高温环境下枯草芽孢杆菌对AA鸡生长性能、免疫器官发育及免疫功能的影响

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(广东海洋大学 农学院，广东 湛江 524088)

当前畜牧养殖向机械化、规模化发展，“全进全出”逐渐成为养殖行业的生产模式，虽然有利于畜禽的集中管理，但环境应激容易引起畜禽抵抗力下降，导致发病率增高。由于禽病治疗多用抗生素[1]，造成了细菌的耐药性增加、畜禽产品抗生素的残留等负面影响，进而制约了畜禽养殖业的健康安全发展，因此，抗生素替代品的开发和高效利用十分必要。

微生态制剂是由有益微生物或微生物的代谢产物加工而成。一些芽孢杆菌类微生物具有优良的耐高温性能，同时无毒副作用，能够调节动物肠道微生态平衡，促进动物生长发育。研究表明，适宜剂量的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)有利于动物生长发育、增强机体免疫功能，同时可激活体内多种酶，抑制菌群繁殖，从而达到改善肠道内环境的作用，但枯草芽孢杆菌添加剂量不同、应用环境条件不同等因素的差异也会造成改善效果的不同[2-4]。为此，在前期研究的基础上，探讨不同添加剂量的枯草芽孢杆菌对高温环境下1～42日龄爱拔益加(AA)鸡的生长发育、免疫器官发育和免疫功能的影响，为枯草芽孢杆菌在肉鸡养殖中的合理应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 供试菌剂

枯草芽孢杆菌制剂购于广东雅琪生物科技有限公司(活菌总含量≥2×1010cfu/g)。

1.2 试验设计及日粮组成

本试验采用单因子随机分组试验，选用1日龄健康、体质量邻近且同批孵化的AA鸡300只，随机分为5组，每组5个重复，每个重复12只鸡。饲养地点为广东湛江，饲养期为6—7月，环境温度为26～34 ℃。对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂分别添加了0.010%、0.015%、0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌制剂的基础饲粮。基础饲粮为玉米-豆粕型，根据AA鸡饲养标准进行配制，其组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮的组成及营养水平Tab.1 Composition and nutrient levels of the basal diet

续表1 基础饲粮的组成及营养水平Tab.1(Continued) Composition and nutrient levels of the basal diet

注：每千克饲粮中预混料含维生素A 9 600.00 IU，维生素D33 600.00 IU，维生素E 15.00 IU，维生素K 0.40 mg，维生素B13.50 mg，维生素B29.00 mg，维生素B65.00 mg，维生素B120.03 mg，烟酸40.00 mg，D-泛酸8.00 mg，叶酸0.50 mg，生物素0.20 mg，铁85.00 mg，铜10.00 mg，锌105.00 mg，锰115.00 mg，碘0.50 mg，硒0.25 mg。

Note：1 kg of premix contained VA 9 600.00 IU,VD33 600.00 IU,VE 15.00 IU,VK 0.40 mg,VB13.50 mg,VB29.00 mg,VB65.00 mg,VB120.03 mg,niacin 40.00 mg,D-pantothenic acid 8.00 mg,folic acid 0.50 mg,biotin 0.20 mg,Fe 85.00 mg,Cu 10.00 mg,Zn 105.00 mg,Mn 115.00 mg,I 0.50 mg,Se 0.25 mg.

1.3 饲养管理

饲养期间控制好温度和湿度，雏鸡阶段进行24 h光照。脱温后AA鸡在自然环境状态下养殖，环境温度为26～34 ℃。保证鸡只自由采食、饮水，鸡粪每天清理1次，每天换水并保持鸡只饮水清洁，注意观察鸡群精神情况和采食状况，如有死亡鸡只，随时记录。此外，按照AA鸡常规免疫程序进行免疫。

