检测食品中伏马菌素的研究新进展

马腾达　王慧玲　周凤霞　王宇　高泽岳

摘要：伏马菌素主要是由串珠镰刀菌属产生的一类有毒害和致癌性的真菌毒素，包括FB1、FB2、FB3等11种，其中，伏马菌素B1（FB1）是主要组分，也是毒性最强的组分，主要污染玉米、小麦、稻米等粮食作物及其制品。正因为伏马菌素具有毒性，对伏马菌素进行研究具有重要意义。本文总结了当前伏马菌素的研究新进展，以期为今后的研究提供参考。

关键词：伏马菌素;食品检测;新进展

中图分类号： TS213.4                               文献标识码：  A                     DOI编号：   10.14025/j.cnki.jlny.2019.12.043

采食含有FB1的饲料和食品，可导致人及动物中毒，如马的脑白质软化症、猪肺水肿症、大鼠肝癌、人类食管癌和肝癌等。国际癌症研究中心（IARC）将FB1列为2B类致癌物质（即人类可能致癌物），并对其在饲料及食品中含量做了限量（1～3m·kg-1）规定。因此，研究食品中伏马菌素的检测新进展具有重大意义。

1 伏马菌素在食品检测中的研究新进展

目前，检测伏马菌素的方法主要有仪器分析（高效液相色谱法、质谱及液相色谱-质谱）和免疫学。

近些年，由于伏马菌素的强毒性作用，对其研究也备受关注。郭礼强等建立了芝麻酱中16种真菌毒素（赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏马菌素B2、伏马菌素B1、O-甲基杂色曲霉素、蛇形菌素、新茄镰孢菌醇、杂色曲霉素、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、曲酸、青霉酸、橘青霉素、黄曲霉毒素M1）多残留的超高效液相色谱-串联质谱 （UPLC-MS/MS）的检测方法。芝麻酱样品经乙腈-水-乙酸（80∶19∶1，体积分数，下同）溶液提取，QuEChERS方法净化后，以含0.1%甲酸的水溶液与乙腈为流动相，经ACQUI TY UPLC BEH C18 色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm）分离，以多级反应监测（MRM），外标法定量。结果表明：16种真菌毒素的检出限为0.03～1.5μg/kg，定量限为0.10～4.0μg/kg;线性范围在0.10～200μg/kg内各成分的线性相关系数均大于0.991;样品在定量限1倍、2倍和10倍三个添加水平下的平均回收率为70.7%～99.2%，相对标准偏差（RSD）为3.26%～10.5%。该方法简便、灵敏、快速，可用于芝麻酱中多种真菌毒素污染的监控分析[1]。

姚静静等拟制备灵敏度高、特异性强的抗伏马菌素B1（FB1）单克隆抗体，并初步应用于FB1的检测，以期为FB1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法（EDC）制备人工抗原FB1-BSA 和FB1-OVA。以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠，每四周免疫一次。四免后，小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后，采用ELISA筛选，建立分泌抗FB1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB1单抗，并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB1 单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3，该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×106，亲和力常数平均值为7.98×1010L·mol-1，亚型为IgG3。FB1 mAbs的工作浓度为1∶6.0×104，与FB1发生特异性反应，间接竞争ELISA测得IC50=43.65ng·mL-1;与FB1结构类似物FB2和FB3的交叉反应率分别为385%和72.4%，与其他霉菌毒素及載体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%～114.07%，平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB1单抗，并初步建立FB1免疫学检测方法[2]。

任文洁等为制备一种快速检测玉米中伏马菌素B1（FB1 ）胶体金免疫层析试纸条。方法：采用碳化二亚胺法合成检测抗原FB1-BSA，柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，辛酸-饱和硫酸铵法对抗FB1单克隆抗体腹水进行纯化，将金标抗体喷于金标垫，检测抗原FB1-BSA（T线）和羊抗鼠二抗（C线）喷涂于硝酸纤维素膜（NC膜）。结果：得到的单克隆抗体效价为1.28×105。该试纸条的NC膜喷涂的检测抗原浓度为200 μg/mL，羊抗鼠二抗浓度为1.0mg/mL，喷涂量分别为0.74 μL/cm，试纸条灵敏度为20ng/mL，检测时间只需5min，试纸条于4℃至少可保存12个月。结论：采用制备的试纸条对玉米实际样品进行检测，检测结果与高效液相和酶联免疫吸附法检测结果相一致，说明该试纸条适合现场快速检测伏马菌素B1[3]。

2 展望

当前，对于伏马菌素的研究越来越火热。由于其毒性强大而备受关注。因此，研究伏马菌素的检测方法就显得更为重要。在研究过程中也总结出了很多方法，每种研究方法都有各自的特点。在以后的研究中，应该致力于研究出更快，更加简单、实用的测定方法，以更好地为食品检测服务。

参考文献

[1]郭礼强.超高效液相色谱-串联质谱测定芝麻酱中16种真菌毒素[J].中国调味品，2017，42（10）：154-159.

[2]姚静静.伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用[J].畜牧兽医学报，2016，47（5）：1009-1017

[3]任文洁.伏马菌素B1胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制[J].食品工业科技，2015，58（6）：58-63.