血小板膜GPⅢa受体基因多态性与冠心病患者阿司匹林抵抗的相关性分析

易松 潘燕 陈左平

336000江西省宜春市人民医院

临床中，部分心脏病及卒中患者在服用阿司匹林后仍然会发生缺血性血管事件，即阿司匹林抵抗。值得注意的是，临床对阿司匹林抵抗的原因及其作用机制尚无明确结论，有研究显示，其发生与药物剂量不足、药物相互作用、患者年龄、吸烟以及血小板GP基因多态性等情况有关[1]。2018年1-11月收治老年冠心病患者200例，对血小板膜GPⅢa受体基因多态性与阿司匹林抵抗的相关性进行研究。

资料与方法

2018年1-11月收治老年冠心病患者200 例，均符合缺血性心脏病稳定性心绞痛疾病诊断标准，临床给予100 mg/d 阿司匹林口服治疗，需连续服用7 d。其中男103 例，女97 例；年龄62～84 岁，平均(69.8±4.6)岁；合并糖尿病79 例，原发性高血压73 例，脂代谢异常57 例。

排除标准：存在家族或个人出血史情况患者；入院前1 周进行重大手术治疗患者；存在骨髓增生异常综合征以及异性蛋白血症患者；近期使用盐酸噻氯匹定及双嘧达莫或者是其他非甾体类抗炎药物、注射肝素或低分子肝素、华法林等药物患者[2]。

方法：临床采用二磷酸腺苷与花生四烯酸作诱导剂对其血小板聚集功能进行检测，采用聚合酶链反应-限制性核酸内切法(PCR-RFLP)对血小板膜GPⅢa 受体基因多态性进行检测分析。检测使用仪器包括FT-630G 型微机多探头γ 计数器和SYSMEX KX-21N 血细胞分析仪、LG-KOALA 智能血液凝聚仪等，具体检测分析方法：对患者血小板聚集率测定，通过抽取患者空腹静脉血3 mL，采用3.2%枸橼酸钠抗凝保存后，以二磷酸腺苷以及花生四烯酸作为诱导剂进行血小板聚集率检测，并对其最大血小板聚集率进行记录，以对患者阿司匹林抵抗情况进行判断。其中，将患者口服100 mg/d 阿司匹林、连续服用7 d 后以二磷酸腺苷和花生四烯酸作为诱导剂进行检测，其平均血小板聚集率为≥70%和≥20%的情况，判断阿司匹林抵抗；将满足其中任意一种条件的情况，判断为阿司匹林半抵抗；其余情况为阿司匹林敏感[3]。对患者血小板膜GPⅢa受体基因多态性检测，采用酚-三氯甲烷核酸抽提法进行患者外周血白细胞基因组DNA提取后，采用PCR-RFLP 进行基因分型判断。其中，反应体系终体积50 μL，包含引物各0.3 μmol/L，氯 化 镁 溶 液2.0 mmol/L，dNTP Mixture 0.2 mmol/L，Taq DNA 聚合酶2.0 U，基因组DNA模板0.1～1.0 μg，将PCR 反应的各种溶液成分在冰上进行配置，然后在94 ℃温度条件下进行预变性约5 min，按照温度94 ℃、时间60 s和温度57 ℃、时间60 s，温度72 ℃、时间60 s 的循环参数条件共进行35 个循环反应，以完成PCR 扩增反应。对PCR 反应和酶切后的产物，采用2.0%的琼脂糖凝胶进行电泳30 min 后，使用溴化乙啶染色处理，然后在紫外灯下进行观察以对其基因型进行判定。

统计学分析：采用统计学软件SPSS 21.0 进行数据分析处理，其中，计数资料采用χ2检验，以%表示；计量资料采用t 检验，以(±s)表示。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

结 果

200 例患者中，阿司匹林抵抗率23.0%(46例)，半抵抗率17.0%(34例)，对阿司匹林敏感率60.0%(120 例)；此外，存在阿司匹林抵抗患者的GPⅢa 受体等位基因出现频率12.5%，与阿司匹林敏感患者相比其GPⅢa 受体等位基因出现频率明显较高(P＜0.05)。阿司匹林抵抗与敏感患者的血小板聚集率和基因型频率分布结果，见表1和表2。

讨 论

临床中，阿司匹林是心脏病与卒中患者预防应用最为广泛的药物，且临床研究证实，阿司匹林在降低高危型心源性猝死、脑卒中、心肌梗死等疾病患者病症危险性方面具有十分显著的作用效果[4]。但是，值得注意的是，阿司匹林在对心脏病及卒中患者治疗中，还存在部分患者服用阿司匹林后其再发血栓，血小板活性仍然比较高，导致患者再发血管事件的危险性较大，也就是说服用阿司匹林后患者仍然会发生缺血性血管事件，这种情况被称为阿司匹林抵抗。对阿司匹林抵抗的原因及其作用机制尚无明确结论，有研究显示，其发生与药物剂量不足、药物相互作用、患者年龄、吸烟以及血小板GP 基因多态性等情况有关[5]。

表1 阿司匹林抵抗与敏感患者的血小板聚集率检测结果比较(±s，%)

表1 阿司匹林抵抗与敏感患者的血小板聚集率检测结果比较(±s，%)

组别 二磷酸腺苷诱导 花生四烯酸诱导阿司匹林抵抗(n=80) 74.1±21.4 32.4±22.5阿司匹林敏感(n=120) 45.2±15.6 17.8±5.6 t 11.287 7.156 P＜0.05 ＜0.05

表2 阿司匹林抵抗与敏感患者基因型频率分布比较(n)

上文中，对收治的连续服用阿司匹林治疗老年冠心病患者200 例的血小板聚集率以及GPⅢa PLA 基因多态性分布进行检测分析显示，阿司匹林抵抗率23.0%(46 例)，半 抵 抗 率17.0%(34 例)，阿司匹林敏感率60.0%(120 例)；此外，阿司匹林抵抗与敏感患者的GPⅢa PLA 基因多态性分布中等位基因频率差异有统计学意义，阿司匹林抵抗患者的GPⅢa 受体等位基因出现频率12.5%，明显高于阿司匹林敏感患者。由此可见，血小板膜GPⅢa 受体基因多态性与冠心病患者阿司匹林抵抗之间存在一定关联。

总之，血小板膜GPⅢa 受体基因多态性与冠心病患者阿司匹林抵抗之间存在一定关联，可以作为冠心病患者阿司匹林抵抗发生的一种基因标志进行研究应用。