黄精对 小 鼠免疫调节作用的影响研究

顾晓龙，罗明友

（松桃德康农牧有限公司，贵州 松桃 554100）

黄精为百合科植物黄精、多花黄精或滇黄精的干燥根茎，为《中国药典》收录品种，始载于《名医别录》。按药材形状不同，分别习称为“鸡头黄精”“姜形黄精”“大黄精”。黄精味甘、性平，归脾、肺、肾经，具有健脾、补肾、润肺、生津等功能。黄精含有黄精皂苷、烟酸、糖类、醌类、氨基酸及微量元素，具有激发免疫、增强免疫、延缓衰老、抗病毒等作用［1］。因此，对黄精的药理研究和开发利用具有重要意义。

1 仪器与药材

1.1 仪器 HX-1000A高速万能粉碎机，BP211D型分析天平，201型电热鼓风恒温干燥箱。

1.2 药材 黄精药材购自四川利民中药饮片有限责任公司，批号：170901。

2 材料与方法

2.1 饲料制备 取黄精打粉，按30 g/kg的比例把黄精加入饲料粉料中，V型混机混合30min，玉米淀粉制浆，槽型混机混合10 min左右，然后用颗粒饲料机制备成小鼠饲料，备用。

2.2 黄精提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究

2.2.1 实验动物及分组 昆明系小白鼠60只，18～22g，雌雄各半，由四川大学华西实验动物中心提供。随机分为3组，每组20只，分笼饲养。Ⅰ组作为对照组，Ⅱ组和Ⅲ组为免疫抑制组。Ⅲ组在免疫抑制造模成功后饲喂添加了黄精的饲料，Ⅰ组和Ⅱ组饲喂普通饲料。3组小鼠均自由采食、饮水，连续15 d，环境温度控制在23～25℃。

2.2.2 免疫抑制造模方法 小鼠腹腔注射环磷酰胺（用量为80 mg/kg），注射量为0.2 mL/d。免疫抑制组前3d需腹腔注射环磷酰胺，3d后雌雄小鼠各处死一只，然后检测血常规白细胞是否下降，如有下降即造模成功。

2.2.3 E-玫瑰花环试验 在试管中加入2mL分层液，取肝素抗凝血等量（2 mL），沿管壁缓缓加入至分层液上，注意不要打破两层界面。用离心机2000r/min离心20min，取出，弃上层血浆。吸取淋巴细胞层，用Hank's液洗涤2次，反复离心，即可得到淋巴细胞悬液。

取淋巴细胞悬液0.2mL，加入绵羊红细胞悬液0.2 mL，混匀，置于37℃恒温箱培养3 min，然后以500 r/min的速度离心5 min，再放入4℃冰箱2h，取出，轻轻摇动，使下沉的细胞重新悬浮，加入2.5%戊二醛0.1 mL混匀，固定5 min，再轻轻摇动，使细胞浮起，用吸管吸1滴置载玻片上，推片，自然干燥，瑞氏染色，400倍显微镜下观察。凡1个淋巴细胞结合3个以上红细胞的均为玫瑰花环，计数200个淋巴细胞，算出玫瑰花环百分数［1］。

2.2.4 血清抗体IgG、IgM含量测定 血清抗体用小鼠免疫球蛋白IgG、IgM酶联免疫吸附测定试剂盒测定。

2.2.5 脏器系数测定 试验结束后对各脏器进行肉眼检查，观察异常变化，及时记录，取脾脏、胸腺精密称重，计算脏器系数。

3 结果

3.1 E-玫瑰花环率 结果见表1。由表1可知，试验结束时，黄精添加组小鼠的玫瑰花环率高于免疫抑制组，且差异显著，与对照组相比差异不显著。

表1 各组小鼠的E-玫瑰花环率

3.2 血清抗体IgG、IgM含量 结果见表2。由表2可知，试验结束时，免疫抑制组的IgG、IgM含量均显著降低（P＜0.05），说明造模成功；黄精添加组的IgG和IgM含量与对照组相比差异不显著，但略微高于对照组。

表2 各组小鼠的血清抗体水平 mg/mL

3.3 小鼠脏器系数 结果见表3。由表3可知，试验结束时，免疫抑制组的脾脏系数和胸腺系数显著低于对照组，黄精添加组与对照组相比差异不显著。

表3 各组小鼠的脏器系数

4 讨论

黄精多糖是黄精化学组成的一个重要部分，其最重要和最主要的生物活性就是免疫增强作用。玫瑰花环试验是体外检测人类和动物免疫活性细胞的表面标识，是测定免疫活性细胞数量与功能的一种试验方法。T淋巴细胞表面具有能够吸附绵羊及豚鼠等动物红细胞的受体，利用这个特征可使红细胞吸附在淋巴细胞周围，形成所谓的玫瑰花环，以此来计算T淋巴细胞数，测定机体的细胞免疫状态［2］。通过测定E-玫瑰花环率我们可以看出，免疫抑制组与对照组之间差异显著（P＜0.05），黄精添加组与对照组之间差异不显著，表明黄精能明显提高正常小鼠淋巴细胞的免疫功能，使其达到正常生理水平。

血清免疫球蛋白测定是检查体液免疫功能的最常用方法。IgG是人和动物血清中含量最高的免疫球蛋白，占血清免疫球蛋白的75%～80%，IgG是介导体液免疫的主要抗体。IgM是一种高效能抗体，其杀菌、溶菌、溶血、调理及凝集作用均比IgG高。IgM在体内产生最早，但持续时间最短，因此不是机体抗感染的主力，但在抗感染免疫的早期起着十分重要的作用［3］。从本试验可以看出，饲料中添加黄精可以提高免疫抑制小鼠的血清免疫球蛋白的含量，可在一定程度上提高机体免疫力。

免疫器官的脏器系数是衡量机体免疫功能的初步指标，胸腺和脾是重要的外周免疫器官，机体的免疫应答主要以脾为主，T淋巴细胞分化的主要场所则以胸腺为主。本研究结果显示，黄精可促进免疫抑制小鼠免疫器官的发育，提示其对小鼠具有相应的治疗作用。

综上所述，黄精能增强免疫功能低下模型小鼠的免疫系统功能，如细胞免疫和体液免疫，对将来开发利用黄精提供了部分理论依据。