丙氨酸氨基转移酶的参考方法与Beckman DxC 800检测系统测定结果的比对研究

申 彬,杨泽华

(山西医科大学第一医院检验科,太原 030001;*通讯作者,E-mail:zehuay026@163.com)

丙氨酸氨基转移酶(ALT)在人体肝脏中含量最多、活性最高,轻微的肝细胞受损,ALT活性可增高1倍,是肝功能受损最灵敏的指标之一,各种肝脏疾病均可引起ALT的升高,临床上主要用于肝脏疾病的诊断。目前ALT的检测是在自动生化分析仪上,时常面临着同一份标本在同一实验室内不同检测系统间进行检测时出现检验结果不一致的现状,不同的临床化学实验室的检验差异就更大[1],而且酶学检测对反应条件具有依赖性,使不同的检测方法间的结果可比性差[2],从而使检验结果具有不确定性。ISO/15189(医学实验室-质量和能力的专用要求)[3]对检验结果的溯源性和可比性提出了明确要求,强调方法学比较试验(比对试验)是实现准确度溯源和病人标本检验结果可比性的重要途径。国际临床化学与实验医学联盟(IFCC)于2002年曾发表7个系列性文件,针对包括ALT在内的参考测定程序,提出了参考测量系统,并希望所有试剂厂商及实验室向其靠拢,以实现检测方法的一致性[4]。本实验依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-2A文件和IFCC提出的ALT参考方法,以参考方法作为比较方法,Beckman DxC800作为实验方法,对测定结果进行比对和偏倚分析,并判断其临床可接受性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 SHIMADZU UV-2450紫外分光光度计、SHIMADZU-TCC比色杯恒温电子控制装置、恒温水浴箱、SHIMADZU电子天平、pH计、电子温度计、Finnpipette移液器和容量瓶、各种高精密度玻璃器皿;Beckman DxC 800生化分析仪。

1.1.2 试剂 参考方法按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的丙氨酸氨基转移酶参考测量程序配制试剂[5]。还原型-β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐(NADH)、乳酸脱氢酶(LDH)均购自Sigma公司,氯化钠(NaCl)、叠氮钠(NaN3)、氢氧化钠(NaOH)、盐酸(HCl)购自北京化工;三羟甲基氨基甲烷(Tris)、L-丙氨酸、α-酮戊二酸二钠盐、牛血清白蛋白、丙酮酸钠购自上海生工。Beckman DxC 800生化分析仪采用贝克曼库尔特公司配套ALT(无磷酸吡哆醛)诊断试剂、校准品及质量控制品。

1.1.3 标本来源 收集本院患者新鲜血清共40份,编号为1-40,血清ALT浓度按照NCCLS EP9-2A文件[6]中方法比对的实验数据分布建议收集,标本无脂血、溶血、黄疸。

1.2 方法

1.2.1 参考方法的建立 按照IFCC推荐的参考测量程序建立ALT的参考方法[7](为不加磷酸吡哆醛方法)。

1.2.2 方法的选择 以参考方法作为比较方法(X),Beckman DxC 800检测系统作为实验方法(Y)。

1.2.3 方法学比较 每天测定8份新鲜患者血清,随机编号1,2,3,4,5,6,7,8,每份血清分别用比较方法(X)和实验方法(Y)测定,每种方法重复测定2次,第1次测定顺序为1-8,第2次测定顺序为8-1,连续测定5 d,共得到40组数据。

1.3 数据的统计与处理

1.3.2 相关性和回归分析 EP9-2A提出,r>0.975或r2>0.95说明测定范围合适,回归方程的截距和斜率可靠。

1.3.3 偏倚评估和可比性评价 将ALT给定的医学决定水平浓度带入回归方程,计算系统误差(SE)和相对偏差(SE%),SE%≤1/2CLIA’88允许总误差(TEa)属临床可接受水平。

2 结果

2.1 方法内重复值的离群点检验

2.2 方法间离群点检验

2.3 回归分析及r2检查

以X和Y进行相关回归分析,得到回归方程Y=1.005X+0.310 9,r2=0.999 8>0.95,表明X分布范围合适,回归方程的斜率和截距可靠。

图1 ALT双份值均值的散点图Figure 1 Scatter plots of the mean value with double of ALT

2.4 两个系统的偏倚评估和可接受性评价

将不同浓度的医学决定水平(Xc)带入回归方程,计算偏倚和相对偏倚,可见所有浓度的相对偏倚均为临床可接受,结果见表1。

图2 ALT双份值均值的偏倚图Figure 2 Bias plots of the mean value with double of ALT

表1ALT在医学决定水平处(Xc)的可接受性评价

Table1EvaluationofALTacceptabilityatthemedicallydeterminedlevel(Xc)

Xc(U/L)Y估计值(U/L)SE%(%)1/2CLIA’88(%)2020.42.086060.61.08300301.80.68

3 讨论

图1散点图中,在标度上的差别可以用来决定非线性关系,在全部测定范围内,检查比较方法(X)和实验方法(Y)的数据图是否有线性关系,可得测定ALT的结果在两方法间呈良好的直线相关,可以进行下一步检验。图2的偏倚图中,在标度上的差别可以用来决定非线性关系,在全部测定范围内,比较方法的均值和两方法的均值之差分布在X=0中线附近。比较方法(X)的测定范围可以用相关系数r做估计,如果r≥0.975(或r2≥0.95)则可以认为比较方法(X)分布范围合适,以上得到数据r2=0.999 8>0.95,表明比较方法(X)的分布范围合适,回归方程的斜率和截距可靠[8]。ALT在3个医学决定水平Xc处的估计值、允许误差见表1,可以看出估计值在允许范围内均符合要求。本研究采用的允许误差判断标准为1/2CLIA’88,是中国卫生部临床检验中心推荐并使用的标准[9]。由于CLIA’88应用范围比较广泛,是室间质量评价的标准之一,其体现的是可接受方法误差的总误差(随机误差+系 统误差)的最低水平,而且EP9-2A文件提供的方法只是从引入系统误差大小上考虑,并没有将随机误差考虑在内,所以本实验将CLIA’88允许误差的1/2作为方法比对检测系统的结果系统误差的允许限值,以使其结果更有说服力[10]。结论得出,ALT在Beckman DxC 800检测系统的测定结果在比较范围内与参考方法(X)具有可比性。临床可接受性能的评价未超过1/2CLIA’88规定允许误差,说明可比性符合临床要求。在不同的实验室之间,或在同一实验室不同仪器之间所存在的差别,可以通过与参考方法进行方法学比对研究,因为参考方法具有溯源性,这样才能保证检测结果的准确性与可靠性,从而为临床提供可靠的检测结果,满足临床诊断的需要。