液态奶中的三聚氰胺检测方法

曹爱巧 谭磊 吴雯娟 黄婷 罗燕

摘  要：研究建立了使用液相色谱串联质谱法测定液态奶中的三聚氰胺检测方法。用二乙胺乙腈水溶液超聲提取液态奶中的三聚氰胺，离心后进行过滤，滤液不需要净化，直接用氮气吹干，20%甲醇溶液复溶。验证结果满足SN/T 0001-93的要求，具有较好的精密度和准确度，该方法具有特异性强、前处理简单等特点，适合液态奶中三聚氰胺的定量测定。

关键词：液态奶;三聚氰胺;液相色谱串联质谱

中图分类号：S859.84 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2019）05-0056-03

三聚氰胺俗称密胺、蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，常被用作化工原料[1]。三聚氰胺对人体有害，微溶于水，无味，白色单斜晶体，可溶于甲醇、甲醛和乙酸等，不溶于丙酮和醚类，不能作为食品添加剂使用或是用于食品加工。但是，不法商人为了提高食品或饲料检测中蛋白质含量指标，借助三聚氰胺的高含氮量，把其掺进食品或饲料中[2]。非法添加三聚氰胺会对人的肾脏和膀胱等器官产生有害作用，引发结石[3]。中华人民共和国国家卫生健康委员会、工业和信息化部和农业农村部等五部委联合发布公告，制定了三聚氰胺在乳与乳制品中的临时管理限量值，其中规定液态奶（包括原料乳）、奶粉和其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的产品一律不得销售。含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量为2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的产品一律不得销售[4-5]。

三聚氰胺在高温下可能会分解，放出氰化物，在强酸或强碱环境下，还会发生水解。测定三聚氰胺的方法有高效液相色谱法[6-7]、气相色谱质谱法[8]和高效液相色谱串联质谱法，高效液相色谱法的灵敏度较低，且无法提供被检测物的结构信息，一般常作为筛选方法。气相色谱质谱法和高效液相色谱串联质谱法能够进行确证分析。中华人民共和国国家标准GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氧胺检测方法》规定了高效液相色谱法、气相色谱质谱法和高效液相色谱串联质谱法测定三聚氰胺的方法，但均需对提取液进行固相萃取净化。本文旨在对液态奶中三聚氰胺高效液相色谱串联质谱法进一步探讨。本研究使用二乙胺乙腈水溶液超声提取液态奶中的三聚氰胺，离心后进行过滤，滤液不需要净化，直接用氮气吹干，20%甲醇溶液复溶。消除牛奶基质的影响，增强了抗干扰能力，降低了检出限和提高了定量重现性。该法较为简便，缩短了分析时间，降低了成本。

1  试验部分

称取2.00 g试样，置于15 mL刻度试管中，加入7 mL乙腈，涡旋振荡1 min，加入1 mL二乙胺，用水定容到10 mL，涡旋振荡1 min，超声提取15 min，8 000转/min冷冻离心8 min（4 ℃），过滤后备用。移取     2 mL在80 ℃下氮气吹干，1 mL的20%甲醇溶液复溶，供液相色谱串联质谱上机测定。

2  结果与讨论

2.1 标准曲线

按方法条件设置仪器参数，配制一系列浓度的标准样品溶液（0.01 μg/mL、       0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL和  0.5 μg/mL），待仪器基线稳定后，对系列标准样品溶液进行测定，绘制标准曲线，其相关系数r=0.998592。

2.2 方法检出限确定[9]

以空白牛奶样品为基质，一个阳性添加浓度C（10.0 μg/g），按照方法进行前处理，进行上机测定，测得信噪比S/N=19.49，可计算检出限为0.0015 μg/g。计算公式如下：

检出限（Method Detection Limit，MDL）（μg/g）=3C/（S/N）

2.3 方法精密度和回收率试验

以空白牛奶样品为基质，进行加标回收试验，加标浓度分别为0.01 mg/kg、0.05 mg/kg和0.2 mg/kg。将加标样品和空白样品按方法进行前处理[9]，上机测试，结果见表1、表2和表3。

2.4 结论

经过上述试验验证，本方法用于液态奶中三聚氰胺残留的测定，一系列浓度的标准样品溶液（0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL和0.5 μg/mL）的标准曲线相关系数r=0.998592;方法检出限确定为0.001 5 μg/g，符合标准方法的要求;0.01 mg/kg、0.05 mg/kg和0.2 mg/kg   加标试验变异系数分别为5.07%、2.39%和4.82%，加标试验回收率范围分别为88.10%～100.50%、97.86%～104.54%和87.79～102.74%。验证结果满足中华人民共和国国家标准SN/T 0001-93的要求，具有较好的精密度和准确度，该方法具有特异性强、前处理简单等特点，适合液态奶中三聚氰胺的定量测定。

参考文献：（9篇，略）