抑郁症大鼠海马内少突胶质细胞的体视学研究

韩丽君 王志恒 尚婷惠子 陈萍 董海影

【摘要】目的 探析抑郁症大鼠海马各亚区内少突胶质细胞的改变情况。方法 选取周龄在4～6周的雄性SD大鼠50只，随机分为两组，实验组30只，对照组20只，实验组采用 CUS 结合孤养的模式，建立抑郁症大鼠模型，对照组大鼠常规饲养，利用现代体视学对大鼠海马各亚区少突胶质细胞的数量进行研究。

结果 实验组大鼠海马CA1区少突胶质细胞数量较对照组无明显改变，而CA3区和DG的少突胶质细胞数量则明显低于对照组。结论 体视学研究发现抑郁症大鼠海马CA3区和DG的少突胶质细胞总数量降低但CA1区无明显改变，为抑郁症的病理变化提供了重要的理论依据。

【关键词】抑郁症；海马内少突胶质细胞；体视学研究

【中图分类号】R749 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2019.5..02

抑郁症是严重危害人类健康的一种精神疾病。因此，探讨抑郁症的发病机制，探索抑郁症治疗的新靶点，对于改善抑郁症患者的抑郁状态和生活质量具有重要意义。研究表明，少突胶质细胞功能障碍，尤其是当少突胶质细胞包围轴突时形成的结节和轴突的突然剥脱，在神经异常中起着重要作用。因此，少突胶质细胞可能与抑郁症的发生和发展密切相关，而海马是与抑郁症相关的重要脑区，海马中各亚区的少突胶质细胞在发生抑郁时的确切变化需要探索，本文基于体视学对此进行了研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物与分组

选取动物实验中心提供的周龄在4到6周的雄性SD大鼠50只，体重均在150到200克之间，随机分为两组，实验组30只，对照组20只。每5只一笼（模型组和实验组大鼠都需要单笼饲养）并提供足够的食物和水，在室温为20℃、适宜生长的环境中适应性喂养，饲养和治疗遵循实验室动物保护和使用指导。1周后将实验组大鼠置于一系列慢性却不可预知的应激，其他条件与对照组一致条件下饲养。

1.2 实验方法

取材，切片，染色，体视学分析：观察组和实验组每组随机选16只大鼠，腹腔注射1%戊巴比妥鈉。将大鼠胸腔迅速打开暴露心脏，从左心室顶端进针，再将针头用止血钳固定。将右心耳切开灌注约80 ml生理盐水再灌注4%（多聚甲醛）聚甲醛直到颈部僵硬。打开颅骨腔，取出颅骨，取出完整的脑组织，置于PBS制备的蔗糖溶液中3天。溶液的浓度分别为10%、20%和30%。将大脑组织植入OCT，在冷冻切片机上制作60微米的连续切片。所有切片在

0.01 mol/L PBS溶液中漂浮。室温（21～23℃），洗净

0.01 mol/L PBS，5分钟×3次，轻轻摇匀。用0.3% Triton洗涤15分钟，洗四次，放入封闭液中封闭，依次敷一抗、二抗、三抗，最后进行DAB显色，显影时间根据每张胶片的着色程度进行调整，约1分钟，用苏木素重复染色、脱水、封片、在体视学设备上，用专业体视学软件对少突胶质细胞进行计数。大鼠海马CA1区、CA3区和DG区在4倍物镜下划定。在每个切片的每个区域选择大约12～30个视野，在每个动物的（每张切片）海马的每个亚区域选择大约400个视野。在100倍油镜下用体视学软件自动记录并计数海马各亚区少突胶质细胞的数量。

1.3 统计学方法

所有数据均应用SPSS 20.0统计学软件进行处理和分析，P<0.05为差异，则代表相应数据具有统计学上的意义。

2 结 果

对照组各区的细胞排列紧密，结构清楚，细胞边缘光滑完整，而实验组细胞排列松散，形态各异，细胞边缘轮廓不清，且少突胶质细胞数目密度较对照组减少。经分析两者比较；差异有统计学意义（P<0.05）。

实验组大鼠海马CA1区少突胶质细胞数量较对照组无明显改变，而CA3区和的少突胶质细胞数量则明显低于对照组

3 讨 论

结果表明，实验组CA1区少突胶质细胞与对照组相比无明显变化，而CA3区和DG区少突胶质细胞与对照组相比明显减少，这进一步表明，诱发抑郁的刺激不能减少CA1区成熟少突胶质细胞总数，但CA3区和DG区少突胶质细胞总数明显降低。因此，本研究采用体视学方法研究海马中少突胶质细胞的数量。此外，海马的传入纤维主要由内嗅皮质的轴突起，投射到海马齿状回的整个长度，投射到齿状回的分子层和CA1的腔隙分子层。这两层纤维的数量最大，这是海马接受外部压力的主要信息来源。因此，推测慢性应激可能影响CA1区的某些特定区域，如密集分布的腔隙分子层。这种推测需要在以后的实验中进一步研究和确认。研究发现，儿童期较大的外部刺激可影响海马的发育和成熟，导致海马体积减少，尤其是CA3和DG的体积较正常人明显减少，无不显示海马内少突胶质细胞的减少与抑郁症的发生发展密切相关。

体视学研究结果表明，抑郁症大鼠海马CA3区和DG中少突胶质细胞数量明显减少，而CA1区无明显变化。研究结果为进一步认识抑郁症的病理变化，寻找抑郁症治疗的结构靶点和切入点提供了重要的科学依据。

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本文编辑：赵小龙