闭角型青光眼患者红细胞免疫功能与EPO和ET－1的相关性

张郧芳，郭 蕊，刘永丽，潘桂萍

作者单位:(442000)中国湖北省十堰市太和医院眼科

0 引言

青光眼的临床病理特征主要包括视神经凹陷性萎缩以及视野缺损，引发青光眼视神经病变的危险因素有病理性眼压增高以及眼内微循环失调引起的视乳头血流灌注不足造成的局部缺血［1－3］。闭角型青光眼是青光眼中较为常见的类型之一，主要由于前房角关闭阻止了眼内房水的排出导致［4－5］。早年间有学者提出，闭角型青光眼的急性发作能够引发机体急性应激反应，从而影响机体的免疫功能。随着研究的不断深入，眼科医师发现青光眼的发生发展与细胞免疫密切相关，且进一步研究发现青光眼患者红细胞免疫功能明显低于眼部健康人群。对红细胞功能的研究发现，红细胞除了可粘附并识别抗原，还能够向淋巴细胞递呈抗原，以促进T细胞的依赖性反应增强。故而对红细胞免疫功能进行研究可能有利于提高青光眼的治疗效果并改善预后。促红细胞生成素(EPO)是一种糖蛋白，主要分泌于肾脏，可通过对骨髓红细胞系统产生作用进而对红细胞的产生与成熟起到促进作用［6］。近年来，研究人员提出，内皮素－1(ET－1)也与眼部生理调节密切相关，其通过调节眼血管张力影响眼压及眼血流量，还能够调控视网膜内皮细胞及其周边细胞的增殖以及视觉传递等生理过程［7］。本研究以闭角型青光眼患者为研究对象，旨在探讨红细胞免疫功能与EPO、ET－1浓度之间的相关性。

表1 两组受试者血流变指标比较

表1 两组受试者血流变指标比较

注:对照组:眼部正常者;病例组:闭角型青光眼患者。

组别 例数 全血粘度(mPa·s)低切 高切 全血浆粘度(mPa·s) 纤维蛋白原(g/L) 红细胞压积(L/L)对照组 30 12.84±2.10 5.18±1.08 1.43±0.28 3.15±0.58 0.37±0.06病例组 30 14.49±2.23 6.04±1.15 1.74±0.31 4.05±0.64 0.44±0.08 t 2.950 2.986 4.065 5.707 3.834 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

1 对象和方法

1.1 对象 选取2017－06/10期间我院收治的闭角型青光眼患者30例30眼为作为病例组，其中男17例，女13例，年龄42～68(平均53.5±4.7)岁。纳入标准:(1)具有青光眼视乳头改变者;(2)房角狭窄至关闭，或者在高眼压状态下关闭者;(3)影响血流及血管的药物停用超过2wk者;(4)具有典型的中、晚期青光眼性视野缺损者;(5)临床资料完整者。排除标准:(1)患有其它眼部疾病者;(2)心血管、肝、肾功能严重受损者;(3)绝对期青光眼患者;(4)合并恶性肿瘤者;(5)哺乳期、妊娠期女性患者;(6)临床资料不全者。选取同期入院进行体检的眼部正常者30例30眼作为对照组，其中男19例，女11例，年龄41～69(平均53.6±4.5)岁。两组研究对象性别构成比、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。本研究经我院伦理委员会批准同意，告知研究对象本研究的意义及主要方法，征得同意。

1.2 方法

1.2.1 红细胞免疫功能测定 通过测定两组受试者红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率评估其红细胞免疫功能。采集受试者静脉血2mL(病例组受试者于给药前采集)，经肝素抗凝加入等体积的生理盐水，以Ficocl为分离液进行水平离心，使红细胞沉淀稀释成红细胞密度为1.25×107/mL的红细胞悬液，保存待测。采用郭氏法进行红细胞C3b受体花环试验和红细胞免复合物花环试验，操作步骤:将红细胞悬液以生理盐水洗涤3次，C3b受体花环试验和红细胞免复合物花环试验分别加入5滴致敏酵母液、5滴非致敏酵母液，在试管中混匀，37℃条件下水浴30min，采用0.25%戊二醛固定，涂片，行瑞氏染色;于高倍镜下计数200个红细胞内2个以上酵母菌的红细胞花环数，计算百分率。

