晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞水平观察

周亚军 丁园

【摘要】 目的：分析晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞水平。方法：选取笔者所在医院45例健康体检者设为对照组，45例晚期血吸虫病患者设为观察组。采用流式细胞术检测患者外周血细胞中的Vα24 NKT细胞在T淋巴细胞中的比例。检测两组肝功能指标，分析Vα24 NKT与肝功能的相关性。结果：观察组患者NKT细胞水平为（0.15±0.01）%，显著低于对照组的（0.84±0.21）%，差异有统计学意义（P<0.01）。两组各肝功能指标比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。相关性分析显示，NKT细胞在晚期血吸虫病患者外周血Vα24中与γ-GT呈正相关（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT细胞与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB、A/G无相关性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）。结论：晚期血吸虫患者外围血中Vα24 NKT细胞明显减少，Vα24 NKT细胞与γ-GT呈正相关，与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G无相关性。

【关键词】 晚期血吸虫病 流式细胞术 Vα24 自然杀伤T细胞

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.29.027 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）29-00-02

[Abstract] Objective： To analyze the level of Vα24 natural killer T cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis. Method： A total of 45 healthy subjects in our hospital were selected as the control group， and 45 advanced schistosomiasis patients were selected as the observation group. Flow cytometry was used to determine the proportion of Vα24 NKT cells in T lymphocytes. The liver function indexes of the two groups were detected and the correlation between Vα24 NKT and liver function was analyzed. Result： The level of NKT cells in the observation group was （0.15±0.01） %， which was significantly lower than （0.84±0.21） % in the control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. There were significant differences in liver function between the two groups （P<0.01）. Correlation analysis showed that NKT cells were positively correlated with γ-GT in peripheral blood Vα24 of patients with advanced schistosomiasis（r=0.371， P<0.05）， while Vα24 NKT cells were not correlated with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G （r=-0.001， -0.178， 0.023， -0.101， 0.026， 0.031， P>0.05）. Conclusion： The number of Vα24 NKT cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis are significantly decrease. Vα24 NKT cells are positively correlate with gamma GT， but not with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G.

[Key words] Advanced schistosomiasis Flow cytometry Vα24 Natural killer T cells

First-authors address： Clinical Diagnosis and Treatment Center for Schistosomiasis in Hubei， Jingzhou 434001， China

自然殺伤性T细胞（NKT）是一类特殊性质的免疫细胞，其与先天免疫和后天免疫有关[1]。在微生物感染、自身免疫性疾病、抗肿瘤转移和移植物存活方面影响显著，其作用日益得到承认[2]。血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病。文献报道其参与了血吸虫病小鼠的致病过程。本次探究采用流式细胞术分析检测晚期血吸虫病患者外周血NKT细胞的水平变化[3]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择笔者所在医院2016年6月-2018年6月在笔者所在医院住院治疗的晚期血吸虫病患者45例，设为观察组，其中男20例，女25例;年龄41～77岁，平均（62.1±10.3）岁。根据卫生部2006年发布的《血吸虫病诊断标准》，排除自身免疫性疾病、病毒性肝炎、酒精性肝脏疾病，所有患者入院前接受血吸虫免疫学检查。选取笔者所在医院门诊健康体检者45例为对照组，其中男17例，女28例;年龄40～78岁，平均（63.1±11.5）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 NKT细胞检测 所有患者均于入院后第2天空腹状态下采集2 ml全血抗凝EDTA-K2。收集100 μl血液加入标记后的单克隆抗体CD3-FITC 5 μl与TCR Vα24-PE 5 μl并充分混合。在避光状态下4 ℃孵育30 min，加入500 μl红细胞裂解液混合。室温避光10 min，进行PBS洗涤，1 500 r/min离心，弃上清液体，加入500 μl固定剂拌匀。并快速由流式细胞术检测，使用Expo32软件进行检测分析，检测时每个通道由相应的IgG细胞作为阴性对照。

1.2.2 肝功能检测 取全血抗凝2 ml，室温静置30 min后，1 800×g离心5 min，分离血清。采用全自动生化分析仪检测肝功能指标，包括丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、谷酰转肽酶（γ-GT）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白/球蛋白（A/G）等。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 20.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，采用Pearson相关系数分析相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NKT细胞水平比较

观察组患者NKT细胞水平为（0.15±0.01）%，显著低于对照组的（0.84±0.21）%，差异有统计学意义（P<0.01）。

2.2 两组肝功能水平对比

两组ALT、TBIL、γ-GT、ALB、A/G、AST、ALP水平比较，差异均有统计学意义（P<0.01），见表1。

2.3 NKT细胞与肝功能的相关性

NKT细胞在晚期血吸虫病患者外周血Vα24中与γ-GT呈正相关（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT细胞与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G无相关性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）

3 讨论

慢性血吸虫病是一种慢性免疫疾病[4]，其基础是由血吸虫病宿主抗原成分引起的局部或全身过敏，其代谢产物或蠕虫病死亡在急性感染血吸虫病中以TH1诱导细胞应答[5]，成年细胞反应为主[6]。在感染后期，虫体成熟排卵，而卵子则沉积在血液、肝脏等，导致在肝脏等部位引起TH2细胞应答的IV超敏反应，卵肉芽肿继发，导致肝硬化，并且出现静脉高压等并发症[7]。此外，Th细胞和NKT细胞占肝脏T淋巴细胞的20%～30%，在肝脏局部免疫应答中发挥重要作用[8]。NKT细胞在晚期血吸虫病患者外周血Vα24与γ-GT呈正相关，而Vα24 NKT细胞与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G无相关性[9]。

晚期血吸虫病患者外周血NKT细胞能识别血吸虫卵内的特异性抗原[10]。淋巴细胞的富集引起过度的炎症反应，导致患者肝功能受损[11]。在硫代乙酰胺和四氯化碳诱导下能引起CD1d基因显著减少野生型小鼠的肝脏炎症和纤维化程度，平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β的表达也显著降低，表明NKT细胞在小鼠体内会导致肝细胞的损伤[12]。

本次研究初步表明晚期血吸虫病患者外周血NKT细胞的变化及其与肝功能的相关关系，对进一步探究NKT细胞数量对治疗晚期血吸虫病有重要意义。

参考文献

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（收稿日期：2019-05-23） （本文编辑：桑茹南）