新疆哈巴河县流产牛病原检测

吾力江，张梦圆，李仿鑫，艾日登才茨克，努尔古丽，巴音查汗

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052 ; 2.新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐830000)

随着新疆养牛业的发展，牛饲养量的逐渐增加，牛病也逐年增长。其中，母牛流产是影响养牛业发展的主要原因之一。母牛流产是由于母体与胎儿之间存在的正常生理关系受到破坏，导致妊娠中断，由疫病性因素引起的流产主要包括寄生虫病性流产和传染性疫病性流产，如新孢子虫、弓形虫引起的流产；布鲁菌病、小反刍兽疫、衣原体病、Q热病毒病等可引起的流产[1-5]。新孢子虫病、弓形虫病、布鲁菌病等多种原因都是导致妊娠母牛流产的主要根源。新孢子虫病 (Neosporosis)[6]是由犬新孢子虫 (Neosporacaninum)寄生于犬、牛、羊等多宿主细胞内所引起的一种原虫病，造成母畜流产、产死胎或弱胎等对养牛业的危害极为严重，全世界至少有 40% 左右的母牛流产是因为感染了新孢子虫病，所以被认为是目前导致世界性牛流产的主要原因之一。弓形虫病是一种由龚地弓形虫(Toxoplasmagondii) 引起人和动物感染的人兽共患病，目前研究表明，孕妇感染弓形虫后可导致早产、流产、胎儿发育畸形。布鲁菌病 (Brucellosis) 是由布鲁菌引起的一种人兽共患病，研究证明，布鲁菌导致母牛流产。对布鲁杆菌病和弓形虫病等研究较深入，对新孢子虫病的研究在国内较少，尤其在新疆哈巴河县尚未调查。近年来，阿勒泰哈巴河县放牧母牛发生流产率逐渐增高，这对当地牧民发展养牛业造成了较大影响；故本试验对哈巴河县有流产史的放牧牛进行新孢子虫病、弓形虫、布鲁杆菌病的血清学检测，进行传染性流产病因分析。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品采集 牛血清样品采自新疆阿勒泰哈巴河县其流产史的放牧牛，其中加依勒玛乡31份，库勒拜乡23份，共计54份。牛进行尾静脉采血，斜置于4 ℃ 冰箱5 h后，放于室温待血清析出后收集血清，-80 ℃冷冻保存待检。

1.1.2 试验试剂 辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG，购自北京中杉金桥生物科技有限公司；新孢子虫rELISA试剂盒、弓形虫rELISA试剂盒，由新疆农业大学动物医学学院寄生虫实验室提供；布病虎红平板凝集抗原、布病虎红平板凝集试验临床标准阴、阳性血清、试管凝集抗原，由乌鲁木齐畜牧局提供；PBS(磷酸盐缓冲液，pH值9.6)、吐温(Tween)-20、PBS，由实验室自制；显色液，购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。

1.1.3 主要仪器 酶标板(96孔平底微量板)、移液枪、枪头，购自生工生物工程(上海)股份有限公司；KHBST-36型全自动酶标仪、温箱，购自中仪国科(北京)科技有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 新孢子虫病rELISA 检测抗体试剂盒 以新孢子虫特异性重组蛋白(GST-Nc SRS2)作为 rELISA 检测试剂盒的包被抗原，严格参考杨帆等[7]建立的 rELISA 方法进行。

1.2.2 弓形虫病 rELISA检测抗体试剂盒 以弓形虫特异性重组蛋白(GST-Tg SAG2)作为 rELISA 检测试剂盒的包被抗原，严格参考王常汉[8]、许正茂等[9]建立的 rELISA 方法进行。

1.2.3 虎红平板凝集试验 虎红平板凝集试验(RBT)参考国标 GB/T18646-2002 进行。

1.2.4 试管凝集试验 试管凝集试验 (SAT) 参考国标 GB/T18646-2002 进行。

2 试验结果

2.1 流产母牛寄生虫性和细菌性病原检测结果 对54头流产放牧牛血清学检测结果进行分析，加依勒玛乡新孢子虫病和牛布鲁杆菌病的感染率较高，分别为38.70%、54.80%；而弓形虫的感染率较低，两个乡的感染情况没有明显差异，见表 1。

