miR-451、VEGF及TNF-α在食管癌患者血清中的表达水平及意义

邢艳丽

食管癌的发生与患者饮食习惯、基因、遗传、环境等因素有关。该病在我国的发病情况呈现地区性差异，一定区域内的绝对高发率与周围地区的相对低发生率成鲜明对比，是我国食管癌最典型的流行病学特征。目前研究发现，肿瘤细胞因子TNF-α、肿瘤生长因子VEGF参与食管癌的发生及转移[1]。miR-451是机体病理状态下细胞重要组成部分，在食管癌中表达异常。研究miR-451、VEGF及TNF-α血清表达水平能预测食管癌分期，指导临床进行个性化治疗[2]。本研究在治疗前检测食管癌患者血清中miR-451、VEGF、TNF-α表达水平，指导临床治疗，现将结果汇报如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2016年1月至2017年1月收治的80例食管癌患者纳入观察组；另于同期选择80例健康受试者纳入对照组。观察组患者中男性70例，女性10例，年龄32～59岁，平均年龄(49.59±1.74)岁。对照组患者中男性69例，女性11例，年龄32～60岁，平均年龄(49.54±1.7)岁。2组患者一般资料比较无差异，具有可比性(P>0.05)。纳入标准：①同意本研究，并自愿签订知情同意书的患者；②食管癌前、中期患者；③凝血功能正常的患者；④接受穿刺病理检验的患者。排除标准：①合并其他恶性肿瘤的患者；②不接受随访的患者。

1.2 方法

所有参与者入院后，空腹抽取患者静脉血5 ml，检验医生在5 h内离心处理，取其上清，并将2 ml血液的上清保存在-80 ℃的冰箱中待用，3 ml保存在-20 ℃的冰箱中。

⑴miR-451表达水平检测：取-80 ℃的冰箱中上清，遵循miR-451说明书提取要求，先提取RNA，经脱洗后将RNA存于-80 ℃的冰箱中，在2 h内进行下一步反转录。将反转录引物进行排序，合成目的基因，使用荧光测量法测量miR-451水平，并将所得结果详细记录。⑵VEGF、TNF-α表达水平：取-20 ℃的冰箱中上清，采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测血清VEGF、TNF-α表达水平，并记录检测结果。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 入选结果

病理证实鳞状细胞癌50例，腺癌30例；伴有淋巴结转移58例，无淋巴结转移的22例。依据国际抗癌联盟分期标准进行分期发现，Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例。

2.2 2组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

观察组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 2组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

2.3 食管癌分期各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例分别纳入Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组。食管癌分期各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较发现，Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅰ期、Ⅱ期(P<0.05)，见表2。

表2 食管癌分期各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

2.4 食管癌转移各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

将伴有淋巴结转移58例患者，无淋巴结转移的22例患者分别纳入淋巴结转移组及无淋巴结转移组。研究发现淋巴结转移组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)，见表3。

表3 食管癌转移各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较

3 讨论

食管癌是我国最常见的癌症之一，前期隐匿性较强，5年生存率<15%[3]。有学者认为[4]，环境因素是影响食管癌发生的重要因素。朱焕锋等[5]研究发现，相同条件的人暴露在相似环境内，却只有极少部分人发生食管癌。提示，环境因素不是影响食管癌发生的主要因素，个人遗传因素是影响食管癌发生的主要因素。食管黏膜最早是原位癌，进一步发展成早期浸润癌，随着病情的持续发展，逐渐发展成中晚期食管癌[6]，直至机体生命终结。食管癌病理演化属于生物学中细胞生长、分化、遗传范畴。该病病程少则1年，多则几十年。临床普遍认为，食管癌的产生与诸多因子有关[6-8]。该病属于多阶段发展疾病，但其发生与发展的确切机制尚未统一。随着细胞分子生物学的发展，关于食管癌细胞因子作用研究越来越多。当前研究发现肿瘤的生长、浸润、转移均与血液供给有关。食管癌典型凋亡细胞形态的特点鲜明：细胞质红染，细胞核染色质明显浓缩[9]，部分细胞出现核裂解碎片。食管癌典型凋亡小体多为圆形，细胞质呈强嗜酸性。细胞凋亡速递及指数随病变逐渐加重。食管癌病理有隐伏型、糜烂性、板块性、乳头型、混合型[10]，其中除乳头型癌外其他类型都无明显肿块形成。

