表面活性剂SDS协同提取槐米总黄酮的实验研究

冀德富，郭茹茹，薛文娟，徐 静

（山西中医药大学，山西晋中030619）

中药槐米是豆科植物槐Sophora japonicaL.的花蕾，夏季形成时采收，在《神农本草经》中被列为上品，其味苦，性微寒，归肝、大肠经，具凉血止血、清肝泻火之功效［1］。槐米的应用非常广泛，目前已应用于医药、食品、化妆品等领域［2-5］。槐米富含黄酮类成分如芦丁、槲皮素等，尚含有皂苷、多糖和黏液质等［6］。表面活性剂分子可增加大分子有机物质的溶解渗出能力［7］，目前已被初步应用于天然产物的提取中，但利用表面活性剂的增溶作用协同提取槐米总黄酮尚未见报道。本实验通过比较表面活性剂十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）协同超声和协同回流提取以及单纯超声、回流等多种方法提取槐米总黄酮的得率，以期选择合理可行的提取方法，为后续实验研究提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器设备

UV-6100S型紫外可见分光光度计，上海元析仪器有限公司；SB-5200DTDN型超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；恒温水浴锅、电热套等。

1.2 实验材料

槐米，河北亚宝药业有限公司出品，经我校药用植物学科平莉莉老师鉴定为正品；芦丁对照品（批号：20160920，纯度：＞98%），成都曼思特生物科技公司；十二烷基硫酸钠，乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等化学试剂均为分析纯（天津北辰方正试剂厂），实验用水为蒸馏水。

2 实验方法与结果

2.1 提取方法

2.1.1 超声水提取法 精密称取槐米药材粗粉2 g，2份，分别置于锥形瓶中，记为样品1、2。1号中加入0.1 g的 SDS，2号中不加。分别加入蒸馏水30 mL（料液比 1∶15），置于超声仪（150 W，30 ℃）超声提取30 min，抽滤，滤液加水定容于100 mL容量瓶中，得到样品液1、2。

2.1.2 沸水浸泡+超声水提取法 精密称取槐米药材粗粉2 g，2份，分别置于锥形瓶中，记为样品3、4。3 号中加入 0.1 g的 SDS，4 号中不加。分别加入沸水30 mL，浸泡20 min，置于超声仪超声提取30 min，抽滤，滤液加水定容于100 mL容量瓶中，得到样品液3、4。

2.1.3 超声醇提取法 精密称取槐米药材粗粉2 g，2份，分别置于锥形瓶中，记为样品5、6。5号中加入0.1 g的SDS，6号中不加。分别加入60%乙醇30 mL，置于超声仪超声提取30 min，抽滤，滤液加60%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到样品液 5、6。

2.1.4 回流水提取法 精密称取槐米药材粗粉2 g，2份，分别置于圆底烧瓶中，记为样品7、8。7号中加入0.1 g的SDS，8号中不加。分别加入沸水30 mL，电热套回流提取30 min，抽滤，滤液加水定容于100 mL容量瓶中，得到样品液7、8。

2.1.5 回流醇提取法 精密称取槐米药材粗粉2 g，2份，分别置于圆底烧瓶中，记为样品9、10。9号中加入0.1 g的SDS，10号中不加。分别加入60%乙醇30 mL，水浴回流提取30 min，抽滤，滤液加60%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到样品液9、10。

2.2 总黄酮含量测定

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取对照品芦丁12.16 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液。（每1 mL中含芦丁 0.243 2 mg）。

2.2.2 供试品溶液的配制 从样品液1～10中精密移取1～3 mL于25 mL容量瓶中，用提取溶剂定容至刻度，即得。

2.2.3 测定波长的确定 精密移取对照品溶液2.5 mL，置 25ml容量瓶中，参考 2015 年版《中国药典》中槐米总黄酮的测定方法［1］，用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠体系进行显色，即：加蒸馏水至6.0 mL，再加5%NaNO2溶液1 mL（混匀，放置6 min），然后加10%Al（NO3）3溶液1 mL（混匀，放置6 min），最后加NaOH试液10 mL，补加蒸馏水至刻度后摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，在300～800 nm波长范围内扫描，结果如图1所示，芦丁对照品的最大吸收波长为513 nm。

