肌注，脱水严重的挂水补液；对于公、母猪可紧急免疫2头份瑞普生物“维乐复康”[9]；在调理肠道菌群的同时，保持栏舍干燥，全进全出，做好消毒工作。