酶抑制率法在普洱市思茅区蔬菜农残检测中的应用

黄海燕

摘要：随着我国国民经济的良好发展和人民生活水平的显著提高，人们日益重视加强蔬菜农残检测，以确保蔬菜农产品质量安全。当前，酶抑制率法在普洱市思茅区蔬菜农残检测中得到了日渐广泛的应用。本文简述了酶抑制率法的技术原理，浅析了酶抑制率法在普洱市思茅区蔬菜农残检测中的具体操作方法，以期为酶抑制率法在蔬菜农残检测中的应用提供借鉴。

关键词：酶抑制率法;蔬菜;农残检测

普洱市思茅区地处云南省南部，位于澜沧江下游。普洱市思茅区为保障农产品安全，加强了对农药残留的检测，严禁农残超标的农产品进入农产品交易市场。普洱市思茅区加强了酶抑制率法在蔬菜农残检测中的有效应用。

一、酶抑制率法原理

酶抑制率法在普洱市思茅区蔬菜农残检测中的应用，主要是对蔬菜所含的有机磷类以及氨基甲酸酯类农药残留进行检测。酶抑制率法的原理如下：在特定条件下，有机磷类农药以及氨基甲酸酯类农药会抑制胆碱酯酶相应的正常功能，且抑制率与上述两类农药的实际浓度呈现出正相关关系。通常，酶对乙酞胆碱进行催化，并使之水解，水解产物能和显色剂发生化学反应生成黄色物质，在412nm处，借助分光光度计对吸光度随时间变化呈现的相应值进行准确测定，进而对抑制率进行训算，借助抑制率即可对蔬菜样品中所含的有机磷类农残以及氨基甲酸酯类农残进行准确判断。以酶的抑制率表示农残检测的结果判定。

二、酶抑制率法在普洱市思茅区蔬菜农残检测中的具体操作方法

1.机型选择。酶抑制率法相应的农药残留检测仪器生产厂家，基于单批次同一时间实施检测的样品不同数量，设计出相应的各类通道类型，常见的通道类型有8通道、12通道以及%通道等。其中，8通道可对1到7个样品实施同时检测;12通道可对1到12个样品实施同时检测;96通道最多可对92个样品实施同时检测。其他通道类型的农残检测仪器可对相应数量的样品实施同时检测。要基于普洱市思茅区农残检测的实际需要，对检测机型进行选择，按照单批次农残检测相应的样品实际数量对相应的通道类m的检测仪进行选择。对通道数呈现悬殊相差的农残检测仪进行使用，在对八道移液器进行利用时，操作不慎极易影响检测精准度，且会浪费检测试剂。单批次农残检测相应的样品数量较多时，选用通道数较少的农残检测仪，极易延长批次内农残检测操作时间而造成检测误差。

2.试剂配制

（1）PH8.0缓冲液。取重量为11.9g的无水磷酸氢二钾，同时取重量为3.23g的磷酸二氢钾，采用容积为1000ml的蒸馏水对之进行溶解。

（2）显色剂。取重量为160g的二硫代二硝基苯甲酸，同时取重量为15.6mg的碳酸氢钠，采用容积为20ml的缓冲溶液对之进行溶解，并将冰箱温度设定为4℃对溶剂进行保存。

（3）底物。取重量为25.0mg的硫代乙酸胆碱。采用容积为3.0m的蒸馏水对之进行溶解，摇晃均匀后，将之放置于设定温度为4℃的冰箱内进行保存备用，但要确保保存期在两周以下。

（4）乙酞胆碱酯酶。基于酶固有的活性情况，采用缓冲液对之进行溶解，对3min相应的吸光度变化值进行控制，使之超过0.3。摇晃均匀后，将之放置在设定温度为4℃的冰箱内进行保存备用，要确保保存期在4天之内。在实际农残检测中，通常采用农残检测仪器相应生产厂家所提供的配套检测试剂，遵循试剂说明书实施操作使用即可。

