金银花绿原酸提取物的抑菌作用研究

苏悦 于海玲 邵锦莹 袁怡雯 粟敏

[摘要]目的：金银花绿原酸提取物的抑菌作用研究。方法：取大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌新鲜培养物接种至营养肉汤培养基，37℃培养18-24h;分别接种至三个营养肉汤琼脂斜面固体培养基保藏，37℃培养18-24h;将这三种菌种接种到液体培养基中，进行振荡培养，用移液枪移取100ul菌悬液用三角玻璃涂布棒均勻涂布于90mm的平板上，将含有28mg/ml绿原酸的滤纸片贴在已接种待检茵的琼脂平板上，在37℃培养3-5d，观察菌种的生长情况，记录数据，测量抑菌圈直径。结果：同时采用纸片法，测试了金银花绿原酸提取物的抑茵活性，结果发现其对大肠埃希茵、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性强弱为大肠埃希菌>金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌。结论：金银花绿原酸提取物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌作用

[关键词]金银花绿原酸提取物 细菌 药纸片 K-B法

绿原酸（Chlorogenic acid）是由咖啡酸（Caffeic acid）与奎尼酸（Quinic acid）组成的缩酚酸，异名咖啡单宁酸，化学名：3-0咖啡酰奎尼酸（3-O-Caffeoyl quinic acid），分子式：C16H1809，分子量：354.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。中药成分CRA/IRC广泛存在于植物中，以金银花，杜仲中的含量较高，具有广泛的药理作用，已有文献报道其具有体外抗炎、抗菌及抗病毒作用：本研究通过提取金银花有效成分绿原酸，检验绿原酸对常见三种控制菌的抑菌作用，以了解金银花提取物绿原酸的抗菌效果，为金银花抗菌药用价值的开发奠定实验理论基础。

一、对象与方法

（一）实验细菌

以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为实验对象，将细菌培养于长沙医学院生命科技楼二楼实验房，培养箱中37℃恒温培养。

（二）实验内容

纯度98%金银花绿原酸提取物于冰箱（2℃）保存;取大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌新鲜培养物接种至营养肉汤培养基，37℃培养18～24h;分别接种至三个营养肉汤琼脂斜面固体培养基保藏，37℃培养18～24h;将这三种菌种接种到液体培养基中，进行振荡培养，用移液枪移取100ul菌悬液用三角玻璃涂布棒均匀涂布于90mm的平板上，将含有28mg/ml绿原酸的滤纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，在37℃培养1d，观察菌种的生长情况，记录数据，测量抑菌圈直径，同法平行操作3次。

（三）观察指标

将贴好药纸片的平板置37℃培养3～5d后，用游标卡尺取抑菌圈直径

（四）统计分析

用十字交叉法测量抑菌圈直径，并观察抑菌圈透明程度和边缘整齐程度。3～5d后测量抑菌圈的直径。实验设3次重复。

二、结果

同时采用纸片法，测试金银花绿原酸提取物的抑菌活性，结果发现其对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性强弱为大肠埃希菌>金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌。具体见表1。

三、讨论

金银花具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆等功能，是我国传统的中药植物。金银花中的主要化学成分黄酮类、有机酸类、三萜皂苷类、挥发油等，其中主要活性成分有机酸中的绿原酸（Chlorogcnicacid）。绿原酸对大肠癌、肝癌和喉癌具有显著的抑制作用，被认为是癌症的有效化学防护剂;真菌感染是一种机会性感染疾病，它攻击免疫低下宿主：研究发现，金银花中绿原酸对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果与庆大霉素相似：庆大霉素虽对一些致病菌等具有强抑菌作用，但它对人体有肾毒性、耳毒性、过敏反应等：因此，通过实验提取金银花有效成分绿原酸，检验绿原酸对常见五种控制菌的抑菌作用，以了解金银花提取物绿原酸的抗菌效果，为金银花抗菌药用价值的开发奠定实验理论基础。