VEGF和Bcl-2在食管癌患者血清中的表达水平及其临床意义

尹博，王兵，牛磊，刘宗志，肖琳，隋玺仲，程斌，霍承瑜#

1民航总医院心胸外科，北京 100123

2国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院胸外科，北京 1000210

食管癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤，淋巴结转移、局部蔓延和血源性播散是导致食管癌患者病死的主要危险因素。转移是恶性肿瘤的一个重要生物学特征，淋巴结转移是恶性肿瘤细胞发生转移的重要途径之一，也是导致肿瘤患者在外科手术治疗后死亡和复发转移的重要影响因素[1-2]。食管癌患者于发病早期即会发生淋巴结转移，但由于早期食管癌患者无特异性临床症状，确诊时已经发展为中晚期，对患者的预后极其不利，因此，寻找一种能够控制淋巴管生成的生长因子及与肿瘤相关的淋巴结特异性标志物，对防治食管癌淋巴结转移具有重要的临床价值[3-4]。血管内皮细胞生 长 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是影响血管生成的重要因子之一，可参与肿瘤淋巴管的生成[5]。B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2，Bcl-2）基因是一种癌基因，对细胞的凋亡具有抑制作用，对肿瘤的发生与发展具有促进作用[6]。本研究主要对VEGF和Bcl-2在食管癌患者血清中的表达情况进行探讨，并分析血清VEGF和Bcl-2表达与食管癌患者临床特征的关系及与淋巴结转移的相关性，旨在为临床治疗食管癌提供理论依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2013年7月至2017年6月民航总医院收治的86例食管癌患者作为研究组。纳入标准：①均符合食管癌诊断标准[7]，并均经病理学检查确诊为食管癌；②均未接受过放疗、化疗及靶向治疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并自身免疫系统疾病；③合并严重肝肾功能不全；④合并精神类疾病。86例食管癌患者中，男49例，女37例；年龄为57～74岁，平均年龄为（64.17±5.97）岁；发病部位：胸下段24例，胸中段21例，胸上段27例，颈段14例；TNM分期：I～Ⅱ期49例，Ⅲ～Ⅳ期37例；病理类型：鳞癌59例，非鳞癌27例；淋巴结转移57例，非淋巴结转移29例；分化程度：低分化47例，中高分化39例。另选取同时期在民航总医院进行体检的52例健康体检者作为对照组，其中，男29例，女23例；年龄为55～72岁，平均年龄为（63.19±5.32）岁。两组受试者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究通过医院医学伦理委员会的审核批准，受试者均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

于清晨抽取所有受试者的空腹肘静脉血5 ml，应用离心机（购自美国Beckman Coulter公司）以3000 r/min的转速离心10 min，离心半径为10 cm；将血清与血浆分离，收集离心管上层的血清，并放在-80℃的冰箱中保存待检。应用酶联免疫吸附试验检测受试者的血清VEGF和Bcl-2水平，所有操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行，试剂盒由上海歌凡生物科技有限公司提供。

1.3 观察指标

比较两组患者的血清VEGF、Bcl-2水平，分析血清VEGF、Bcl-2水平与食管癌患者临床特征的关系，以及血清VEGF、Bcl-2水平与食管癌患者淋巴结转移的相关性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0软件对-数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman秩相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清VEGF、Bcl-2水平的比较

研究组的血清VEGF、Bcl-2水平分别为（215.32±21.37）ng/L、（18.29±2.65）ng/ml，均分别明显高于对照组的（67.09±6.58）ng/L、（4.51±0.32）ng/ml，差异均有统计学意义（t=48.584，P＜0.01；t=37.281，P＜0.01）。

2.2 血清VEGF、Bcl-2水平与食管癌患者临床特征的关系

低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移食管癌患者的血清VEGF水平均明显高于中高分化、TNM分期为I～Ⅱ期、无淋巴结转移的食管癌患者，差异均有统计学意义（t=13.685、6.456、4.137，P＜0.01）；低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移食管癌患者的血清Bcl-2水平均明显高于中高分化、TNM分期为I～Ⅱ期、无淋巴结转移的食管癌患者，差异均有统计学意义（t=13.050、16.479、10.061，P＜0.01）。不同年龄、病理类型、发病部位食管癌患者的血清VEGF、Bcl-2水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

2.3 血清VEGF、Bcl-2水平与食管癌患者淋巴结转移的相关性

经Spearman秩相关分析，结果显示，食管癌患者血清VEGF、Bcl-2的表达与食管癌患者的淋巴结转移均呈正相关（r=0.597，P=0.004；r=0.671，P=0.001）。

