COX-2、VEGF及miRNA表达水平与食管鳞状细胞癌患者的临床疗效及预后的关系

吕 歆

食管癌是一种严重的消化道恶性肿瘤，组织病理学分型主要为食管鳞状细胞癌[1]。目前，食管鳞状细胞癌的发病机制尚不清晰，因此对该疾病发生发展过程中关键因子进行研究，为食管癌的诊断和治疗提供新的方向。研究表明，VEGF是调节淋巴管形成转移的关键信号通路[2]。另外COX-2的表达与淋巴结转移密切相关。近年来，分子生物学的研究发现，VEGF与COX-2表达量的改变与miRNA的表达量有相关性，其促进了癌细胞的增殖与转移[3]。为了进一步了解COX-2、VEGF及miRNA的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的临床疗效及预后的关系，我院选择了120例患者进行相关研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选择2014年1月至2016年1月我院收治确诊的120例临床资料完整的食管鳞状细胞癌患者作为观察组；并选择同期来医院体检的120例正常人为对照组。对照组男性67例，女性53例，年龄31～72岁，平均年龄(51.79±5.21)岁；观察组男性65例，女性55例，年龄32～73岁，平均年龄(52.06±5.17)岁。2组患者的平均年龄、性别比例无明显差异(P>0.05)。观察组患者均为初治患者，并在全麻下行食管癌根治术，术后病理证实为鳞癌，组织分化程度：低分化35例、中分化61例、高分化24例，按照1997年UICC分期标准，T1期26例，T2期45例，T3期37例，T4期12例。该研究符合医院伦理会研究标准。

纳入标准：患者参照我国卫生部2015年《原发性食管癌诊疗规范》[4]的诊断标准证实为食管鳞状细胞癌；预计生存期≥3个月；自愿入组且签署了知情同意书；患者接受手术治疗均不同意采取其他治疗方案。

排除标准：5年内患有其他肿瘤史的患者；哺乳期或妊娠期患者；有精神病史的患者。

1.2 方法

食管鳞状细胞癌患者均采用单纯根治性切除术治疗，并按患者治疗效果分为有效组和无效组。

采集患者病理组织标本，用甲醛固定，经过脱水，浸蜡，石蜡包埋等制作切边，厚度为4 μm。脱蜡，然后经水化，采用EDTA抗原修复COX-2、VEGF。最后，通用型免疫组化染色SP试剂盒，设置合适的COX-2和VEGF的工作浓度。将食管鳞状细胞癌细胞组织培养，利用Trizol试剂裂解提取癌组织RNA，严格按照说明书进行操作，利用紫外分光光度计滴定RNA浓度(主要测定的是miRNA-21的浓度)。原发病灶和复发转移病灶取自同一人进行对比。所有患者的基因检测均为病理。

1.3 观察指标

COX-2结果判断：COX-2阳性染色主要位于细胞质，呈棕黄色弥散性分布，观察核膜着色情况。用半定量法以肿瘤细胞的染色阳性率表示肿瘤的表达情况，以比例积分75%～100%计4分，50%～74%计3分，25%～49%计2分，<25%计0分。染色强度用0(阴性)，1(弱阳性)，2(阳性)表示。COX-2的表达水平用染色阳性率与染色强度乘积表示0～1分为(-)，2～3分为(+),4～6分为(++)，>6分为(+++)。

VEGF结果判断：按照文献方法，免疫组化染色以细胞质或细胞膜染成棕黄色为阳性。选择染色均匀的癌间质区，在400倍视野下，按着色细胞数占视野细胞数的百分比，未见阳性细胞为(-)，阳性细胞<30%为(+)，≥30%为(++)。(-)在数据处理中认为是阴性，(+)(++)(+++)在数据处理中为阳性。

临床疗效评价[5]：按照WHO制定的实体瘤疗效评价标准，将疗效分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(NC)、进展(PD)。有效组为完全缓解与部分缓解的患者；无效组为无变化和进展的患者。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 对比2组参试者入院检查时的COX-2、VEGF与miRNA的表达含量

观察组患者的COX-2、VEGF、miRNA表达量高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 对比2组参试者入院检查时的COX-2、VEGF与miRNA的表达含量

