Ⅳ期胃癌肿瘤组织miR-200c表达水平与含铂方案化疗疗效及预后的相关性

冯 浪

胃癌是临床常见消化系统恶性肿瘤，由于自觉症状不明显，胃镜常规筛查普及率低，因此许多患者确诊时已经为晚期，此时全身化疗成为主要治疗手段。铂类化疗方案是晚期胃癌治疗重要手段，但肿瘤细胞对铂类药物有耐药性，仅部分患者此次方案敏感，因此寻找对铂类化疗疗效敏感的观测指标，以促进个体化疗研究进展。MiRNA作为生物学研究热点已有时日，人类miRNA具有充当肿瘤基因或抑制瘤基因作用，对其它靶基因表达和信号通路有调控作用，在肿瘤发生、进展及转归中有重要作用[1]。相关研究发现miRNA-200c能经靶基因ZEBI上调RASSFIA水平，从而对乳腺癌细胞ENT效应发挥抑制作用；且miR-200c在乳腺癌干细胞、乳腺癌细胞中表达下调；以上研究说明miR-200c表达下调在肿瘤发生和进展中可能发挥重要作用[2]。本研究分析Ⅳ期胃癌癌组织miR-200c表达与预后和铂类化疗效果的关系，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

根据本研究标准于2013年10月至2016年11月纳入Ⅳ期胃癌患者87例，患者年龄45～74岁，平均(66.19±2.19)岁；男性52例，女35例；ECOG分值为(1.32±0.23)分；癌组织分化低+差共50例，高+中共37例；有腹膜转移30例，无腹膜转移57例；肝转移31例，无肝转移56例。

纳入标准[3-4]：穿刺细胞学或胃镜组织病理学诊断的Ⅳ期胃癌；未曾接受过放化疗；影像学检查发现可测量肿瘤靶病灶；ECOG≤2分；预计生存时间≥1个月；肌酐<1.5倍NL，胆红素<1.5倍UNL，碱性磷酸酶≤2.5倍UNL，谷丙及谷草转氨酶≤2.5倍UNL，血小板计数≥100×109/L，血红蛋白≥80 g/L，中性粒细胞计数≥2.0×109/L，白细胞计数≥4.0×109/L。排除标准[5]：其它恶性肿瘤；未控制的高血压、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。从病理科获取研究对象经福尔马林固定石蜡包埋组织标本和距癌组织至少2 cm的癌旁非癌组织标本。

1.2 方法

本实验采用TRIzol试剂，由美国Invitrogen公司提供实验引物，美国Fementas公司提供逆转录试剂盒、Go Taq®Hot Start Green Master Mix及Go Taq®q PCR Master Mix，盟国AXYGEN公司提供无 RNaes 相关耗材。采用实时荧光定量PCR进行组织中miR-200c检测，TRIzol提取细胞或组织中RNA，检测RNA纯度、浓度、完整性，采用反转录试剂盒将mRNA或miRNA反转录呈cDNA，参考Go Taq®q PCR Master Mix说明书进行，采用ABI7500仪器Real-time RCP仪器进行PCR反应。相对定量结果用RQ=2-△△Ct表示，以U6为内参，每个样本均独立实验3次。所有操作均严格按照说明书进行。

1.3 观察指标

①对比癌组织与癌旁组织中miR-200c水平；②分析癌组织中miR-200c水平与临床病理特征的关系；③将肺癌组织中miR-200c表达高于本研究中平均水平的患者归为高表达组，低于平均水平的归为低水平组，对比2组进展生存时间；④癌组织miR-200c水平不同疗效组中的表达。疗效参考RECIST1.1版本相关标准[6]：目标病灶：目标病灶完全消失，病理淋巴结短径减少至10 mm以下，且所有非目标病灶消失，肿瘤标记物水平正常，无新发灶，为完全缓解；所有目标灶消失，病理淋巴短径均将至10 mm以下，有1个或多个非目标灶持续存在或(和)肿瘤标记物水平持续高于正常值为部分缓解，或目标病灶最大径之和较基线缩小至少30%，无新发病灶或(和)非目标病灶进展也可判断为部分缓解；目标病灶最大径之和较基线缩小至少30%，同时无新病灶出现或(和)非目标病灶进展，为稳定；此外均视为进展。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 癌组织与癌旁非癌组织中miR-200c水平对比

癌组织miR-200c平均值为(0.459±0.012)，癌旁非癌组织表达为(1.034±0.120)，两者差异有统计学意义(t=44.47，P=0.0000)。

