鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)抗体效价与鸡攻毒保护相关性试验

2019-06-19 01:28藏玉婷刘鑫莹李应鹤
饲料博览 2019年4期
关键词:保护率腺病毒新城疫

柴 华,宋 扬,李 贽,藏玉婷,刘鑫莹,李应鹤,武 啸

(哈药集团生物疫苗有限公司研发中心,哈尔滨 150069)

1 试验材料

1.1 疫苗

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株):批号:201501,由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

1.2 检验用强毒

鸡新城疫病毒北京强毒株(CVCC AV1611株),批号NDV-AV1611-QD(E1,病毒含量:107.63ELD50/0.1 mL);H9亚型禽流感病毒TJ株,批号:AIV(H9)-TJ-QD-01(E1,病毒含量:108.63EID50/0.1 mL);Ⅰ群4型禽腺病毒HY株,批号:FAV-HY-QD-01(F2,病毒含量:107.26TCID50/0.1 mL),均由哈药集团生物疫苗有限公司制备、鉴定、保管和供应。

1.3 血凝抑制试验抗原

鸡新城疫病毒血凝抑制试验抗原:抗原批号:NDV-La Sota-K-06,HA效价1∶1024,规格:2.0 mL·瓶-1,由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

H9亚型禽流感病毒血凝抑制试验抗原,抗原批号:AIV(H9)-TJ-K-01,HA效价1∶512,规格:2.0 mL·瓶-1,由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

Ⅰ群4型禽腺病毒琼脂扩散试验抗原,抗原批号:FAV-HY-K-01,琼扩效价1∶2,规格:2.0 mL·瓶-1,由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

1.4 SPF鸡

SPF鸡由哈药集团生物疫苗有限公司五常SPF鸡场提供。

1.5 注射器

注射器购自上海达美医用塑料厂。

2 试验方法

2.1 新城疫病毒抗体效价与攻毒保护关系试验

将30日龄SPF鸡60只,随机分成6组,每组10只,1~5组分别颈部皮下免疫三联灭活疫苗10、20、50、150µL·只-1和0.5 mL·只-1,6组不免疫作为攻毒对照。各组免疫后21 d,分别采血,分离血清,测定新城疫病毒HI效价。根据效价重新分组,连同对照组各肌肉注射新城疫强毒AV1611株病毒液,0.1 mL·只-(1含105.0ELD50),观察14 d,记录试验鸡的死亡情况,计算攻毒保护率。

2.2 禽流感病毒(H9亚型)抗体效价与攻毒保护关系试验

将21日龄SPF鸡60只,随机分成6组,每组10只,1~5组分别颈部皮下免疫三联灭活疫苗0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mL·只-1;6组不免疫作为攻毒对照。各组免疫后21日,分别采血,分离血清,测定禽流感病毒(H9亚型)HI效价。根据效价重新分组,连同对照组各静脉注射H9亚型禽流感病毒TJ株0.1 mL(含107.0EID50),攻毒后第5日,采集每只鸡的泄殖腔拭子进行病毒分离。将每只鸡的样品经尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚。孵育观察5日,无论死胚、活胚均应测定鸡胚液血凝价,计算攻毒保护率。

2.3 Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价与攻毒保护关系试验

将21日龄SPF鸡40只,随机分成4组,每组10只,1~3组分别颈部皮下免疫三联灭活疫苗0.2、0.5和1.0 mL·只-1;4组不免疫作为攻毒对照。各组免疫后21日,分别采血,分离血清,测定Ⅰ群4型禽腺病毒琼扩抗体效价。根据效价重新分组,连同对照组各肌肉注射Ⅰ群4型禽腺病毒HY株病毒液,每只0.1 mL(含106.0TCID50)。连续观察10日,记录结果,计算攻毒保护率。

3 试验结果

3.1 新城疫病毒抗体效价与攻毒保护关系试验

新城疫病毒抗体效价与攻毒保护关系试验结果见表1。

由表1可知,新城疫病毒HI抗体效价与攻毒保护率呈正相关:HI≤2log2,攻毒保护率为0;HI=3log2,攻毒保护率为57.1%;HI≥4log2,攻毒保护率为100%。

3.2 禽流感病毒(H9亚型)抗体效价与攻毒保护关系试验

禽流感病毒(H9亚型)抗体效价与攻毒保护关系试验结果见表2。

由表2可知,禽流感病毒(H9亚型)HI抗体效价与攻毒保护率呈正相关:HI≤3log2,攻毒保护率为0;HI=4log2,攻毒保护率为83.3%;HI=5log2,攻毒保护率为88.9%;HI≥6log2,攻毒保护率为100%。

3.3 Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价与攻毒保护关系试验

Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价与攻毒保护关系试验结果见表3。

由表3可知,Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价与攻毒保护率呈正相关:当抗体琼扩效价为1∶1时,攻毒保护率为90%;当抗体琼扩效价为1∶2时,攻毒保护率为100%;当抗体琼扩效价为1∶4时,攻毒保护率为100%。

表1 新城疫病毒抗体效价与攻毒保护关系试验结果

表2 禽流感病毒(H9亚型)抗体效价与攻毒保护关系试验结果

表3 I群4型禽腺病毒抗体效价与攻毒保护关系试验结果

4 结论

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)各组抗体效价与攻毒保护均呈正相关,疫苗各组抗体效价可代替动物效检试验。根据本试验结果及我国兽药标准,将三联灭活疫苗血清标准确定为:30日龄鸡皮下注射疫苗20µL(1/25羽份),21日后测定新城疫病毒HI抗体效价的几何平均值应≥1∶16;21日龄鸡皮下注射疫苗0.5 mL,21日后测定禽流感(H9亚型)病毒HI抗体效价的几何平均值应≥1∶128;Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价≥1∶1[1-4]。

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