妊娠期糖尿病孕妇血清Th1/Th2比值测定及分析

肖文霞，王会芝，周广杰，栾艳秋

(北京市东城区第一妇幼保健院，北京 100007)

辅助T细胞(Th)根据其分泌的细胞因子和功能不同，可分为Th1和Th2细胞[1]。Th1/Th2是维持机体健康的重要免疫机制之一。在正常情况下，Th1和Th2两种细胞互为抑制，机体处于Th1/Th2动态平衡中，但在病毒感染、药物及各种应激等情况下，Th1/Th2平衡遭到破坏，机体会出现免疫反应异常，导致组织器官损伤。本研究回顾性分析我院30例妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清中Th1分泌的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)及Th2细胞分泌的细胞因子白介素-4(IL-4)的水平，用IFN-γ/IL-4比值表示Th1/Th2，以探讨Th1/Th2和GDM的相关性，为临床预防和治疗GDM提供一定的理论基础。

一、资料与方法

1.研究对象：选取2015年10月至2016年10月间在我院住院治疗的GDM孕妇30例为GDM组，年龄20～44岁，孕周37～40周。同时随机选取同一时期内在我院住院的正常孕妇30例为对照组，年龄20～42岁，孕周37～41周。纳入标准：(1)符合GDM诊断标准：妊娠24～28周孕妇口服75 g无水葡萄糖进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)，空腹及服糖后1 h、2 h血糖值分别为5.1 mmol/L、10.0 mmol/L、8.5 mmol/L，任何一点血糖值达到或超过上述标准即诊断为GDM；(2)两组孕妇均为单胎孕妇，且均无产兆。排除标准：(1)糖尿病合并妊娠孕妇，诊断为GDM但孕期使用过胰岛素者；(2)存在其他内外科合并症、宫内感染、临床发热征象者。

GDM组孕妇孕期通过调整饮食及运动，血糖控制基本满意，孕期未使用胰岛素。所有受试对象均知情同意并签署知情同意书，本研究由我院伦理委员会审核批准。

2.标本制备：所有对象在早晨抽取空腹静脉血4 ml，部分血液送我院检验科进行糖化血红蛋白测定，部分血液常温下静置2.5～3.0 h，以3 000 r/min的速率离心10 min，取上清液置于EP管中，置于-80℃冰箱保存，待测。详细记录每位对象的年龄、孕周、血糖控制基本情况、糖化血红蛋白数值等情况。

3.实验方法：用ELISA方法测定两组孕妇血清中的IFN-γ和IL-4，试剂盒由深圳晶美公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。

二、结果

1.两组研究对象的一般资料比较：两组研究对象的年龄、孕周、糖化血红蛋白水平比较，均无显著性差异(P>0.05)(表1)。

2.两组对象Th1/Th2细胞因子比较：两组比较，GDM组孕妇血清中IFN-γ水平显著低于对照组(P<0.05)；IL-4水平则显著高于对照组(P<0.05)。GDM组孕妇血清中IFN-γ/IL-4比值显著低于对照组(P<0.05)(表2)。

表1 两组研究对象一般资料比较(-±s)

表2 两组对象血清中IFN-γ和IL-4测定结果比较(-±s)

注：与对照组比较，*P<0.05

讨 论

免疫系统是机体的第一道防线，可以抵抗病原体感染及危险信号刺激。T淋巴细胞，尤其是CD4+T淋巴细胞可以通过辅助B细胞在免疫反应中发挥重要作用。CD4+T细胞根据产生的细胞因子不同，可分为Th1和Th2细胞因子。Th1细胞可通过分泌IL-2和IFN-γ，从而介导细胞免疫[2]；Th2细胞则通过分泌IL-4和IL-10促进B淋巴细胞增殖以产生免疫球蛋白G(IgG)和IgE，从而介导体液免疫反应[3]。正常情况下，机体内Th1和Th2相互排斥、相互调节，保持Th1/Th2比值的动态平衡，为机体提供最佳的免疫保护作用。但当机体受到外界病原体刺激时，Th1/Th2比值可能出现失衡并向某一方面转化[4]。

