E-cadherin、α-catenin 在 Ⅱ期结直肠癌中的表达及与预后的关系

余争垚 郑伯安 董全进 王建军 牟虹

近年来，结直肠癌发病率逐渐上升[1]。随着美国国家综合癌症网络、欧洲肿瘤内科学会指南的更新，结直肠肿瘤的治疗不断规范。Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌患者术后须行辅助化疗已达共识，但对于Ⅱ期结直肠癌患者术后是否行辅助化疗尚有争议。因此，对Ⅱ期结直肠癌术后是否行化疗，需要一个可靠、有效的评价指标。笔者对E-cadherin、α-catenin在Ⅱ期结直肠癌中的表达及与预后的关系作了研究，以探讨这2项指标对术后化疗的指导意义，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2010年1月至2016年1月在淳安县第一人民医院手术治疗的45例Ⅱ期结直肠癌患者的石蜡标本。入选标准：（1）术后经病理学证实为结直肠癌；（2）术前均未接受任何治疗；（3）术前CT诊断为Ⅱ期结直肠癌；（4）均为中国汉族人种；（5）均经过根治性手术治疗。患者男 32 例，女 13 例；年龄 23～76（54.4±14.2）岁。其中30例患者的标本同时包括距结直肠癌组织5cm以外的正常黏膜组织。本研究经医院伦理委员会审查通过，所有患者签署知情同意书。

1.2 检测方法 采用免疫组化法。使用鼠抗人αcatenin单克隆抗体（中国北京中山生物技术有限公司）、即用型鼠抗人E-cadherin单克隆抗体（中国福州迈新生物技术开发中心）、Envision system试剂盒（丹麦DAKO基因有限公司）。石蜡标本经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，切片经微波抗原修复；采用Envision法染色、苏木素复染、切片脱水透明、封片。以已知阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。E-cadherin阳性标准：沿细胞边界的细胞膜均匀染有棕黄色。αcatenin阳性标准：细胞膜均匀染有棕黄色。根据染色强度分为阴性、中度阳性、强阳性，并将中度阳性、强阳性归为阳性表达。

1.3 统计学处理 应用SPSS 20.0统计软件。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。采用Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线，并采用logrank检验分析结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin表达与患者预后的关系。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ⅱ期结直肠癌组织与癌旁正常黏膜组织中E-cadherin、α-catenin表达比较 Ⅱ期结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin 阳性表达率均为 84.4%（38/45），免疫组化结果见图1a、2a（插页）；癌旁正常黏膜组织中E-cadherin、α-catenin阳性表达率均为 100.0%（30/30），免疫组化结果见图1b、2b（插页）。Ⅱ期结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin阳性表达率均明显低于癌旁正常黏膜组织，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

2.2 Ⅱ期结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin表达与患者临床特征的关系 E-cadherin阳性表达率与Ⅱ期结直肠癌患者浸润深度、有无静脉侵犯有关（均P＜0.05），与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、有无淋巴结转移、病理组织学类型、有无淋巴管侵犯等均无关（均P＞0.05）；α-catenin阳性表达率与有无静脉侵犯有关（P＜0.05），与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、病理组织学类型、有无淋巴管侵犯等均无关（均P＞0.05），见表1。

表1 Ⅱ期结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin表达与患者临床特征的关系[例（%）]

2.3 Ⅱ期结直肠癌组织中E-cadherin、α-catenin表达与患者预后的关系 随访至2017年5月31日。在Ⅱ期结直肠癌患者中，7例E-cadherin阴性表达者1、3、5年生存率分别为85.7%、42.9%、0.0%，38例阳性表达者1、3、5年生存率分别为 94.7%、65.8%、39.5%；E-cadherin阳性表达者总生存率明显高于阴性表达者，差异有统计学意义（P＜0.05），生存曲线见图3。7例α-catenin阴性表达者 1、3、5年生存率分别为 85.7%、28.6%、0.0%，38例 α-catenin阳性表达者 1、3、5年生存率分别为94.7%、68.4%、39.5%；α-catenin阳性表达者总生存率明显高于阴性表达者，差异有统计学意义（P＜0.05），生存曲线见图4。

