彭 羽 华 莹
1.贵州省贵阳市花溪区动物卫生监督所,贵阳 550025;2.贵州省动物疫病预防控制中心,贵阳 550018
选择贵州省贵阳市辖区范围内具有代表性的4家机械化生猪屠宰厂,随机采集这4家机械化生猪屠宰厂出厂的猪肉及内脏器官样本,置于0~4℃保温箱中,12 h内送至贵州省进出口检疫检验局测定中心进行盐酸克仑特罗测定。
称取样本5.0 g,用移液管向样本中加20 mL 0.2 moL/L(pH=5.3)乙酸铵缓冲液,涡旋混匀器3 000 r/min振荡1 min,用微量加样枪向样本中加0.1 mL 100 μg/mL 内标 Clen-D9 与 100 μL β-盐酸葡萄糖酸苷酶/芳基硫酸酯酶,圆周震荡摇床500 r/min振荡40 min。37℃恒温培养箱放置16 h;取出样本,涡旋混匀器3 000 r/min振荡30 s,在超声清洗器超声处理1 min,再用低速冷冻离心机4℃1 000 r/min离心10 min,小心吸取上清液4 mL,放入干净离心管Ⅱ中;用0.2 mol/L高氯酸将离心管Ⅰ中残液调pH至1,涡旋混匀器3 000 r/min振荡30 s,低速冷冻离心机20℃ 1 000 r/min离心3 min。若离心管出现沉淀,取上清液备用,弃沉淀。用10 mL饱和NaOH调上清液的pH至11,混匀。
1)提取有机相:向上述液体中加10 mL饱和NaCl溶液与10 mL异丙醇:乙酸乙酯(6∶4),3 000 r/min振荡5 min,1 000 r/min离心10 min,取上层有机相于试管。
2)再提有机相:在上述所剩清液中加5 mL异丙醇:乙酸乙酯(6∶4),3 000 r/min振荡30 s,1 000 r/min离心5 min,取上层有机相,合并2次所取有机相。
3)氮吹浓缩:将上述有机相45℃水浴,氮气吹干;向试管中加5 mL乙酸铵缓冲液(0.2 mol/L pH=5.3),超声混匀,使残渣充分溶解,备用。
4)盐酸克伦特罗的纯化:将MCX阳离子交换小柱连接真空过柱装置,将上述残渣溶液上柱,依次用5 mL甲醇,5 mL去离子水进行活化,然后加5 mL样品,再用3 mL去离子水,3 mL 2%甲酸(FA)进行淋洗,5%氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液后45℃氮气吹干,加20%乙腈定容至2 mL,过滤后收集样本待检。然后参照GB/T22286-2008进行盐酸克仑特罗含量的测定。
采用液相色谱串联质谱法对贵阳市辖区内4家机械化生猪屠宰厂出厂生猪肉品样本进行盐酸克伦特罗残留量检测,结果如表1所示。根据GB/T22286-2008,鲜猪肉及内脏中盐酸克伦特罗最小检出量为0.5 μg/kg。从上述贵阳市机械化生猪屠宰厂抽样检测的结果可见,600份猪肉及内脏样本中,可检出含有微量盐酸克伦特罗(0.01~0.08 μg/kg)的有38份样本,检出率为6.33%,但检测值明显小于国家标准所限的0.5 μg/kg。因此,贵阳市机械化生猪屠宰厂出厂猪肉的盐酸克伦特罗残留量未超标。
表1 贵阳市屠宰场猪肉及内脏样品中盐酸克伦特罗残留量测定结果
盐酸克伦特罗属β-兴奋剂类激素,是一种常见的肾上腺素类神经兴奋剂,若在生猪养殖生产中大剂量使用可明显提高饲料转化率和胴体瘦肉率,因而俗称“瘦肉精”。医学上使用常见于急救和肺科病的治疗,当使用剂量达治疗剂量的5~10倍时,可激发组织和脂肪的B-肾上腺素受体,使脂肪激酶活化,促进甘油三酯分解,增加肌肉蛋白沉积,有效提高动物的瘦肉率。人食用残留在食品中的盐酸克伦特罗后会直接危害健康,食用过量会出现恶心、心慌、呕吐、头疼以及肌肉振颤等症状,心脏病、高血压、甲亢和前列腺肥大等疾病患者食用过量的盐酸克仑特罗的危害更大,出现严重的临床症状,甚至造成死亡。本调查对600份猪肉及内脏样本进行检测,检出38份猪肉样本中存在微量盐酸克伦特罗残留,但均小于国家标准所限的盐酸克伦特罗最小检出量,说明贵阳市辖区内4家机械化生猪屠宰厂生产上市的猪肉没有盐酸克仑特罗超标的情况,抽样涉及的屠宰厂每天向贵阳市辖区市场供应的猪肉约占贵阳市猪肉总消费量的70%。通过连续2年的检测结果分析可知,贵阳市范围内市场上销售的由当地屠宰厂供应的猪肉出现盐酸克仑特罗超标的可能性极低。