布拉酵母菌对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子-α表达的影响

颜玉 任秀英 鲍秀琦 姜威 罗兰 郑强 王雪 薛勇

(佳木斯大学附属第一医院消化一科，黑龙江 佳木斯 154002)

溃疡性结肠炎(UC)是一种常累及直肠和结肠的慢性炎性疾病。研究显示其发病与宿主遗传易感性与免疫应答及肠黏膜免疫识别失调关系密切〔1〕，肿瘤坏死因子(TNF)-α是炎症性肠病发病过程中关系最为密切的促炎性因子之一，动态监测TNF-α的水平变化对UC的临床诊断、分期、疾病活动情况及严重程度有重要临床意义。核因子(NF)-κB在细胞因子的释放与转录的过程中起重要调控作用。本研究观察布拉酵母菌(亿活)治疗UC的效果。

1 材料与方法

1.1主要试剂和仪器 亿活(布拉酵母菌散，法国百科达制药厂)，美沙拉秦(莎尔福，Losan Pharma GmbH，德国)，兔抗鼠NF-κB(艾博抗贸易有限公司)，TNF-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)，免疫组化试剂盒(齐一生物科技有限公司)。Leica RM2265半薄全自动轮转式切片机，SAF-680T酶标仪(上海巴玖实业有限公司)，XSP-22CE显微镜(上海比目仪器有限公司)。

1.2实验动物及分组 选用清洁级健康6～8周龄Wistar大鼠30只，雌雄各半，体质量(250±50)g，由佳木斯大学实验动物中心提供，饲养条件均适宜，常规适应性饲养1 w后按照随机分组原则分为5组：对照组、模型组、莎尔福组、亿活组、联合治疗组，每组各6只。

1.3UC大鼠动物模型及治疗组模型制备 30只大鼠禁食24 h，无水乙醚麻醉。①对照组：大鼠2 ml生理盐水灌肠。②模型组：大鼠称重，仰卧位以2.4%水合氯醛1.2～1.4 ml/100 g腹腔注射，麻醉后，用石蜡油润滑经肛门轻缓插入输液管至距肛门8 cm处，100 mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)加入相同体积50%乙醇注入大鼠结肠内，随后注入0.5 ml空气，处理后的大鼠头向下45°倾斜放置1 min，稍后保持平躺自然清醒，按此方法每7 d重复灌肠造模，持续至第8周〔2〕。③莎尔福组：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌肠2 d后，用莎尔福溶液2.5 ml 0.5 g/(kg·d)灌胃1次。④亿活组：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌肠2 d后，用亿活溶液2.5 ml 0.1 g/(kg·d)灌胃1次。⑤联合治疗组：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌肠2 d后，用莎尔福溶液2.5 ml 5 g/(kg·d)和亿活溶液2.5 ml 0.1 g/(kg·d)灌胃1次。各组大鼠经相应处理7 d后禁食不禁水24 h，麻醉取全血分离血清后处死大鼠剖开腹腔，分离结肠组织，生理盐水反复轻柔冲洗干净，肉眼观察，选择结肠病变最严重部位结肠组织，置于甲醛溶液中固定后常规石蜡包埋并切片待检。

1.4ELISA检测 按照ELISA试剂盒方法检测NF-κB及TNF-α水平。

1.5统计学方法 采用SPSS22.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组大鼠一般状况比较 对照组：大鼠活动自如，毛发光泽，反应机敏，未见便血，食欲可，体重稍有增加；模型组：大鼠精神萎靡、懒动，毛发无光泽，进食差，消瘦，腹泻、溏便、脓血便；莎尔福组：大鼠状况逐渐好转，溏便、脓血便稍有缓解，进食量渐增，体重稍有恢复；亿活组：大鼠状况好转，溏便、脓血便明显减轻，进食量逐渐增加，体重恢复；联合治疗组：大鼠活动、毛发、饮食、溏便、脓血便明显改善，体重稍有增加。

2.2各组NF-κB与TNF-α水平变化比较 与对照组比较，模型组、莎尔福组、亿活组NF-κB及TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)；与模型组比较，莎尔福组、亿活组、联合治疗组NF-κB及TNF-α水平显著降低(均P<0.05)。莎尔福组及亿活组NF-κB、TNF-α水平均显著高于联合治疗组(均P<0.05)。见表1。

表1 各组NF-κB及TNF-α水平变化比较

与对照组比较：1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05；与联合治疗组比较：3)P<0.05

3 讨 论

NF-κB在细胞因子的释放与转录过程中起重要调控作用，NF-κB处于炎症调节的中枢，活化的NF-κB导致细胞因子表达增加从而引起肠道炎症反应，致使结肠黏膜损伤。NF-κB通过调控环氧合酶(COX)-2表达介导炎症反应〔3〕。TNF-α具有直接杀伤或抑制肿瘤细胞的作用，TNF-α主要通过促进释放血小板活化因子生成氧自由基和白三烯，促进分泌蛋白酶与刺激前列腺素E2的释放及诱导一氧化氮合成，上调T淋巴细胞与嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞数目引起肠黏膜损伤〔4〕。

本研究表明NF-κB在UC的发病中起重要作用，能够引起肠道炎症，NF-κB能够调节各种炎症因子与细胞因子及趋化因子转录因子的水平，NF-κB水平升高导致细胞因子表达增加从而引起肠道炎症反应导致肠黏膜损伤；TNF-α水平升高，促进氧自由基和白三烯的生成，进一步加重了肠黏膜损伤，导致黏膜充血，水肿及糜烂。

菌群紊乱引起肠道固有免疫异常激活可致UC，肠道黏膜完整性的破坏及细菌屏障功能紊乱在UC患者中表现尤为明显。有研究学者提出用益生菌及其产物来治疗UC取得了一定的临床治疗效果〔5〕。更有学者提出粪菌移植治疗炎症性肠病〔6〕。

本研究结果证实亿活和莎尔福对UC治疗均有效，两药联合治疗效果较单药治疗效果更优。综合分析亿活对UC的治疗作用机制可能有以下几种：① 抑制病原微生物生长，提高定植抗力，致病菌定植遭阻止。②通过布拉菌分泌的蛋白酶可水解由梭状芽孢杆菌产生的毒素，促进修复损伤上皮，上皮紧密连接增强，肠黏膜屏障稳定，细菌移位阻止。③调节抗炎与促炎因子平衡，促进肠道恢复免疫功能。