3.检测步骤

（1）样液制备。①样品处理。对普洱市思茅区代表性较强的蔬菜样品进行选取，将蔬菜表面泥土清除干净。对于叶菜类蔬菜，将之剪成1cm见方大小的碎片，取大约2g;对于块茎类以及瓜果类蔬菜，削除其表皮，取大约2g;将上述经过处理的蔬菜样品放置在提取瓶中，通过可调移液器向提取瓶中加入容积为10ml的缓冲液。将提取瓶放置于多用可调速振荡器中，对之进行时长两分钟的振荡提取，然后进行时长3到5分钟的静置。②若浸提液呈现出较浅颜色，或者无色，借助移液管将浸提液对离心管进行转移，将之作为待测液;若浸提液相对较为浑浊，则借助移液管将浸提液吸取至离心管相应的0.5ml刻度线位置，将之放置于微型离心机内实施离心处理，使上层液实现澄清，将之取出后，放置于离心管架上，将之作为样液。缺乏离心机设备时，可对浸提液实施过滤处理。③若浸提液存在较为严重的色素干扰状况，则将浸提液对另一提取瓶进行转移，并将重量为0.1g到0.5g的活性炭加入该提取瓶中，将之放置于多用可调速振荡器中，对之实施时长5分钟到6分钟的振荡处理（可基于脱色实际情况，适当对脱色时间进行延长或者缩短），将经过振荡的浸提液取出，对之进行时长5分钟到10分钟的静置，借助移液管将上层液进行吸取至离心管相应的0.5ml刻度线位置，将之放置于微型离心机内实施离心处理，使上层液实现澄清，将之取出后，放置于离心管架上，将之作为样液（要避免活性炭在样液中存在残留，对于含有活性炭残留的样液，要再次实施离心处理）。④葱、蒜、韭菜、茭白等汁液中，含有影响酶的植物此生物质，极易造成假阳性现象。对此类样品进行处理，可整株浸提，避免此生物质发生干扰。⑤采用各类仪器，在样液配置实际过程中会略微呈现出不同，例如，有的取样品重量为1g，有的取样品重量为2e，所需添加的缓冲液容积与之对应为5ml和10ml，保持相同的比例。

4.配置对照液。配置对照液极为简易，仅需将缓冲液直接移取，即可将之作为对照液。

5.测试

（1）对照液测试：先将容积为2.5ml的缓冲液加入试管中，再将容积为0.1ml的酶液以及容积为0.1ml的显色剂加入试管中，摇匀，将试管在37℃环境下进行时长为超过巧分钟的放置。将容积为0.1ml的底物加入试管中并摇匀，此时，检液即呈现出显色反应，应立即将试管放置于仪器比色池内，并对反应3分钟的吸光度实际变化值进行记录。（2）样品溶液测试：先将容积为2.5ml的样品提取液加入试管中，再实施与对照液测试相同的操作，最后对反应3分钟的吸光度实际变化值进行记录。（3）借助多通道移液器对酶试剂、显色剂以及底物进行移取，应在Ⅴ型槽中倒入试剂，并对试剂进行取用。借助移液器将容积我20u的酶加入微孔板孔内，再借助移液器将容积为250ul的对照缓冲液加入其中。将微孔板放置于仪器内部，按动上下键对“启动振板”进行选择，之后按动“确认键”，对振板进行启动，将酶和样品有效混匀。完成板振后，对之进行时长10分钟的静置。然后，将10ul顯色剂以及10ul底物加入微板孔内，立即将之放置于仪器内，实施测量。

三、结语

综上所述，酶抑制率法成本低廉，且灵敏准确，在蔬菜农残检测中的应用日渐广泛。在普洱市思茅区蔬菜农残检测中，对酶抑制率法进行应用，要深入了解酶抑制率法原理，并遵循机型选择、试剂配制、样液制备、对照液制备以及测试的具体操作方法，有效保障酶抑制率法对蔬菜农残检测的有效性。

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