硝克柳胺对慢性肾功能不全大鼠血清TGF-β1、CTGF表达及生存时间的影响

席云 朱冬林 董杰明 徐长志

(1中山大学附属第三医院岭南医院，广东 广州 510530；2中山大学附属第三医院)

慢性肾功能不全(CRF)又称慢性肾衰竭，是指由多种原因造成慢性进行性肾实质损害，致使肾脏明显萎缩，不能维持其基本功能，临床出现以代谢产物潴留，水、电解质、酸碱平衡失调，全身各系统受累为主要表现的临床综合征〔1〕。CRF发病率逐年增加，预后较差，严重危害患者生命〔2，3〕。因此,积极寻找有效的药物来延缓CRF的进展尤为重要。本实验研究硝克柳胺对CRF大鼠血清转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)表达及生存时间的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物 雄性SD大鼠，体重(220±20)g，SPF级，购自华北理工大学动物实验室。

1.1.2药品与试剂 硝克柳胺(中国医学科学院药物合成室提供，纯度99.7%)； 腺嘌呤(上海源聚生物科技有限公司提供，纯度>99%)；TGF-β1试剂盒(武汉默沙克生物科技有限公司)；CTGF试剂盒(上海纪宁实业有限公司)；尿素氮(BUN)试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)；血肌酐(Scr)试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)。

1.1.3仪器 BIOBASE-EL10A全自动酶标仪(山东博科生物产业有限公司)；TG16B台式高速离心机(上海赫田科学仪器有限公司)；大鼠用灌胃管〔东西仪(北京)科技有限公司〕；注射器等。

1.2分组及给药 40只大鼠随机分为4组：正常组、建模组〔4〕、低剂量硝克柳胺组(L组)、高剂量硝克柳胺组(H组)，每组10只。建模组、H组、L组给予腺嘌呤〔150 mg/(kg·d)〕灌胃12 w建立CRF模型；正常组给予同等剂量蒸馏水。L组大鼠给予硝克柳胺5 mg/(kg·d)，H组大鼠给予硝克柳胺10 mg/(kg·d)，均腹腔注射给药。

1.3检测指标 抽取各组大鼠治疗1、3、5 w后静脉血，离心，取血浆冷藏；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清TGF-β1、BUN、Scr、CTGF含量，操作步骤严格按照试剂盒说明执行；观察并记录各组小鼠的生存时间，计算给药组大鼠生命延长率，生命延长率=(给药组生存天数-对照组生存天数)/对照组生存天数。

1.4统计学方法 采用SPSS19.0软件进行方差检验、LSD-t、配对t检验、生存分析。

2 结 果

2.1各组TGF-β1、CTGF、BUN、Scr表达水平比较 正常组各时间点TGF-β1、CTGF、BUN、Scr含量差异无统计学意义(均P>0.05)；建模组、L组、H组不同时间点TGF-β1、CTGF、BUN、Scr含量均显著高于正常组(均P<0.05)；L组、H组TGF-β1、CTGF、BUN、Scr含量均显著低于建模组(均P<0.05)；H组不同时间点TGF-β1、CTGF、BUN、Scr含量均显著低于L组(均P<0.05)。见表1、2、3、4。

表1 各组不同时间TGF-β1水平比较

与正常组比较：1)P<0.05；与建模组比较：2)P<0.05；与L组比较：3)P<0.05，下表同

表2 各组不同时间点CTGF水平比较

表3 各组不同时间点BUN水平比较

表4 各组不同时间点Scr水平比较

2.2各组生存时间比较 正常组大鼠全部存活。建模组最早出现死亡个体，且最早全部死亡，生存时间(41.40±6.39)d。L组生存时间(67.00±11.38)d，与建模组比较生命延长率为61.84%。H组生存时间(95.50±13.86)d，与建模组比较生命延长率130.68%。L组及H组生存时间显著长于建模组，且L组显著低于H组(均P<0.05)。

3 讨 论

硝克柳胺是一种香豆素酰胺类小分子的新结构化合物，相关研究表明其具有明确CRF治疗作用且毒性低、活性较高〔5〕。动物实验表明，硝克柳胺可明显降低CRF大鼠BUN、Scr、血管紧张素Ⅱ、TGF-β1水平和尿蛋白水平，增加Scr清除率，其作用机制可能与抑制TGF-β1合成及受体结合有关〔6〕。

TGF-β1对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用，可以①抑制免疫活性细胞增殖；②对细胞表型进行调节；③抑制淋巴细胞分化；④抑制细胞因子产生；⑤促进成纤维细胞、成骨细胞和雪旺细胞生长〔7〕。研究证实，TGF-β1与肾脏疾病进展密切相关。当肾小球或肾小管出现损伤后，炎性细胞侵入肾脏，导致TGF-β1水平升高，近而促进肌纤维细胞增殖和细胞外基质(EMC)积聚〔8〕。CTGF具有明显的丝裂原性和趋化性，能诱导成纤维细胞增殖和分泌ECM。CTGF作为TGF-β1的直接下游效应介质，可被TGF-β1调控CTGF启动子内TGF-β1反应元件和Smad结合元件诱导CTGF的产生〔9〕。在多种纤维化疾病中，CTGF与TGF-β1的水平同步升高。BUN是血浆中除蛋白质以外的一种含氮化合物，主要通过肾小球滤过作用排出体外。在肾功能不全失代偿时，BUN将升高。所以临床将其作为判断肾小球滤过功能的指标。在肾功能损害早期，Scr、BUN均可在正常范围内，但当肾小球滤过率下降到正常的50%以下时，两者的浓度会迅速升高〔10〕。

本实验在构建慢性肾功能不全大鼠模型后，未对4组大鼠肾损伤程度进行分组；同时，也由于实验设计原因，未能解剖小鼠肾脏研究硝克柳胺对CRF大鼠的治愈效果，但本实验通过观察大鼠血清CRF的相关因子水平及大鼠生存时间，也在一定程度上弥补了本实验设计的缺陷。综上所述，硝克柳胺可有效降低CRF大鼠血清TGF-β1、CTGF、BUN、Scr表达水平，延长其生存时间。