1.2.2 血清EPO和血浆ET－1浓度测定 于清晨静息状态下，采集受试者静脉血2mL，置入含抑肽酶的试管中，充分混合;4℃、3000r/min离心10min，取血浆保存于－70℃冰箱中待测。将血浆样本置于常温条件下复融，4℃、3000r/min离心5min，取上清液，采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定血清EPO浓度，采用GC－1200γ放射免疫计数仪测定血浆ET－1浓度。

1.2.3 眼动脉血流指标测定 采用彩色多普勒超声仪(GE－LOGIQ9，美国)测定受试者眼动脉血流指标，高频探头10MHz、取样容积2mm。测定当日确保受试者眼压不超过3.25kPa(24mmHg)，测定前休息15～30min，当心脏功能处于较大限度稳定条件下开始测量。受检者取仰卧位，轻轻闭目，将少许藕合剂涂抹于眼睑表面，眼睑上纺织探头，确保其不对眼球产生加压，对声束及眼动脉进行调整，确保睫状后短动脉与视网膜中央动脉血流方向保持一致。测定收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)，并计算阻力指数(RI)，RI=(PSV－EDV)/PSV。

1.2.4 血流变指标测定 取晨间血2mL，放置试管中混匀离心，取血浆，采用全自动血液流变仪(ZL9000PLUS型)测定全血粘度、全血浆粘度、血浆纤维蛋白原、红细胞压积等指标。

统计学分析:本研究数据采用SPSS 20.0统计分析软件进行处理。计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验。计数资料采用百分率(%)表示，组间比较采用卡方检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受试者红细胞免疫功能比较 病例组受试者红细胞C3b受体花环率明显低于对照组(10.81%±2.01%vs 18.06%±3.44%)，红细胞免疫复合物花环率明显高于对照组(17.21±3.49%vs 11.74±2.14%)，差异具有统计学意义(t=9.967、7.318，均 P＜0.05)。

2.2 两组受试者血清EPO和血浆ET－1浓度比较 病例组受试者血清EPO浓度明显高于对照组(26.10±5.22 mU/mL vs 22.68±4.06mU/mL)，血浆 ET－1浓度明显高于对照组(70.85±7.16ng/L vs 58.43±5.09ng/L)，差异具有统计学意义(t=2.833、7.744，均 P＜0.05)。

2.3 两组受试者眼动脉血流指标比较 病例组受试者EDV明显低于对照组(8.66±1.59cm/s vs 10.68±2.12cm/s)，RI明显高于对照组(0.73±0.04 vs 0.64±0.05)，差异具有统计学意义(t=4.175、7.699，均 P＜0.05);两组受试者 PSV(31.65±1.38cm/s vs 31.02±1.20cm/s)差异无统计学意义(t=1.887，P＞0.05)。

2.4 两组受试者血流变指标比较 病例组受试者低切和高切全血粘度、全血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积均明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.5 红细胞C3b受体表达与血清EPO和血浆ET－1浓度的相关性 闭角型青光眼患者红细胞C3b受体花环率与血清EPO浓度呈显著正相关(r=0.271，P＜0.05)，而与血浆 ET－1浓度无相关性(r=0.508，P＞0.05)。

3 讨论

青光眼是由于眼内压力升高而出现的不可逆性眼部疾病，眼压升高后视神经、视网膜无法承受高压的压迫从而导致视功能损害［7］。青光眼对于视神经功能危害性极大，一般分为先天性、原发性和继发性三种青光眼类型，其中原发性青光眼根据房角形态不同又分为闭角型和开角型。原发性闭角型青光眼是指由于前房角被周边虹膜组织机械性阻塞导致房水流出受阻，造成眼压升高、视神经损害的一类青光眼。青光眼是我国主要的致盲原因之一，而且青光眼引起的视功能损伤是不可逆的，后果极为严重。理论上来讲青光眼是不能预防的，但早期发现、合理治疗，绝大多数患者可终生保持一定的视功能。因此，青光眼的防治必须强调早期发现、早期诊断和早期治疗。