3 讨论

食管癌患者的预后与肿瘤浸润程度、病理类型、淋巴结转移等有关[8]。肿瘤细胞的侵袭与转移是肿瘤进展的主要原因，也是影响肿瘤患者预后的重要因素。近年来，通过早期诊断及有效手术治疗，部分食管癌患者的生存率有所提高，但是，仍有部分食管癌患者会发生肿瘤细胞的侵袭与转移，且多数患者死于肿瘤转移。肿瘤发生、发展的关键在于抑癌基因与癌基因调控功能的失调，因此，癌基因分子靶向治疗成为大多数学者研究食管癌治疗方法的重点；另外，食管癌细胞的侵袭与转移机制也是目前临床学者的研究热点[9-11]。恶性肿瘤的发生、发展是一个极其复杂的过程，而该过程中会伴随着血管的生成、基因的突变及细胞的凋亡等，存在大量的细胞因子及蛋白类物质（血清蛋白和肽类等）参与其中，基于此，本研究分析了血清VEGF和Bcl-2表达与食管癌患者临床特征的关系及与淋巴结转移的相关性，旨在为临床治疗食管癌提供理论依据。

表1 不同临床特征食管癌患者的血清VEGF、Bcl-2水平（n=86）

实体肿瘤的形成主要依赖于新生血管的生成，血管抑制因子和血管生长刺激因子的平衡与肿瘤的发展密切相关。VEGF是目前临床上已知的促血管生成因子之一，具有较高的特异性，可诱导新血管生成，进而使肿瘤细胞得到充足的营养，加快肿瘤细胞的增殖，提高肿瘤血管的通透性，促进肿瘤细胞的侵袭与转移。研究显示，VEGF在多种肿瘤组织中均呈高表达，在肿瘤的发生、发展中具有重要作用[12-13]。VEGF不仅可以通过肿瘤细胞自身分泌产生，还可能会促进乳腺肿瘤干细胞的自我更新[14]。本研究结果显示，研究组患者的血清VEGF明显高于对照组（P＜0.01），低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移食管癌患者的血清VEGF水平均明显高于中高分化、TNM分期为I～Ⅱ期、无淋巴结转移的食管癌患者（P＜0.01），说明VEGF在食管癌患者中的表达水平较高，且可能与患者的分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况有关，分析其原因可能是因为VEGF能够促进内皮细胞的迁移与增殖，并能够诱导肿瘤血管的新生，为肿瘤细胞的增殖提供所需的营养物质，促进肿瘤基质形成、肿瘤持续生长及肿瘤细胞进入新生的血管，最终使肿瘤发生转移，而肿瘤细胞为了进一步增殖，需要分泌更高水平的VEGF，因此，在低分化、有淋巴结转移和TNM分期较高的食管癌患者血清中，VEGF的表达水平均较高。Bcl-2是抗细胞凋亡的重要基因，具有抗肿瘤细胞凋亡的作用，当其表达水平升高时，可对其他凋亡因素（如促凋亡蛋白等）产生抑制作用，其能够通过多个位点的磷酸化对细胞由G0期向S期转化的时间进行调控，从而延长肿瘤细胞的存活时间，使肿瘤细胞避免因其他诱导因素而凋亡，同时，其高表达可使DNA损伤的细胞逃避凋亡，进而促进肿瘤细胞的转化及肿瘤的形成[15]。本研究结果显示，研究组患者的血清Bcl-2水平明显高于对照组（P＜0.01），且低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移食管癌患者的血清Bcl-2水平均明显高于中高分化、TNM分期为I～Ⅱ期、无淋巴结转移的食管癌患者（P＜0.01），说明Bcl-2在食管癌患者的血清中也高表达，并可能与食管癌的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况有关，分析其原因主要是Bcl-2的抗凋亡作用能够促进肿瘤的发生与发展，因此，在低分化、有淋巴结转移及TNM分期较高的食管癌患者血清中，Bcl-2的表达水平亦均较高。Spearman秩相关分析结果显示，血清VEGF、Bcl-2表达与食管癌患者的淋巴结转移均呈正相关（P＜0.01），说明VEGF、Bcl-2参与了食管癌患者的淋巴结转移过程。

综上所述，VEGF、Bcl-2在食管癌患者的血清中表达水平较高，VEGF、Bcl-2的表达情况可能与患者的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况有关，且VEGF、Bcl-2的表达均与食管癌患者的淋巴结转移呈正相关。临床可通过检测以上指标对食管癌患者进行早期诊断，并实施积极有效的治疗，从而改善患者的预后。