miR-451是血清中一类断链的小分子非编码RNA，能调解多种细胞凋亡进程，可成为肿瘤细胞标志物。miR-451与靶信使RNA结合后控制及影响mRNA的翻译，从而加快机体正常细胞的凋亡，促进癌性因子释放。TNF-α是由机体活化巨噬细胞、单核细胞及T细胞分泌结合产生。该细胞因子主要负责机体炎症期间的细胞转移与调控，活性较好。王庆玉等[11]研究者认为，TNF-α具有前抗炎及抗活性的作用，能促进肿瘤细胞快速增殖，诱导健康细胞凋亡，促进癌细胞侵袭。TNF-α与恶性肿瘤的发生、发展、转移密切相关。食管癌患者中血清低浓度的TNF-α与治疗预后成正相关。李铁志等[12]大鼠实验证明，食管癌病鼠的TNF-α浓度与血液中蛋白表达量显著提高。肿瘤血管的形成及生长受血管生长因子的调控，其中VEGF是目前所知作用最强、特异性最高的血管生长因子。VEGF是一种内皮细胞有丝分裂原，不仅能诱导血管通透性，还可导致血浆蛋白外渗到血管外间隙，从而形成蛋白纤维基质[13]，诱导内皮细胞增生，形成高度血管化的间质。机体新生血管及新基质可为肿瘤细胞生长提供基础环境。VEGF在肿瘤坏死区表达明显增高，并随着肿瘤坏死区及新生肿瘤的缺氧程度增加。高巍等[14]研究者发现，VEGF能抑制树突细胞的生成影响免疫机制，最终导致肿瘤细胞的免疫逃脱。研究实验证实[15]，VEGF表达水平与恶性肿瘤成正相关。VEGF表达与食管癌分期及总生存率显著相关。放射性治疗后食管癌患者的VEGF阳性及阴性表达的生存期有明显差异，有统计学意义。本文认为，VEGF可以成为食管癌的独立预后指标。本研究结果表明，食管癌患者的miR-451、VEGF、TNF-α水平显著高于健康人。提示，食管癌患者血清miR-451、VEGF、TNF-α高表达。表明，miR-451、VEGF、TNF-α因子参与食管癌发生。TNF-α除具有抗肿瘤细胞活性剂免疫调节功能外，还具有介导炎症反应的作用，TNF-α参与诸多病理生理改变，TNF-α在许多恶性疾病有均有高表达。食管癌患者TNF-α表达高于健康患者。证实食管癌患者体内可能有一定的TNF-α活性物质存在。观察食管癌分期各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较结果可知，病情越严重的食管癌患者血清食管癌分期各亚组患者血清miR-451、VEGF、TNF-α表达水平越高，Ⅳ期患者表达水平最高。miR-451、VEGF及TNF-α表达水平可作为诊断食管癌临床分期的重要标准，辅助医生判断疾病分期。分析食管癌转移各亚组患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比较结果可知，淋巴结转移的患者者血清miR-451、VEGF及TNF-α表达水平高于无转移患者，表明患者血清miR-451、VEGF及TNF-α表达水平能提示食管癌患者是否出现淋巴结转移，有利于手术治疗。

综上所述，食管癌的发生、发展在一定程度上取决于患者的生物学行为，食管癌在形成的早期有细胞增生及新血管生成，miR-451高表达能促使肿瘤细胞释放，影响血管内皮功能，增加其通透性，促进肿瘤细胞转移及生成，可成为肿瘤细胞标志物。VEGF高表达可诱导正常细胞凋亡，是食管癌的独立预后指标。TNF-α高表达可促进癌细胞侵袭，为肿瘤细胞提供新的生存环境。术前检查食管癌血清miR-451、VEGF及TNF-α表达水平能辅助医生判断疾病分期、是否出现淋巴结转移，有利于临床治疗。