王 霞 ,刘建国 ,马友记 ,王 毅 ,陈 亮
(1.甘肃农业大学动物科学技术学院,兰州 730070;2.兰州市畜牧兽医研究所,兰州 730050)
中草药作为我国传统医学的重要组成部分,具有较高的药用价值,又因其含有多种营养成分,如维生素、氨基酸、矿物质、多糖、有机酸、微量元素等,同时具有丰富的营养价值。在畜禽日粮中添加中草药可以促进动物生长、提高免疫力、改善畜产品品质等。在家禽上的研究发现,饲粮中添加复方中草药不但可提高其生长性能和免疫器官指数,改善鸡肉品质和蛋品质,而且可显著改善肠道结构并增强其吸收能力[1-2]。王冉[3]的研究表明,日粮中添加复方中草药可以提高犊牛的采食量、增强机体免疫力、提高抗氧化能力。另有研究表明,日粮中添加复方中草药能在一定程度上改变羊肉的理化性质、提高肉品品质,还可以改善羊肉风味和瘤胃发酵功能[4-6]。瘤胃是反刍动物营养吸收和消化代谢的重要场所,瘤胃发育对反刍动物的生长有着重要意义[7]。但有关日粮中添加复方中草药对其瘤胃组织形态学发育影响的研究报道仍十分匮乏。基于此,本研究拟通过在湖羊日粮中添加不同比例的复方中草药,在测定胴体重、眼肌面积、剪切力、脾脏重量等指标的基础上观察瘤胃的组织形态学变化,研究其对湖羊屠宰性能、肉品质、免疫水平及瘤胃发育的影响,为复方中草药添加剂在肉羊生产中的应用提供参考依据。
本复方主要由炙黄芪、党参、白术、当归、陈皮、炙甘草、升麻、柴胡组成。上述中草药原料购自兰州市医药公司某门店,用粉碎机进行普通粉碎后过40目筛,依次按照 3∶2∶2∶2∶2∶1.5∶1∶1 比例混合均匀,装袋密封备用。
试验以湖羊为研究对象,由兰州通大成农林科技有限公司皋兰养殖基地提供。选择体况良好、健康无病、体重相近的30日龄公羔24只,随机分为3组(n=8):对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组在基础日粮中分别添加4%和5%的复方中草药添加剂。试验期60 d,对每个试验组的羔羊进行编号,每个试验组单独饲喂,自由饮水,自由采食粉碎的干草,圈内设置舔砖,保持圈舍清洁卫生,定期免疫和驱虫。试验羊的基础日粮与营养水平如表1所示。
1.3.1 样品的采集 在试验期结束后,每个试验组随机挑取3只湖羊,屠宰前24 h禁食,前2 h禁水。颈静脉放血致死后打开腹腔,采集脾脏组织称其重量;采集瘤胃腹囊组织3块,用PBS缓冲液冲洗干净后迅速投入4%的多聚甲醛溶液中固定,用于石蜡切片的制备。
表1 试验羊的基础日粮及营养水平(DM基础)%
1.3.2 屠宰性能和肉品质测定指标及方法 所有试验羊屠宰前称重,记为宰前活重。屠宰后去皮毛、头、前肢腕关节、后肢飞节以下部位和内脏(保留肾和肾脂)进行称量,记为胴体重。根据宰前活重和胴体重计算屠宰率(屠宰率%=100×胴体重/宰前活重);用游标卡尺测量第12肋骨和第13肋骨之间距背脊中线11 cm处的组织厚度记为GR值;用游标卡尺测量眼肌的高度和宽度后,利用公式(眼肌面积=眼肌高度×眼肌宽度×0.7)计算眼肌面积。参考侯鹏霞[8]的方法测定羊肉失水率、熟肉率和剪切力。肉色、大理石纹用肉色比色板和大理石花纹比色板进行对比评分。
1.3.3 瘤胃组织形态学试验方法 将固定好的每个样品经不同浓度梯度乙醇逐级脱水,二甲苯透明,浸蜡,石蜡包埋后,制作成厚度为5 μm的石蜡切片。切片经二甲苯脱蜡,依次经递减浓度梯度乙醇逐级脱水(100%、95%、90%、80%和70%乙醇各5 min)后用苏木精染色8 min,自来水冲洗2 min,1%HCl-酒精分化30 s、流水冲洗30 min,再用0.5%伊红染色2 min,蒸馏水洗30 s,最后依次经递增梯度酒精脱水、二甲苯透明后用中性树胶封片。每张切片在4倍光学显微镜下观察其形态结构,并选择组织完整的8个典型视野用Imagevie软件测量瘤胃乳头高度、乳头宽度、肌层厚度、角质层厚度,并采集图像。
试验数据经Excel统计处理后,用SPSS 21.0统计分析软件进行单因素方差分析及Turkey法多重比较,结果用x±SD表示。P<0.05表示组间差异显著。
由表2可知,试验Ⅰ组和试验Ⅱ与对照组相比,羔羊的宰前活重、胴体重、屠宰率、GR值和眼肌面积等指标均无显著性差异(P>0.05),但试验Ⅰ组和试验Ⅱ的眼肌面积均高于对照组,而GR值则低于对照组。
表2中草药添加剂对羔羊屠宰性能的影响
