酒依赖共病双相情感障碍患者冲动攻击行为与5-HTR1B基因多态性关联分析

贺长兴，邹韶红，贾丽娜，徐向东，赵宗峰，佟钙玉，张 义，张 丞

(1.石河子大学医学院，新疆 石河子 832003；2.新疆维吾尔自治区人民医院，新疆 乌鲁木齐 830001；3.新疆精神卫生中心，新疆 乌鲁木齐 830002

酒依赖在双相情感障碍患者中较普遍，45%的双相情感障碍患者共病酒依赖，两种疾病共病的终身患病率约为35%[1-3]。双相情感障碍的自杀率是普通人群的20～30倍[4]，酒精的使用会影响双相情感障碍的预后并增加其复发风险[5-6]。双相情感障碍遗传度为60%～85%，其遗传度与亲属关系程度存在显著关联[7-8]。酒依赖的遗传度为30%～70%，多巴胺(DA)系统、5-羟色胺(5-HT)系统与酒依赖相关[9-10]。精神疾病的攻击行为分为手段性、冲动性、精神病性攻击行为，双相情感障碍的攻击行为多数是冲动攻击行为，大脑前额叶皮质5-HT能神经元减少与其攻击行为有关[11-13]。5-HT及其代谢物水平下降导致冲动攻击行为增加，5-HTR1B被认为是与人类和啮齿类动物攻击性有关的候选基因，与多种精神病理学有关，包括病理性侵犯、酗酒和自杀等[14-15]。研究显示，暴露在攻击性环境中的大鼠5-HTR1B浓度增加，进而导致大鼠的冲动攻击性增加[16]。已有较多关于5-HTR1B rs6296多态性与各种精神疾病患者冲动攻击行为关联性的研究报道[17-22]，但关于该基因多态性与酒依赖共病双相情感障碍的研究尚无报道。本研究探讨酒依赖共病双相情感障碍患者的冲动攻击行为与5-HTR1B rs6296基因多态性的关联性，为酒依赖共病双相情感障碍患者的冲动攻击行为导致病理生理改变机制潜在遗传学差异的研究提供参考。

1 对象与方法

1.1 对象

收集2013年1月-2014年10月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院临床心理科与新疆精神卫生中心戒酒科的住院患者。入组标准：①符合《精神障碍诊断与统计手册(第4版)》(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，fourth edition，DSM-IV)酒依赖诊断标准，同时符合双相情感障碍诊断标准；②男性；③经两名具备精神科主治医师以上职称的医师明确诊断。排除标准：①有脑器质性疾病史、躯体疾病史；②患有其他精神活性物质和非依赖性物质所致心境障碍。符合入组标准且不符合排除标准共230例。根据修订版外显攻击行为量表(Modified Overt Aggression Scale，MOAS)评分分为研究组(冲动攻击行为组)和对照组(无冲动攻击行为组)：MOAS加权总分≥5分且“体力攻击”项≥1分，为研究组(n=128)；加权总分≤4分且“体力攻击”项为0分，为对照组(n=102)。本研究通过新疆维吾尔自治区人民医院伦理委员会审批，研究对象及家属均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 评定方法

采用自制一般情况调查表收集研究对象的年龄、民族、受教育程度、经济状况等资料。采用MOAS评定患者入院前1周攻击行为的种类和程度。采用0～4分5级评分法，MOAS将4类攻击行为分别命名为言语攻击、对财产的攻击、自身攻击和体力攻击。以MOAS加权总分评定患者总体严重程度，加权总分=言语攻击评分×1+对财产的攻击评分×2+自身攻击评分×3+体力攻击评分×4。加权总分越高，攻击行为越强。

由1名精神科主治医师和研究者共同对患者进行测评，测评地点为心理测评室。在调查前进行系统的评定方法学习和训练。患者在研究者指导下填写MOAS，其中有关攻击行为的敏感问题由研究者对患者进行详细讲解沟通后记录，若有可疑信息，则再次询问其家属以确认。