精密量取10号供试品溶液1 mL，同法显色和扫描，结果如图2所示，其最大吸收波长亦为513 nm。

图1 对照品显色扫描图

图2 供试品显色扫描图

2.2.4 标准曲线的制备 精密移取对照品溶液2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL、4.0 mL、6.0 mL，分别置于25 mL容量瓶中，按2.2.3项下方法显色，以不含芦丁对照品的相应试剂为空白，在513 nm处测定吸光度A，以A对质量浓度C（mg/mL）进行线性回归，得到方程为A=0.013 5C-0.049 3，相关系数r=0.999 0。结果芦丁线性质量浓度范围在19.46 μg/mL～58.37 μg/mL。

2.2.5 精密度实验 精密移取2 mL对照品溶液，6 份，置 25 mL 容量瓶中，按 2.2.3 项下方法显色测定吸光度，结果分别为 0.289，0.291，0.286，0.287，0.293，0.291，RSD为 0.92%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性实验 精密移取10号供试品溶液2 mL，置 25 mL 容量瓶中，按 2.2.3 项下方法显色后分别于 0、30 min、60 min、90 min、120 min、180 min测定吸光度，结果为 0.645、0.642、0.638、0.631、0.629、0.625，RSD为 1.24%，表明显色液在 3 h 内稳定。

2.2.7 重复性实验 精密称取槐米药材粗粉2 g，6份，按2.1项下样品10的方法进行提取，制备6份供试品溶液，按2.2.3项下方法显色后测其吸光度，计算总黄酮的提取率，结果为 18.15%、17.78%、18.32%、17.90%、18.01%、18.17%，平均提取率为18.06%，RSD为 1.09%，表明该法重复性良好。

2.2.8 加样回收率实验 精密称取槐米药材粗粉1 g，6份，按2.1项下样品10的方法进行提取，制备6份供试品溶液，精密移取各供试品溶液2 mL，加入一定量的对照品，置于50 mL的容量瓶中，加60%乙醇至刻度，从中精密移取1 mL，按2.2.3项下方法显色，测定吸光度，计算加样回收率和RSD值。结果如表1显示，加样回收率在93.89%～104.57%，平均加样回收率为 98.26%，RSD为3.66%，因此，该方法的准确度良好。

表1 加样回收率试验

2.2.9 样品测定 从1～10的供试品溶液中精密移取 1 mL，按 2.2.3项下方法显色，测定吸光度，计算槐米中总黄酮的提取率。结果见表2。

表2 不同方法提取实验结果

由表2可知，提取溶剂为水时，无论是超声提取还是回流提取，SDS的加入，槐米总黄酮的提取率是增加的，SDS起到了增溶提取的作用。如果在超声水提取时，槐米粗粉用沸水浸泡后再超声提取，其总黄酮提取率有所提高，原因是沸水浸泡使得槐米药材中的酶失活，同时部分黄酮成分被浸提出来，故沸水浸泡有助于超声提取槐米总黄酮。提取溶剂为60%乙醇时，表面活性剂SDS的加入，其增溶效果不明显，特别是回流提取时，与不加SDS的单纯回流提取相比较，槐米总黄酮提取率几乎一样。因此，可以推断出，SDS的增溶作用与溶剂有关。

比较上述各提取方法，60%乙醇回流提取槐米总黄酮，其提取率最高，表面活性剂SDS的加入对其无影响，因此实际生产中，提取槐米总黄酮如果选择一定浓度的乙醇作溶剂，无须加入表面活性剂；如果提取溶剂用水，可以加入适量的表面活性剂以促进提取。

3 讨 论

表面活性剂应用甚广，在中药材提取方面亦有不少应用研究报道。因黄酮类化合物通常会与糖结合成苷类，相对分子量较大，表面活性剂的亲水亲油即双亲结构可以显著降低固液界面张力，对大分子化合物有较好的增溶效果，同时表面活性剂还可以显著提高水溶性较差的黄酮苷元在水液中的溶解度，故表面活性剂对黄酮类成分的提取有很好的协同作用，能够显著提高总黄酮的提取率［8］。但影响表面活性剂增溶作用的因素很多，如温度、无机盐、聚合物等［9］。本实验研究显示，提取溶剂是影响表面活性剂SDS增溶效果的因素之一，以表面活性剂的水溶液为提取溶剂，增溶效果明显，在中药有效成分提取中有一定的应用价值。