2.2 哈巴河县试验点流产母牛混合感染检测结果 表2为新孢子虫病、弓形虫病和布鲁菌这3种病原混合感染情况，其中，新孢子虫病与弓形虫病的混合感染率最低，新孢子虫病与布鲁菌病混合感染率最高，为 14.80%

2.3 哈巴河县试验点流产母牛不同年龄妊娠期牛疾病感染情况 如表3所示，结合采样记录(3-8岁龄的流产母牛样品)和访问调查分析，各年龄段的牛均可感染新孢子虫病、弓形虫病和布鲁菌病，3-4 岁之间，新孢子虫病、弓形虫病和布鲁杆菌病这3种疾病呈现上升趋势，布鲁菌病达到最高值；5-6岁之间，弓形虫病的感染率继续上升，而新孢子虫病和牛布鲁菌病感染率处于下降趋势；7-8岁之间，3种病处于同时下降的趋势。

表2 哈巴河县2个试验点流产牛混合感染检测结果

表3 哈巴河县两个试验点流产牛不同年龄段检测结果

3 分析与讨论

本试验调查分析了哈巴河县部分乡新孢子虫病、弓形虫病、布鲁菌病导致的母牛流产情况，即使传染性3种病原感染原因似乎是最普遍的，由于不同的病原体可能涉及同一病例，并且诊断方法并不总是被优化，因此所涉及的病原体的鉴定是困难的。因此，我们运用较成熟的便捷、快速诊断法对采集的母牛流产血清检测，包括ELISA诊断法、虎红平板凝集试验及试管凝集试验。母牛饲养环境因素对疾病感染牛群有着重要的影响，通过向当地牧民了解到哈巴河县牛只饲养方式以散养为主，高产母牛的引进、调运等导致了上述3种病原的感染造成母牛流产；再加上哈巴河县哈萨克族居多，土狗、牧羊犬处处可见，这也大大上升了以犬为终末宿主的新孢子虫等的感染，犬随粪便排出卵囊污染草场，使牛羊等感染。弓形虫也是如此，猫、人、畜、禽、鼠及其他动物都是本病的传染源，由于能排出卵囊，而且卵囊又能在外界环境中长时间贮存，故是最危险的传染源。布鲁杆菌病感染可能一方面是接种疫苗后，长期进行牛、羊贸易时有患病牛、羊作为传染源传给疫苗失效的牛群，或者是没有一对一接种疫苗或消毒处理不严，导致再次出现了回升和扩大蔓延的趋势等等。

南北疆均有新孢子虫病、布鲁菌病、弓形虫病等病因导致流产的报道，杨帆[7]等人之前也有报道新疆部分地区的流产原因分析；巴音查汗等[10]报道北疆部分地区新孢子虫病的血清学调查，本次检测结果与上述报道的新孢子虫病的检测结果基本一致；并且同时对新孢子虫病、弓形虫病与布鲁杆菌病这3种疾病进行流产病因分析。

在冬季，哈巴河县寒冷的气候可能会影响放牧牛的正常采食、饮水等，这也可能导致妊娠牛流产。预防是对妊娠牛流产和减少病原体最有效的方法之一，环境卫生及疾病防控对此有重要意义。建议做好发生流产区域的消毒工作，在产犊高峰期应当进行多次消毒。避免在产犊时期开展疫苗免疫，严格按照国家法律规定对人兽共患病进行处理；避免狗、猫等动物与牛群的直接接触，减少感染几率。另外，可督促畜主及时上报空胎、流产、产死胎、弱胎的牲畜，以防发生新病源在畜群间蔓延；要提高广大养殖农户对该病的防范意识和自我保护意识。