红细胞能够对有害的免疫复合物起到转运功能，可通过红细胞膜上的C3b受体对抗原－抗体－补体复合物进行识别，从而发挥保护性的免疫缓冲功能，此功能在加快清除有害免疫复合物的同时，还有效降低了免疫复合物在组织内滞积所造成的免疫病理损伤。通过对慢性肾功能衰竭患者红细胞免疫功能的研究发现，慢性肾功能衰竭患者C3b受体花环试验阳性率明显低于正常人，红细胞免疫复合物花环率明显高于正常人。本研究中，闭角型青光眼患者眼动脉血流指标(EDV、RI)及血流变指标异常，红细胞C3b受体花环率降低，红细胞免疫复合物花环率升高，且与眼部正常者之间差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明闭角型青光眼患者红细胞免疫功能显著下降，分析原因可能是由于闭角型青光眼患者眼血管血流动力学指标发生变化，导致视神经发生了严重的缺血缺氧损伤，从而对红细胞代谢产生影响，降低了红细胞C3b受体的粘附功能，无法对有害免疫复合物进行及时、有效地清除，使得有害免疫复合物沉积量增加，进一步造成视神经局部的病理性损伤。

EPO是一种十分重要的神经营养因子，在中枢神经系统缺氧/缺血性脑损伤以及培养的神经元中具有抗自由基、抗细胞凋亡及抗氧化等作用［8－10］。目前临床中已采用EPO对慢性肾功能衰竭进行治疗，以提高患者血红蛋白含量，改善其贫血状况［11］。Aktas 等［12］学者研究发现，慢性肾功能衰竭患者EPO治疗8wk后，其红细胞C3b受体花环率明显提升，且提升效果随着治疗时间的延长而增加，而红细胞免疫复合物花环率明显降低，推测EPO可能通过降低氧自由基含量、对红细胞膜起到稳定作用以增加红细胞寿命，避免其它因子损伤C3b受体，增强红细胞免疫功能［13－14］。目前关于EPO的研究主要针对慢性肾功能衰竭患者，在青光眼患者中较为少见。本研究中，病例组受试者血清中EPO浓度明显高于对照组(P＜0.05)，且进一步研究发现，闭角型青光眼患者红细胞C3b受体花环率与血清EPO浓度呈显著正相关(r=0.271，P＜0.05)。

近年研究指出，内皮素在眼部生理病理调节过程中扮演重要角色，与部分眼部疾病的发生发展具有一定的关联性［15－17］。本研究中，闭角型青光眼患者的血浆 ET－1水平明显高于眼部健康人群(P＜0.05)，与其它同类型研究结论相一致，提示血浆ET－1可能参与闭角型青光眼造成的视神经损害，具体机制包括以下几个方面［18－20］:(1)血浆ET－1可通过收缩微血管引发局部组织缺血、缺氧，上调天冬氨酸与谷氨酸等兴奋性氨基酸含量，产生视网膜神经节细胞毒性，最终对视网膜神经节细胞凋亡起到促进作用;(2)血浆ET－1可通过对视神经的逆向轴浆运输过程产生抑制，影响脑源性神经营养因子从脑部向视网膜的运输，最终引起视网膜神经节细胞凋亡;(3)血浆ET－1浓度过高可能通过活化星形胶质细胞参与青光眼视神经的病理损伤。

综上所述，闭角型青光眼患者红细胞免疫功能下降，血清EPO和血浆ET－1浓度升高，且闭角型青光眼患者红细胞免疫功能与EPO浓度呈正相关，与血浆ET－1浓度无相关性。