ＨＰＬＣ法测定止眩胶囊中丹酚酸Ｂ的含量

郭钦安

基金项目：

作者简介：郭钦安（1983-），男，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药材、中成药质量控制。E-mail：guoqinan123@163.com

通信作者：

【摘 要】 目的：建立止眩胶囊制剂中丹酚酸B的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法：色谱柱waters xterra C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇：乙腈（3∶[KG-*3/5]1）-1.0%甲酸溶液（34∶[KG-*3/5]66），流速1mL/min，柱温：30℃，检测波长286nm。结果：丹酚酸B的进样量在92.5～1850ng范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999;平均回收率98.64%，RSD为1.47%。结论：所建立的方法准确、可靠、专属性强，可用于止眩胶囊制剂的质量控制。

【关键词】 止眩胶囊;丹酚酸B;高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）7-0031-02

Abstract：Objective To establish a method for the determination of salvianolic acid B in zhixuan capsule. Methods HPLC and waters xterra C18 column （4.6 mm×250 mm， 5μm） were adopted，with methanol： acetonitrile （3∶[KG-*3/5]1） - 1.0% formic acid（34∶[KG-*3/5]66） as the mobile phase at the flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was set at 30 ℃，and the UV detection wavelength was 286 nm.Results the injection amount of salvanolic acid B in the range of 92.5 ～ 1850ng had a good linear relationship with the peak area， r=0.9999. The average recovery was 98.64% and the RSD was 1.47%.Conclusion the method is accurate， reliable and specific， and can be used for the quality control of zhixuan capsule.

Keywords：Zhixuan Capsule; Salvianolic Acid B; HPLC

止眩膠囊由丹参、当归、延胡索、鸡血藤、莪术、蒲公英、石决明、薏苡仁、夏枯草、泽泻、续断、桃仁、醋三棱、川芎等14味药物组成，具有活血化瘀、通脉止眩等功效，适用于原发性高血压。该胶囊为医院制剂，原有质量标准较低，不能全面反映制剂质量状况，为更好地控制该制剂的内在质量，提高标准，拟增加含量测定等内容，方中以丹参为君药，走血分、通血脉，攻擅活血化瘀，现代医学研究表明，丹参具有扩张冠状动脉，增加冠状血流量，促进毛细管血管网开放，扩张血管等作用[1]。基于此，笔者选择丹参作为控制指标，建立了其有效成分丹酚酸B的含量测定方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪（2998二极管阵列检测器，美国Waters）;AUW120D型电子分析天平（日本岛津）;BRANSONIC 超声波清洗机（美国BRANSON）;Medium-s300超纯水器（四川优普超纯科技有限公司）。

1.2 材料 丹酚酸B对照品（批号：111562-201514，中国食品药品检定研究院）;止眩胶囊（批号：180101、180102、180103，自制）;乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品1.85mg，置10mL棕色量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀，制得每1mL含0.185mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率150W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.1.3 阴性对照溶液的制备按处方比例依法配制除丹参以外的阴性制剂，精密称取适量，按“2.1.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2 色谱条件 色谱柱：Waters xterra C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：甲醇乙腈（3∶[KG-*3/5]1）-1.0%甲酸溶液（34∶[KG-*3/5]66）;检测波长：286 nm;流速：1 mL/min;进样量：10μL。

2.3 含量测定方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图（如图1所示）。试验表明，阴性对照溶液的色谱峰中，在丹酚酸B对应的位置上无干扰，专属性较强。

2.3.2 线性关系的考察 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL至2mL量瓶中，用75%甲醇定容，得不同浓度对照品溶液，分别进样10μL，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，进样量ng为横坐标作图，得一直线回归方程：Y=1 102.1X-58097，r=0.999 9，表明丹酚酸B在进样量92.5～1 850 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 取“2.1.1”项下对照品溶液，进样10μL，连续进样6次，测定峰面积。结果丹酚酸B峰面积积分值RSD值为0.58%（n=6），表明仪器的精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取批号180101的止眩胶囊样品，称取6份，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备溶液，测定峰面积积分值，计算平均含量为5.18mg/g，RSD值为0.49%（n=6）。表明本方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，在室温下放置，于0、2、4、6、8、10h分别进样10μL，并测定峰面积，结果RSD为1.32%（n=6）。表明供试品溶液在10h内基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品（批号180101：5.18 mg/g）6份，分别精密加入丹酚酸B对照品适量，按“2.1.2”项下方法制备溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定 取不同批号止眩胶囊3批（批号：180101、180102、180103），按“2.1.2”项下方法制备溶液，进样测定，记录峰面积，计算样品中丹酚酸B的含量，分别为5.18 mg/g、5.20 mg/g、5.16 mg/g。

3 讨论

丹参为本处方的君药，丹酚酸B为丹参的主要有效成分[2-3]，故选择丹酚酸B作为控制本品质量的指标成分。

在流动相的选择上，考察了乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶[KG-*3/5]78）[2]，乙腈-甲醇-甲酸-水（10∶[KG-*3/5]30∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]59）[3]和甲醇：乙腈（3∶[KG-*3/5]1）-1.0%甲酸溶液（34∶[KG-*3/5]66）的流動相体系，通过比较出峰时间、峰形、拖尾因子、分离度等，选择甲醇乙腈（3∶[KG-*3/5]1）-1.0%甲酸溶液（34∶[KG-*3/5]66）为本方法的流动相体系。

在提取溶剂及提取方式的选择上，考察了不同的提取溶剂（70%乙醇[2]、75%甲醇[4]、甲醇[5]）以及提取方式（加热回流、超声处理、索氏提取）对所测组分提取效果的影响，综合考虑提取率以及操作的便捷性，确定提取方式为75%甲醇超声处理30min。

上述三批止眩胶囊中丹酚酸B含量测定来看，结果重现性较好，表明本文所建立的方法适用于该制剂的质量控制，对于原药材、饮片的选择，制剂的生产，存储环境的控制以及有效期的考察等方面可以起到数据支撑的作用。

参考文献

[1]刘慧.丹参有效成分在心血管药理学研究中的应用[J].现代中西医结合杂志，2008，17（34）：5397.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[3]王洋，陈涛，潘霖，等.液质联用技术在丹参成分分析中的应用[J].中草药，2014，45（23）：3494.

[4]张黎莉，倪健，原素敏，等.高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊中丹酚酸B的含量[J].北京中医药大学学报（中医临床版），2007，14（2）：39.

[5]张永东，钟颖，谭鸿毅，等.高效液相色谱法测定复方丹参喷雾剂中丹酚酸B和丹参酮IIA 的含量[J].中南药学，2010，8（6）：435.

（收稿日期：2019-01-18 编辑：陶希睿）