由表3可知,试验Ⅰ组羊肉剪切力显著高于对照组(P<0.05)和试验Ⅱ组(P<0.05)。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与对照组相比,失水率、熟肉率、肉色、大理石纹等均无显著性差异(P>0.05),但试验Ⅰ组和试验Ⅱ组失水率均低于对照组,熟肉率则高于对照组。
由表4可知,试验Ⅰ组与试验Ⅱ组的脾脏重量与对照组相比,添加不同剂量的中草药对羔羊免疫器官的重量无显著影响(P>0.05),但试验Ⅰ组与试验Ⅱ组脾脏重量均高于对照组。
表3中草药添加剂对羔羊肉品质的影响
表4中草药添加剂对羔羊免疫器官脾脏重量的影响
在显微镜下观察到的瘤胃组织HE染色的切片如图1所示,试验Ⅰ组瘤胃乳头形态较完整,分布较密集,对照组和试验Ⅱ组乳头分布较稀疏。由表5可知,瘤胃乳头高度和肌层厚度试验Ⅰ组均显著高于对照组(P<0.05)和试验Ⅱ组(P<0.05)。瘤胃乳头宽度和角化层厚度各组之间差异均不显著(P>0.05),但试验Ⅰ组和试验Ⅱ组均大于对照组。
图1瘤胃组织形态结构
表5中草药添加剂对羔羊瘤胃发育的影响 μm
屠宰性能与动物的产肉力、胴体品质等密切相关。眼肌面积与屠宰率直接反映动物的产肉性能,GR值是胴体脂肪评分的依据,GR值越低,说明瘦肉率越高。熟肉率反映了肉品烹调加工过程中水分损失的程度,熟肉率越高保水性越好。失水率和剪切力越小,说明肉的多汁性越高,肉的嫩度越好[8]。Zhang 等[9]的研究结果表明,饲料中添加中草药制剂能够明显改善猪肉品质。罗燕等[10]发现中草药添加剂能显著改善中国美利奴羊新疆军垦型的肉品质。本试验通过对屠宰性能、肉品质测定发现,随着复方中草药添加比例的增加,湖羊眼肌面积增加,而胴体GR值下降,复方中草药添加组熟肉率、失水率、肉色、大理石纹等肉品质指标与对照组相比均无明显差异(P>0.05),但添加中草药后,试验组失水率低于对照组,而熟肉率高于对照组,4%中草药添加组可以显著降低剪切力(P<0.05)。上述结果说明日粮中添加复方中草药有助于提高湖羊产肉性能,增加瘦肉率,提高羊肉嫩度,且4%添加量的效果更明显。
脾脏是机体最大的免疫器官,是免疫细胞聚集和免疫应答的场所;脾脏变化在一定程度上反映了动物的免疫水平,其重量与免疫功能呈正相关[1,11]。赵红梅等[12]在21日龄断奶仔猪的基础日粮中添加超微中草药添加剂后发现,其可以提高脾脏、胸腺免疫器官指数。夏玉芬等[13]在基础日粮中分别添加1%、2%和4%的复方中草药制剂,研究不同剂量复方中草药对舍饲藏羊生长性能和免疫功能的影响,结果表明,基础日粮中添加2%和4%的复方中草药制剂可显著改善舍饲藏羊的生长性能、免疫功能,且4%添加剂量的改善效果更显著。本试验对脾脏称重后发现,复方中草药添加组的脾脏重量高于对照组,表明日粮中添加复方中草药能增加脾脏重量,进而改善机体的免疫功能,与上述报道一致。
瘤胃的发育是有效利用饲料的关键,其乳头高度是衡量瘤胃壁吸收营养物质的重要指标,其次是瘤胃乳头宽度、肌层厚度、角化层厚度[14]。人们已经发现,牧草能促进瘤胃肌肉的发育,并保持其上皮细胞的完整性[15]。已有的许多研究报道了中草药可以改变反刍动物瘤胃的发酵模式。祜群等[16]的研究结果表明,中草药添加剂有利于维持瘤胃内环境的稳定,提高瘤胃微生物菌群数量和蛋白质的利用率。高秀华等[17]研究中草药添加剂对梅花鹿瘤胃消化代谢的影响时发现,中草药添加剂可以显著提高瘤胃pH值(P<0.05)、TVAF浓度(P<0.05)和乙酸/丙酸比值(P<0.05)。乔国华等[18]研究发现,女贞子可以提高小尾寒羊瘤胃液总挥发性脂肪酸浓度和丙酸的浓度。本试验通过测定湖羊瘤胃乳头高度、宽度和肌层厚度等指标,发现日粮中添加4%和5%的复方中草药均可增加瘤胃乳头宽度和角化层厚度,添加4%的复方中草药制剂可显著提高其瘤胃乳头高度(P<0.05)和肌层厚度(P<0.05)。这说明日粮中添加复方中草药可促进瘤胃腹囊的发育,且4%的添加量促进作用更显著。这可能是因为日粮中添加中草药会影响瘤胃发酵终产物,产生较高浓度的挥发性脂肪酸,提供瘤胃上皮发育所需要的能源,因而促进了瘤胃腹囊组织形态学的发育[19]。但其影响机理需要进一步深入研究。
在本试验条件下,在基础日粮中添加4%和5%的复方中草药均具有改善湖羊屠宰性能、肉品质,提高脾脏重量和促进瘤胃发育的作用,但4%的添加剂量为最适剂量。