1.2.2 基因组DNA提取及特定片段PCR扩增

在患者住院次日早晨，使用抗凝管收集3～4 mL空腹外周静脉血。采用试剂盒法提取DNA。rs6296上游引物为：5'-GAAACAGACGCC CAACAGGAC-3'，下游引物为：5'-GAAACAGACG CCCAACAGGAC-3'。PCR反应总体系：30 μL，反应液：PCR mix 15 μL，模板DNA：1 μL，上下游引物各1 μL(10 mol/L)，添加灭菌双蒸水至30 μL，使用PCR扩增仪扩增。反应程序：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，58℃退火45 s，72℃延伸30 s；35个循环，72℃延伸5 min，4℃保存。反应结束后取扩增产物5 μL，置于1%琼脂糖凝胶中电泳20 min(恒压150 V)，使用凝胶成像系统对电泳结果进行观测、拍照。由北京鼎国生物技术工程公司对PCR产物进行测序、分型并记录rs6296位点的多态性。

1.3 统计方法

采用SPSS 17.0进行统计分析。Hardy-Weinberg平衡检验、基因型分布和等位基因频率差异比较均采用χ2检验。

2 结 果

2.1 两组一般情况比较

研究组128例，均为汉族，年龄24～64 岁，平均(40.18±6.25)岁；对照组102例，均为汉族，年龄26～63 岁，平均( 41.08±6.28)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P均> 0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组等位基因和基因型频率比较

有冲动攻击行为的酒依赖共病双相情感障碍患者组与无冲攻击行为组5-HTR1B rs6296位点等位基因和基因型频率差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

3 讨 论

本实验对酒依赖共病双相情感障碍患者的冲动攻击行为与5-HTR1B rs6296基因多态性的关联性进行研究，结果显示酒依赖共病双相情感障碍患者冲动攻击行为与5-HTR1B rs6296基因多态性无相关性。目前部分关于精神疾病的症状学、基因学研究取得了与本研究一致的结果：Contini等[17]的单倍型分析实验表明，5-HTR1B rs6296多态性在酒依赖患者中存在强阳性控制。Yi等[18]对汉族秽语综合症(Tourette syndrome，TS)患者的研究显示，5-HT1B rs6296基因多态性与汉族TS患者的冲动攻击行为无相关性。Müller等[19]对注意力缺陷多动障碍(Attention-deficit hype ractivity disorder，ADHD)患者与5-HT1BR关联性进行研究，结果显示rs6296位点与ADHD患者外在的反社会行为无关联性。

表2 两组等位基因和基因型频率比较[n(%)]

另外几项研究结果与本研究存在差异：Ortiz等[20]认为血清素(5-HT又称为血清素)与谷氨酸之间存在的生物作用可能影响强迫症(Obsessive-compulsive disorder，OCD)儿童患者的病理生理学途径，且rs6296位点基因多态性与之有着明显的相关性。Kao等[21]的研究显示，5-HTR1B rs6296-C等位基因通过降低HTR1B mRNA水平，进而导致抑郁症患者表现出更多的攻击行为，甚至产生自杀意念。Hakulinen等[22]的一项大样本研究显示，5-HTR1B SNP rs6296与儿童时期的攻击行为有关，携带C/C基因型的个体比携带C/G者更具有攻击性。HTR1B SNP rs6296可能修改了童年攻击行为与成年人敌对行为之间的关系。激进的行为和敌意可能会形成一种生活过程模式，而HTR1B rs6296基因可能有助于这种模式的发展。5-HT是色氨酸代谢途径的产物，是人类中枢神经系统最重要的神经递质之一，在学习、记忆、睡眠及情绪中发挥重要作用。5-HT受体通过激酶和磷脂酶信号通路级联介导其生物学效应，最终改变突触后电位、可塑性和基因表达。

上述实验提示rs6296基因多态性与冲动攻击行为的关联性在不同的精神障碍中存在不同的效应。也有研究表明5-HTR1B其他位点基因也存在相似的效应：Huang等[23]对精神病患者和健康志愿者的实验结果显示：药物滥用障碍和重度抑郁似乎与5-HTR1B G861C基因座有关，但未发现双相情感障碍、精神分裂症、酗酒和自杀企图与该基因多态性相关。

本研究不足之处：酒依赖及双相情感障碍是多病因、多基因遗传性疾病，本实验进行了5-HT1B基因单位点的多态性研究，忽略了环境因素在疾病病因学中的作用。在以后的实验中应进一步完善各基因的多位点多态性联合研究，并增加与环境因素、负性生活经历的交互研究。