高效液相色谱同时测定游泳池水中二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸的方法研究

吴 飞 陈 晨

（扬州市疾病预防控制中心 江苏 扬州 225002）

对游泳池水进行严格的消毒杀菌，是防止各种疾病的传播，保障游泳者健康与池水水质的必要措施。我国 GB26370-2010《含溴消毒剂卫生标准》[1]规定，溴氯海因和二溴海因适用于游泳池水、污水和一般物体表面消毒。GB/T36758-2018《含氯消毒剂卫生要求》[2]规定，二氯海因可用医疗卫生机构、公共场所和水的消毒。

二氯海因、溴氯海因和二溴海因均属乙内酰脲类衍生物，在水中水解生成5,5-二甲基乙内酰脲、次溴酸和次氯酸，起消毒杀菌作用。但其在消毒过程中可与水中有机物发生反应，生成对人体有害的卤代消毒副产物。大量研究表明，卤乙酸仅次于三卤甲烷的第二大类 DBPs，其浓度约占DBPs总量的13%，但致癌风险占总致癌风险的91.95%以上。常见的HAAs 有 一氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸、一溴乙酸、二溴乙酸、三溴乙酸、溴氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸9 种[3]。目前文献报道的测定乙内酰脲的方法有液相色谱法[4]；9种卤乙酸的检测方法有液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法、气相色谱法[3,5-6]，前两种方法仪器设备价格昂贵，难以在基层实验室开展检测，后一种方法需要衍生，操作繁琐，本实验在保证目标化合物峰型对称性和分离效果的条件下，通过适当加大进样量，建立了同时测定游泳池水中二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸的高效液相色谱分析方法

1.实验部分

1.1 仪器

1290型高效液相色谱仪，配自动进样器和二极管阵列检测器（美国Agilent公司）。

1.2 试剂

二甲基乙内酰脲、9种卤乙酸标准品（上海安谱公司）；甲醇 (上海安谱公司CNW)；磷酸氢二钠、磷酸（国药集团化学试剂有限公司）。

1.3 标准储备液与标准溶液配制

分别取适量的二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸标准品（精确到0.01mg）用纯水溶解定容至50ml，配制浓度为1000mg/L的混合标准储备液，置于冰箱中保存。精密吸取一定量的标准储备液，用纯水逐级稀释成0.02mg/L～20.0mg/L混合标准溶液系列。

1.4 实验方法

1.4.1 样品前处理 均匀水样经0.45μm微孔滤膜过滤后，收集约1.5ml按色谱条件进行测定。

1.4.2 色谱条件 PICKERING-C8 色谱柱（4.6 mm×250mm，5µm）；柱温30℃；流量1.0ml/min；进样体积100µL；检测波长为210nm,流动相：A为甲醇，B为0.01mol/L磷酸氢二钠（PH7.5）。梯度洗脱程序：0～6min时，A为5%；6～20min时，A由5%升至20%，20～25min时，A由20%降至5%，保持5min。

图1 混合标准溶液色谱图

2.结果

2.1 流动相条件的选择

为确定合适的流动相和梯度洗脱程序,分别采用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸铵、甲醇-0.01mol/L磷酸氢二钠作为流动相进行实验，并比较了在不同pH条件下的分离度，在柱温30℃；流量1.0ml/min；流动相：A为甲醇，B为0.01mol/L磷酸氢二钠（PH7.5），0～6min时，A为5%；6～20min时，A由5%升至20%，20～25min时，A由20%降至5%，保持5min的条件下甲基乙内酰脲和9种卤乙酸能达到有效分离且峰型对称性好，游泳池水中尿素在此条件下不保留，不对检测产生干扰，故选用上述流动相比例作为本实验检测条件。

2.2 检测波长的选择

利用二极管阵列检测器在190nm～400nm之间进行波长扫描，在本流动相条件下二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸最大吸收波长在200nm～216nm之间，综合考虑10种化合物的检测灵敏度和不同检测波长下基线噪声因素，选择 210nm作为本方法的检测波长。

2.3 标准曲线和检出限

用纯水稀释混合标准储备溶液配制成0.02、0.05、0.10、0.25、0.50,1.00,5.00，10.0,20.0mg/L混合标准溶液,按实验方法进行测定,并绘制标准曲线。结果表明：仅一氯乙酸0.5～20.0mg/L范围，二甲基乙内酰脲和其余9种卤乙酸的质量浓度均在0.02～20.0mg/L范围内与其峰面积呈线性关系,见表1。

2.4 精密度与回收实验

分别向自来水样中添加低、中、高三个浓度的二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸混合标准溶液，按上述实验条件分别进行6次测定，见表2。

表1 线性回归方程、相关系数及检出限

表2 精密度和回收实验结果（n=6）

3.结论

本实验建立了采用高效液相色谱同时测定游泳池水中二甲基乙内酰脲和9种卤乙酸的检测方法.方法的建立对了解游泳池水中的有毒有害物质，进行有毒有害物质的筛查，保障游泳者、游乐者、艺术表演者的身体健康提供了可靠的科学依据。