3 讨论

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学特征[2]。黏附分子在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中起着重要作用，其中E-cadherin是与结直肠癌浸润和转移较为密切的黏附分子。E-cadherin是一种主要介导细胞间黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，其基因定位于染色体16q22，广泛分布于成人的上皮细胞，与细胞的黏附有关[3]。E-cadherin在肿瘤细胞中缺失表达与患者预后不良有关[4]。此外，E-cadherin表达与恶性肿瘤分化程度、浸润深度、转移特性等相关[5]。体外研究证实，E-cadherin黏附能力的丧失是获得去分化和有侵袭力表型的第一步[6]，同时证实E-cadherin能抑制肿瘤浸润转移的[7-8]。高钧等[9]回顾性分析了227例结肠癌患者的临床资料，探讨了结肠癌组织中E-cadherin表达与结肠癌复发、转移及生存的关系，结果显示E-cadherin表达缺失可能与结肠癌复发、转移和不良生存预后有关。Ngan等[10]采用免疫组化法检测了140例结直肠癌组织中E-cadherin蛋白表达情况，结果显示术后生存期＞5年的患者E-cadherin蛋白表达强度明显高于生存期＜5年的患者。本研究结果显示，E-cadherin在癌旁正常黏膜组织中呈高表达；E-cadherin在结直肠癌组织中表达较弱，且与结直肠癌的浸润、转移有关。此外，E-cadherin阳性表达的结直肠癌患者生存率明显高于阴性表达者。

图1 Ⅱ期结直肠癌组织与癌旁正常黏膜组织中E-cadherin表达（a：横结肠黏液腺癌组织中E-cadherin蛋白染色呈阴性，定位于细胞膜；b：正常大肠黏膜组织中E-cadherin蛋白呈棕黄色保存型表达，定位于细胞膜；免疫组化染色，×240）

图2 Ⅱ期结直肠癌组织与癌旁正常黏膜组织中α-catenin表达（a：直肠管状腺癌组织中α-catenin染色呈阴性，定位于细胞膜；b：癌旁正常黏膜组织中α-catenin蛋白呈棕黄色保存型表达，定位于细胞膜；免疫组化染色，×240）

图3 E-cadherin表达阳性与阴性Ⅱ期结直肠癌患者的生存曲线

图4 α-catenin表达阳性与阴性Ⅱ期结直肠癌患者的生存曲线

catenin 是一组膜内蛋白，包括 α-catenin（102kDa）、β-catenin（88kDa）、γ-cat（82kDa）。其中α-catenin基因位于染色体5q21-22，编码906个氨基酸[11]。研究表明，α-catenin在维持正常组织形态方面发挥着重要作用，若它缺失或异位表达，可使癌细胞获得恶性增生、浸润转移的能力[12]。E-cadherin功能的发挥，不仅需要有钙离子的存在，还需要与其配体——连环素（包括αcatenin、β-catenin和γ-catenin）、细胞骨架——肌动蛋白丝连接，发挥其黏附功能。若无α-catenin，即使在正常E-cadherin表达的情况下，细胞也不能相互黏附[13]。α-catenin的基因产物与E-cadherin胞浆区形成复合体，再与细胞骨架中的肌动蛋白微丝结合，发挥其黏附功能，使相邻细胞形成稳定连接。α-catenin基因丢失或α-catenin蛋白突变，都可导致细胞失去黏附功能。因此α-catenin的正常表达是E-cadherin发挥黏附功能的必要条件，而E-cadherin与α-catenin结合是E-cadherin介导的细胞黏附功能的关键步骤。本研究结果显示，αcatenin在癌旁正常黏膜组织中呈高表达，在结直肠癌组织中表达强度减弱；α-catenin阳性表达率与有无静脉侵犯有关。生存分析发现，α-catenin阳性表达者生存率明显高于阴性表达者。

综上所述，E-cadherin、α-catenin表达强度与Ⅱ期结直肠癌患者预后有关，其表达越弱，患者预后越差。对于E-cadherin和/或α-catenin表达阴性者，应严密随访，必要时予以辅助化疗；对于E-cadherin和/或αcatenin表达阴性者，无需辅助化疗。