2.2 癌组织中miR-200c水平与临床病理特征的关系

有肝转移的患者癌组织中miR-200c表达水平较无转移患者更低，P<0.05。见表1。

2.3 癌组织miR-200c高表达组与低表达组预后对比

高表达组无进展时间为(3.61±0.21)个月，低表达组无进展时间为(1.71±0.32)个月，两者差异有统计学意义(t=46.30,P=0.0000)。Spearman相关性分析发现miR-200c水平与无病生存时间呈正相关关系(γ=0.531，P<0.05)。

2.4 癌组织miR-200c水平不同疗效组中的表达

miR-200c水平在癌组织中表达水平由高至低依次为完全缓解组、部分缓解组、病变稳定组、病变进展组，差异有统计学意义，P<0.05。见表2。相关性分析(Spearman)发现疗效与癌组织miR-200c表达呈正相关关系(γ=0.560，P<0.01)。

表1 Ⅵ期胃癌癌组织中miR-200c与临床病理特征的关系

表2 Ⅵ期胃癌癌组织中miR-200c在不同疗效患者中的表达

3 讨论

MinRNA是非编码小分子RNA，转录后水平对目标基因表达实现负调控，引起靶mRNA分子降解，或出现翻译抑制。本研究中miR-200c广泛分布在人类细胞及组织中，是发现较早的miRNAs之一，在多种恶性肿瘤中有异常表达，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、结直肠癌、黑色素瘤等[7]。目前许多研究发现其在组织中表达具有特异性，关于其在癌组织中的表达意义研究逐渐增多。本研究中对比Ⅵ期胃癌患者癌旁非癌组织和癌组中miR-200c表达水平，发现组织miR-200c平均值为(0.459±0.012)，癌旁非癌组织表达为(1.034±0.120)，差异明显。这与唐锦莉等[8]报道的胃癌晚期患者癌组织中miR-200c、miR-192水平较癌旁组织表达低的结果基本一致。

近年来关于miR-200c与癌症患者预后关系的研究逐渐深入化，大部分研究显示miR-200c高表达患者预后相对较好；但也有研究发现miR-200c在恶性肿瘤发生进展中具有癌基因作用，其表达与预后为负相关[9-10]。miR-200c表达在不同肿瘤患者中表示不同的预后，这可能与肿瘤组织特异性有关，或是miR-200c样本提取不同所致，例如一些研究者是观察血浆miR-200c水平，一些研究者是观察血清miR-200c水平，而本研究观察组织miR-200c水平。在本研究中癌组织miR-200c水平高表达预示较好的预后。例如本研究发现肝转移患者癌组织中miR-200c水平较无肝转移患者更高。而早期胃癌肝转移患者病情更严重，其预后受诸多因素制约，单个肝转移灶患者中生存期较多灶者长，肝转移及转移个数是预后不良因子[11]。这是因为miR-200c对DNA甲基转移酶DNMT3B、DNMT3A有直接抑制作用，对DNMTI表达有间接抑制作用，能使胃癌中高甲基化基因得到恢复，从而抑制肿瘤侵袭、生长增殖，故miR-200c高表达预示着预后更好。本研究通过对比高表达组和低表达组无进展生存时间，发现高表达组无进展生存时间明显较低表达组长，Spearman相关性分析发现miR-200c水平与无病生存时间呈正相关关系。以上研究结果均提示Ⅵ期胃癌患者癌组织中miR-200c水平高低与预后密切相关。

铂类药物是晚期胃癌一线用药，但是肿瘤细胞有铂类耐药现象。尹杰等[12]研究发现miRNA异常表达与肿瘤对铂类化疗药物的敏感程度相关；彭丽香等[13]研究指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表达与含奥沙利铂化疗后预后有关，其中低表达组预后较高表达组好。但目前研究晚期胃癌组织miR-200c的研究甚少，现有研究均认为其表达与化疗效果有一定关系。本研究通过对比发现miR-200c水平在癌组织中表达水平由高至低依次为完全缓解组、部分缓解组、病变稳定组、病变进展组，差异有统计学意义。进一步相关性分析证明癌组织miR-200c表达与铂类化疗效果呈正相关关系。而张倩等[14]研究指出miR-200c能抑制锌指 E-盒结合同源异型盒 1基因表达，从而抑制胃癌肿瘤细胞侵袭和转移；提示miR-200c有抑制胃癌基因作用，而铂类化疗方案可能具有调节癌组织miR-200c表达，从而发挥抗癌作用。

综上所述，Ⅳ期胃癌组织miR-200c表达水平与患者预后及铂类化疗方案疗效相关，通过观察其表达水平评估预后，今后也可通过提高晚期胃癌组织miR-200c表达来进行治疗。