正常妊娠是一个类似于同种异体移植的复杂过程，胎儿携带1/2异于母体的父源性白细胞组织相容性抗原(HLA)[5]，这对于母亲来说是异物，因此胚胎植入过程某种意义上类似移植，在正常妊娠中，胚胎不会被母体免疫系统所排斥[6]，胎儿表面或胎盘组织表达的抗原可以诱导母体的同种免疫反应，母体能够免疫耐受半同种胎儿来源的滋养细胞，这是胚胎种植和成功妊娠的关键[7]。有研究表明：Th1型细胞因子，如IL-2和IFN-γ，可以提高NK细胞(自然杀伤细胞)的毒性，从而抑制胚胎种植、滋养细胞生长及胚胎发育[8]，介导胎儿排斥；而Th2型细胞因子，如IL-4和IL-10可通过抑制Th1型免疫反应，保护胎儿免受免疫系统攻击，从而有利于妊娠维持[9]。因此，妊娠是一种Th1/Th2向Th2偏移的现象，Th2偏移是对Th1细胞因子抑制的结果[10]。Th2偏移通常用以解释妊娠的免疫耐受，并被认为是成功妊娠的重要标志[11-12]。另外，Th2占优势可刺激机体产生大量抗体，不仅有利于对抗细菌，还有利于提供给胎儿被动免疫[13]。相反，Th1占优势则可促进胎儿排斥，引起复发性流产、妊娠期高血压疾病、胎儿生长受限及早产等[14-15]。

已有研究表明IFN-γ+T细胞分泌IFN-γ，代表Th1细胞[16]，因此可以用IFN-γ水平代表Th1细胞水平。本研究结果显示：GDM孕妇血清中IFN-γ水平显著低于对照组(P<0.05)，提示GDM孕妇体内IFN-γ分泌减少，说明其体内Th1细胞水平降低。这与Ategbo等[17]的研究结果相一致，该研究用ELISA方法测定59例GDM和60例正常孕妇血清中的细胞因子，结果显示：GDM孕妇血清中IFN-γ水平明显低于正常对照组，并推测Th1细胞因子下降有利于GDM孕妇维持妊娠。IL-4+T细胞分泌IL-4，代表Th2细胞[18]，IL-4的水平可以表示Th2细胞水平，本研究结果显示：GDM孕妇血清中IL-4水平显著高于对照组(P<0.05)，提示GDM孕妇体内IL-4分泌增多，说明其体内Th2细胞水平升高。

IFN-γ和IL-4之间的平衡对Th0向Th1或Th2分化起关键作用，可通过检测IFN-γ/IL-4的平衡来反映机体Th1/Th2的变化[16]。本研究结果显示：与正常孕妇相比，GDM孕妇血清中IFN-γ/IL-4比值显著降低(P<0.05)，提示GDM孕妇体内Th1/Th2比值失衡，更加向Th2漂移。因此本研究认为：与其他妊娠并发症如流产、子痫前期等不同，GDM孕妇体内Th1/Th2不是向Th1转化，而是更加向Th2漂移，是一种Th2更加占主导的状态，提示GDM孕妇体内存在着免疫激活和功能失调。由于Th2细胞具有抗炎作用，可抑制细胞免疫反应，因此我们推测：由于GDM是一种炎症状态[18]，体内各种炎症因子明显升高，Th2细胞优势表达，可能是机体的一种代偿机制，通过分泌更多的Th2细胞因子，抑制体内的炎症进一步加重，并促进母体免疫更加耐受，有利于维持妊娠。

关于GDM孕妇体内Th1/Th2比值更加向Th2漂移的机制目前尚不清楚。有学者认为GDM孕妇体内存在的高胰岛素血症，可促进Th0细胞向Th2表型分化[19]，从而出现Th2占主导地位。Viardot等[20]通过研究发现：胰岛素可以影响T细胞分化，促进T细胞向Th2表型转化，不仅可增加Th2细胞数量，还可增加Th2分泌的细胞因子。胰岛素促使Th1/Th2比值降低是胰岛素重要的免疫调节作用，与胰岛素的其他抗炎症作用，包括抑制NF-kB，减少抗炎症细胞因子以及促进抗炎症细胞因子生成相一致。另有学者认为GDM孕妇体内可产生过多的自由基，同时抗氧化能力下降，存在氧化应激[18]，而氧化应激可以促进CD4+T细胞向Th2表型分化[21]。但是，关于GDM患者Th1/Th2失衡的机制尚需进一步研究与探讨。

综上所述，GDM患者体内存在着Th1/Th2失衡的现象，与其他妊娠并发症不同，Th1/Th2失衡不是向Th1转化，而是更向Th2转化，Th2更加优势表达。这种失衡是否是GDM的发病机制之一尚需进一步深入研究。