儿童急性髓细胞性白血病中基质金属蛋白酶-9和半胱氨酸蛋白酶-3的表达

陈香红

(郑州市第一人民医院，河南 郑州 450004)

近年来，儿童急性白血病的发病率逐年升高，成为严重威胁儿童生命健康安全的一种恶性肿瘤，其治疗非常棘手，大多数儿童因为对治疗方案的不耐受而放弃治疗或因严重的不良反应而终止治疗[1]。寻找儿童急性白血病的早期诊断及判断预后的指标是目前研究的难点和热点[2]。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)属于目前研究较多且与肿瘤关系密切的一种MMP，与恶性肿瘤的发生、发展关系密切[3]。半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是Caspase级联反应中重要的效应酶，其高表达能够促进细胞的凋亡，恶性肿瘤的发生、发展过程中Caspase-3表达的降低是其关键因素[4]。本研究采用免疫组化S-P法检测儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表达，并观察两者表达之间的关系以及两者联合检测对儿童急性髓细胞性白血病的诊断及预后评估价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料入组郑州大学第一附属医院、郑州市第一人民医院2016年1月至2018年6月收治的经病理证实的儿童急性髓细胞性白血病100例，其中男74例，女26例；年龄1.5～13.3岁，中位年龄6.9岁；所有患儿均为初诊未治患儿。并选择同期住院的非恶性血液病患儿50例作为对照，其中男31例，女19例；年龄1.8～13.0岁，中位年龄7.2岁；免疫性血小板减少性紫癜21例，缺铁性贫血18例，原发性血小板减少11例。2组患儿的性别、年龄等基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已经获得医院伦理委员会的审核通过，入组患儿家属也均已签署知情同意书。

1.2 主要试剂MMP-9、Caspase-3单克隆抗体购自美国SAB公司；S-P免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 免疫组化S-P法检测儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表达[5-6]采用免疫组化S-P法检测100例儿童急性髓细胞性白血病和50例非恶性血液病患儿骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3的表达。具体方法：1)首先提取骨髓单个核细胞，并用质量分数4%多聚甲醛固定；2)常规S-P免疫组化步骤检测骨髓单个核细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白的表达，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 免疫组化结果判读[7-8]MMP-9和Caspase-3蛋白免疫组化结果均采用半定量法进行判读。每张切片均随机选取5个高倍镜(×400)视野，分别按照染色强度和阳性细胞比例进行评分，然后两者乘积作为结果，0～1分为(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中等阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)，其中阴性(-)、弱阳性(+)为阴性结果，中等阳性(++)、强阳性(+++)为阳性结果。

1.5 统计学处理采用SPSS 19.0进行统计分析，MMP-9和Caspase-3蛋白的阳性表达率等计数资料用百分数表示，比较用χ2检验，MMP-9和Caspase-3蛋白的相关性采用Spearman相关分析法分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同患儿骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表达的比较100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3的阳性表达率分别为26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非恶性血液病患儿的阳性表达率分别为78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比较差异均有统计学意义(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。

2.2 儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表达的相关性100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3的表达呈负相关关系(rs=-0.615，P<0.001)。见表1。

表1 儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3蛋白表达的相关性 n

注：rs=-0.615，P<0.001

3 讨论

儿童急性白血病的主要临床表现均是骨髓内异常的原始造血细胞异常增殖造成的。临床上儿童急性白血病诊治的难点是早期诊断和预后判断，寻找早诊早治手段、改善预后是当前儿童急性白血病临床研究的热点问题。白血病细胞向周围的扩散及远处转移均需要穿过基底膜，而MMP家族是基底膜主要成分的降解酶类，因此，MMP家族成员的异常表达是基底膜完整性与否的关键因素[9]。Caspase级联反应在所有细胞的凋亡中发挥重要作用，其被抑制是恶性肿瘤细胞异常增殖的关键原因，而Caspase-3是这一过程中重要的效应酶[10]。Sam等[11]发现，急性白血病患者体内存在MMP-9的异常表达。Montiel-Cervantes等[12]发现，Caspase-3的低表达与急性白血病的发生、发展关系密切。

本研究结果显示，100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3的阳性表达率分别为26.00%(26/100)和73.00%(73/100)，50例非恶性血液病患儿的阳性表达率分别为78.00%(39/50)和22.00%(11/50)，比较差异均有统计学意义(χ2=36.706、35.187，P均<0.001)。100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中MMP-9和Caspase-3的表达呈负相关关系(rs=-0.615，P<0.001)。

总之，MMP-9和Caspase-3蛋白在儿童急性髓细胞性白血病的骨髓细胞中存在异常表达，且两者的检测对于儿童急性髓细胞性白血病的诊断和预后判断具有重要价值。