蜜型和浆型意大利蜜蜂蜂王浆10-HDA含量对比分析

但红莉 邓先丽 王林玲

摘要：实验目的：对比普通蜂型所产蜂王浆和产浆蜂型所产蜂王浆中10-HDA的含量;实验方法：用HPLC外标法，以乙醇为溶剂，选用甲醇和0.1%甲酸（55：45）作为流动相对10-HDA进行测定;实验结果：蜜型意大利蜜蜂蜂王浆中10-HDA含量为5.0%，浆型意大利蜜蜂蜂王浆中10-HDA含量为1.2%。结果表明浆型意大利蜜蜂蜂王浆的产量高，但是其10-HDA的含量却低于蜜型意大利蜜蜂所产蜂王浆。

关键词：蜂王浆;10-HAD;HPLC

蜂王浆是青年工蜂食用花粉后咽下腺分泌的一种乳白色或淡黄色的浆状物质，是在蜂巢中饲养幼虫的工蜂分泌的用来饲喂蜂王和幼虫的一种高级营养食物，是蜂王的终生食物，对蜂王的生长发育以及生育功能都有极其重要的作用。蜂王浆又称为蜂皇浆或蜂乳，[1]其颜色大多呈乳白色或浅黄色。其极具营养价值和免疫功能，蜂王浆是一类组分相当复杂的蜂产品，随着对蜂王浆组分的大量研究[2，3]，我们知道随着蜜蜂品种、年龄、季节、花粉植物的不同，其化学成分也有所不同。同时蜂王浆对人体亦能体现非常强大的营养保健功和医疗作用能。大量研究学者提出了蜂王浆对机体有作用。[4，5]使人们对蜂王浆的生物学作用、医疗价值有了初步的了解。在蜂王浆所含的20多种游离脂肪酸中，已鉴定出来的有琥珀酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、亚油酸和花生酸等，其中以反式10-羟基-2-癸烯酸（E）10-hydroxy-2-decelenicacid（简称10-HDA）最为重要。德国科学家D.J.朗格于1921年首次在工蜂上颚腺中发现10-HAD。[7]A.Butenandt和H.Rembold于1957年利用红外光谱的方法确定了王浆酸的结构为10-HDA，[8]这是人类第一次知道10-HDA的具体结构。mgmL由于目前只在蜂王浆中发现其存在，是蜂王浆中独有的化学物质故又称之为王浆酸。因此王浆酸一般作为蜂王浆的标志物。[9]10-羟基-2-癸烯酸是蜂王浆中特有的不饱和脂肪酸，它是蜂王浆的标志性物质。王文风[10]等实验表明10-HDA对常见细菌如大肠杆菌，金黄色葡萄球菌都有较好的抑制作用。具有抗疲劳、抗辐射、治疗心脑血管疾病、调节免疫、改善记忆、抑制和杀伤癌细胞、消炎抗菌杀病毒等功效。戴静芝等[6]通过实验研究表明10-HDA对抑制癌细胞的生长有明显作用，还能增强吞噬细胞的吞噬功能。意大利蜂是西方蜜蜂的一个品种，简称意蜂。浆蜂是我国从意蜂中分化培育的产浆量比原品种高2到3倍的新品种。产蜜型意蜂的单框产量是50～70g，产浆型意蜂的单框产浆量在90～120g。

1材料与方法

1.1样品处理

蜂王浆解冻至室温，并用玻璃棒搅拌均匀，在精密天平上准确称取0.5g，加10mL95%乙醇溶解，在超声波清洗器中常温超声20min，定容至50mL，在3000rmin离心5min，取上清液经0.22μm滤膜过滤后进样分析。

1.2HPLC色谱分析

样品经滤膜过滤，取1mL装入样品瓶中，放入HPLC仪中进行测定。以出峰时间定性，以峰面积定量（外标法）。

色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm，江苏汉邦科技有限公司）;流动相为v（甲醇）：v（0.1%甲酸）=55：45;检测波长210nm;柱温为室温;流速0.5mLmin;进样量10μL。

2结果与讨论

2.1外标法标准曲线

在上述色谱条件下，将配制好的标准工作液进样分析。以色谱峰面积为纵坐标10-HDA质量浓度为横坐标绘制标准曲线如图2，得到线性回归方程为：y=5E-06x-0.0165，R2=0.9993，由此可知，10-HDA在质量浓度为50～400mgL范围内呈良好线性关系。

2.2蜜型和浆型蜂王浆10-HADHPLC图谱的比较分析

蜜型和浆型蜂王浆经处理后，上样，以甲醇为流水相进行HPLC分析，10-HAD出峰时间在7min左右。蜜型意蜂所产蜂王浆HPLC图谱峰面积为1.02*104mAU*s换算为浓度即是0.12mgmL;浆型意蜂所产蜂王浆HPLC图谱峰面积为2.70*104mAU*s换算为浓度即为0.50mgmL。通过计算我们得到了两种蜂王浆中10-HDA的含量如下：普通型的为5.0%，浆型的为1.2%。

3结论

蜂王浆是一种组成成分非常复杂的营养物质，其成分也因蜂蜜品种，年龄，花粉植物，季节的不同有差异。本次实验采用高效液相色谱法对两种不同的蜂王浆进行了10-HDA含量进行了对比。从实验结果我们可以看出蜜型意大利蜜蜂所产蜂王浆中的10-HDA的含量比较高，达到了5.0%。相比起来，浆型意大利蜜蜂所产蜂王浆中的10-HDA的含量较低，只有1.2%。产浆型蜂种产浆量大于普通蜂种，但其10-HDA的含量却不如普通蜂种产的蜂王浆高。

参考文献：

[1]刘忡文，主编.蜂王浆[M].北京：农业出版杜，1983.

[2]Rembold，H.Biologicallyactivesubstancesinroyaljelly[J]VitamHorm，1965，23：359-82.

[3]TakahashiK，KKiuchi，MEndo，eta1.Activefractionsofroyaljelly[J].CRSeancesSocBiolFil，1963，157：428-30.

[4]庄炎.蜂王浆有何主要生理功能[J].中国养蜂，1998（4）：30.

[5]彭展芬，潘建国.试论蜂王浆中的功能因子[J].养蜂科技，1998（4）：7-8.

[6]劉放，黄卫平，戴慧芳.蜂王浆及制剂中10-羟基-2-癸烯酸测定方法的进展[J].中国养蜂，1999（5）：19-21.

[7]蔡柳，林亲录.蜂王浆中10-HDA的研究现状及前景展望[J].农产品加工，2007（5）：23-25.

[8]刘晓华，孙文基.王浆酸的研究进展概况[J].中同药品标准，2004，5（1）：9-10.

[9]王文风，梅英杰，徐玲，王腾飞，王瑞明.10-HDA抗菌实验的初步研究[J].食品研究与开发，2007（10）：36-38.

[10]戴静芝，严慧芳，陈幼鸿.蜂皇酸及10-羟基-2-癸烯酸药理活性试验[J].医药工业，1985，16（5）：27-29.