2.2 对比COX-2、VEGF与miRNA表达量与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系

对比发现，食管鳞状细胞癌COX-2、VEGF与miRNA表达量与患者的年龄，性别及组织分化程度有轻微关系，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3 对比治疗后有效组和无效组患者COX-2、VEGF与miRNA表达量

无效组的COX-2、VEGF、miRNA表达量明显高于有效组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 对比食管鳞状细胞癌COX-2、VEGF与miRNA表达量与临床病理特征的关系

表3 对比治疗后有效组和无效组患者COX-2、VEGF与miRNA表达量

2.4 对比原发病灶和复发转移病灶间COX-2、VEGF与miRNA阳性表达率

对比食管鳞状细胞癌患者原发病灶的COX-2、VEGF与miRNA阳性表达率明显低于复发转移病灶患者，对比有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 对比原发病灶和复发转移灶间COX-2、VEGF与miRNA阳性表达率(例，%)

3 讨论

食管癌是食管腺体或黏膜上皮发生的恶性肿瘤，其发病率随年龄的增长而增加[5]。根据流行病学研究发现，食管癌在我国的发病类型主要是食管鳞状细胞癌[4]。肿瘤细胞通过对周围组织的直接浸润淋巴道、血道等途径转移。随着医疗技术的进步及研究的深入，食管癌根治性切除术能有效地改善患者的治疗效果，但由于淋巴结清除的局限性和隐匿性转移的存在，术后复发转移是患者手术治疗失败的主要原因[6]。临床上，为了寻找较好的监测患者治疗效果及预后的评价标准，分子生物学的发展提出对血清中COX-2、VEGF等物质的含量变化作为评价患者预后的标准[7]。

COX-2基因定位于1号染色体的lq25，由10个外显子和9个内含子构成，全长8.3 kb，由604个氨基酸缩合而成的多肽。COX-2是诱生型花生四烯酸的环氧酶代谢途径的限速酶，催化花生四烯酸转化为前列腺素[8-9]。正常状态下，COX-2在外界因素的刺激下会提升其表达量。近期研究证实，COX-2能通过加速细胞增殖，阻止细胞凋亡，增加生成新生血管，抑制患者免疫机制，加快肿瘤的增生和转移，也就是说COX-2在肿瘤的发生发展中起到重要作用[10]。VEGF基因位于染色体6p21，由7个内含子和8个外显子组成。VEGF由于其外显子剪切的不同而形成5种异构体。VEGF是肿瘤组织中最重要的促血管生成因子，参与肿瘤的生长增殖、分化及转移过程[11]。mi-RNA通过完全或部分与靶向mRNA的3'非翻译通过碱基对不完全或完全结合，抑制mRNA的翻译或切割降解，从而在转录后调节基因表达[12]。研究发现，miRNA在外周血肿能稳定存在，患者在不同时期、不同部位需要不同的蛋白发挥作用，一部分miRNA通过转录后诱导癌基因的过度表达，促进肿瘤增殖和转移。因此，一系列的mi-RNA在癌组织中的异常表达，使其成为诊断和评价临床疗效及预后的重要指标[13]。mi-RNA-21是miRNA的成员，其在多种肿瘤中异常表达，并参与肿瘤的发生发展。研究显示，mi-RNA-21在食管癌中表达水平升高，抑制食管癌患者正常细胞代谢，进而阻碍AKT和ERK信号通路的畅通[14]。

研究表明，观察组患者的COX-2、VEGF、miRNA表达量高于对照组。对比发现，食管鳞状细胞癌COX-2、VEGF与miRNA表达量与患者的年龄，性别及组织分化程度有轻微关系，与文献报道一致[15]。有效组患者的COX-2、VEGF、miRNA表达量低于无效组。对比食管鳞状细胞癌患者原发病灶的COX-2、VEGF与miRNA阳性表达率明显低于复发转移病灶患者。这表明，食管癌原发病灶和复发转移病灶之间存在这变化，表明COX-2、VEGF及miRNA在食管癌的发生发展中起重要作用。

综上所述，监测COX-2、VEGF联合miRNA表达水平，能有效预测食管鳞状细胞癌的临床疗效及预后情况，值得临床借鉴。