气相色谱-质谱联用分析八仙汤及其组方药材挥发性成分

蒋燕霞，林榜建，徐瑞超，肖礼娥，唐富丽，董自亮

（太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，重庆 408099）

八仙汤出自《圣济总录》卷六十五，由桑白皮，桔梗，麻黄，茯苓，柴胡，陈皮，苦杏仁、马兜铃8味药材组成，主治久患气嗽，发即奔喘，坐卧不安，喉中气欲绝。目前对于八仙汤中单味药的成分和药理活性研究较多，而对于整方的研究特别是物质基础和配伍效应研究则无相关报道。

为探讨八仙汤组方药材中挥发性成分在组方中的作用，寻找八仙汤作用的物质基础，本研究采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对八仙汤中挥发性成分进行分析研究，并模拟相同条件对各单味药材进行分析比较，以为八仙汤的物质基础与配伍机理研究奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 7890A-5975C气相色谱-质谱联用仪，包括Agilent GC-MSD工作站，HP型毛细管柱（250µm×30 m，0.25 µm）（美国Agilent Technologies公司）； KQ2200E型超声清洗器（昆山超声仪器公司）；BP211D 型电子分析天平（梅特勒-托利多）；ALPHAi-4LSC冷冻干燥机（德国Christ）。

1.2 材料

药材购于重庆桐君阁大药房，经成都中医药大学王光志教授鉴定为正品。其中麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinicaStapf的干燥根和根茎，苦杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armemacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟种子，陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulataBlanco的干燥成熟果皮，桑白皮为桑科植物桑Morus albaL.的干燥根皮，茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，其他药味均符合《中国药典》2015年版一部项下要求。所用试剂均为分析纯，水为三重水。

2 方法

2.1 GC-MS分析

参考文献[1-4]，并进行了改进，确定了以下分析条件。

色谱条件：色谱柱为HP 型毛细管柱（250µm×30 m，0.25 µm）；进样口温度200 ℃；柱温为程序升温：初始温度60 ℃，以4 ℃/min的速率升温至150 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min的速率升温至200 ℃，保持10 min；分流比40:1；进样量1µl；载气为氦气（纯度＞ 99.99 %），流速为1.0 ml/min。分析时间：42 min。

质谱条件：电子轰击（EI）离子源，电离电压70 eV，离子源温度220 ℃，加速电压200 eV；扫描质量m/z35～550。

2.2 挥发油的提取

取总处方饮片180 g，置圆底烧瓶中，加入10倍量水，浸泡30 min，采用水蒸气蒸馏法提取8 h，得到挥发油，无水Na2SO4干燥，封装，备用，得油率为0.10 %（v/w）。同法制得麻黄、苦杏仁、陈皮、桑白皮单味药材挥发油。

3 结果

图1 八仙汤挥发油总离子流图谱

图2 麻黄挥发油总离子流图谱

图3 苦杏仁挥发油总离子流图谱

图4 陈皮挥发油总离子流图谱

图5 桑白皮挥发油总离子流图谱

按上述分析条件，对各挥发油进行GC-MS分析，总离子流图见图1～5，以峰面积归一化法计算各挥发油中各组分的相对含量，采用化学工作站对各质谱图的色谱峰进行NIST标准谱库检索，选择匹配度最高的化学结构作为最佳鉴定结果，从而确定各挥发性成分的结构，结果见表1。

表1 八仙汤与麻黄、苦杏仁、陈皮、桑白皮挥发油的化学成分

注：“-”未检测到

经分析，初步指认了70种化合物，经面积归一化计算占总挥发油的96.66 %，其中主要含有：苯甲醛、D-柠檬烯、γ-松油烯、α-松油醇，在八仙汤中分别占挥发油含量的43.03 %，28.35 %，2.82 %，2.25 %，其他还有烯类、烷类等物质。八仙汤挥发油中归属于麻黄挥发油的化学成分有26个，如苯甲醛、D-柠檬烯、四甲基吡嗪等，归属于苦杏仁挥发油的化学成分有20个，如苯甲醛、D-柠檬烯、γ-松油烯、麝香草酚等，归属于陈皮挥发油的化学成分有25个，如(1R)-2,6,6-三甲基[3.1.1]庚-2-烯、β-月桂烯、D-柠檬烯、γ-松油烯等，归属于桑白皮挥发油的化学成分有3个，如苯甲醛、D-柠檬烯、十八甲基环壬硅氧烷等。

Hexana、4-亚甲基-1-（1 -甲基乙基）环己烯、氧化柠檬烯等在八仙汤挥发油中发现而在单味药材中未检测到；而单味药材挥发性成分化学信号只有部分在八仙汤挥发油中检测到，且在量上亦有一定的变化。由此可见，富含挥发性成分药材在组方的煎汤过程中可能存在着一系列成分间的相互作用与转化，其转化过程及转化产物及含不同类型挥发性成分水煎煮和蒸馏过程中在媒介中分配系数的不同、油/水两相间饱和曲线与动态平衡的关系等改变可能导致复方挥发油成分的组成与量的变化，从而影响复方整体治疗功效。

4 讨论

本实验采用GC-MS首次对八仙汤及其单味药材中挥发油类成分进行了鉴定和分析，初步指认了苯甲醛、D-柠檬烯、γ-松油烯、α-松油醇等70种成分，占挥发油总量的96.66 %。而八仙汤中其他未归属的挥发油，可能来自方中其他药材，也有可能是药材之间的相互配伍产生的新的挥发油成分，有待于进一步考察。主要成分苯甲醛、D-柠檬烯等具有较强的抑菌及抗癌作用，初步揭示了挥发油类的药效作用物质，为揭示其效应物质基础和配伍机理奠定基础，也为后期的制剂研究提供基础。