1.4 测定项目及方法

1.4.1 AA鸡生长性能测定 以每个重复为单位记录AA鸡初始体质量，在AA鸡21日龄和42日龄时分别于8:00对空腹鸡只进行体质量测量，在整个试验过程中详细记录各阶段耗料量，计算AA鸡各生长阶段的平均日增体质量(Average daily gain,ADG)、平均日采食量(Average daily feed intake,ADFI)和料重比(Feed weight ratio,F/G)。计算公式分别为ADG=(末体质量-初体质量)/(天数×鸡只数)；ADFI=耗料量/(天数×鸡只数)；F/G=平均日采食量/平均日增体质量。

1.4.2 AA鸡免疫器官指数测定 分别在AA鸡21日龄和42日龄时进行屠宰试验，采用颈静脉处死法，剥离AA鸡的胸腺、脾脏和法氏囊，称质量计算器官指数。计算公式分别为胸腺指数=胸腺质量/体质量；脾脏指数=脾脏质量/体质量；法氏囊指数=法氏囊质量/体质量。

1.4.3 AA鸡免疫指标测定 分别在AA鸡21日龄和42日龄时进行翅下采血，将采集血液放入采血管中3 000 r/min离心10 min，取1.5 mL血清于离心管中冷冻保存，以备进行新城疫抗体效价(NDV-Ab)、溶菌酶活性(Lysozyme activity，LZM)、免疫球蛋白(IgG)含量检测。其中NDV-Ab采用血球凝聚法测定，LZM采用比浊法测定，IgG采用ELASA试剂盒测定。试验所用试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.5 数据处理

试验数据采用Excel 2010处理，用SPSS 22.0中ANOVA进行分析，Duncan’s法进行多重比较，结果以“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 枯草芽孢杆菌对AA鸡生长性能的影响

由表2可以看出，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以一定程度上提高AA鸡生长各阶段以及全期ADG。AA鸡生长各阶段及全期ADG随着枯草芽孢杆菌添加剂量的增加而增加，以0.020%枯草芽孢杆菌添加组ADG最高，两者显著高于对照组，但各添加组之间ADG差异不显著。1—42日龄添加枯草芽孢杆菌制剂的试验组AA鸡的ADG分别较对照组提高1.92%(P>0.05)、7.95%(P>0.05)、9.67%(P<0.05)、8.49%(P>0.05)。F/G在AA鸡不同生长阶段及全期都有一定程度降低，1—42日龄AA鸡各试验组F/G分别降低2.63%(P>0.05)、5.26%(P>0.05)、5.79%(P<0.05)和4.74%(P>0.05)。

表2 枯草芽孢杆菌对AA鸡生长性能的影响

注：表中同行数据肩上标注的不同字母表示差异性显著(P<0.05)，下同。

Note：Different letters marked on the shoulder of data in the same peer in the table indicate significant difference(P<0.05),the same below.

2.2 枯草芽孢杆菌对AA鸡免疫器官指数的影响

由表3可以看出，0.020%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的胸腺指数、脾脏指数分别比对照组高61.25%(P<0.05)、59.26%(P<0.05)，0.025%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的胸腺指数分别比对照组和0.010%枯草芽孢杆菌添加组高52.50%(P<0.05)和36.31%(P<0.05)。与对照组相比，各试验组42日龄AA鸡的胸腺指数比对照组分别增加17.53%(P>0.05)、13.96%(P>0.05)、19.81%(P>0.05)、22.73%(P<0.05)，各试验组之间差异不显著；0.025%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的脾脏指数分别高于对照组和其他试验组43.43%(P<0.05)、39.21%(P>0.05)、36.54%(P>0.05)、23.48(P>0.05)。整个试验期间AA鸡的法氏囊指数有增加的趋势，但变化不显著。

表3 枯草芽孢杆菌对AA鸡免疫器官指数的影响Tab.3 Effect of Bacillus subtilis on immune organ index of AA chickens

2.3 枯草芽孢杆菌对AA鸡免疫功能的影响

由表4可以看出，各试验组无论是21日龄还是42日龄AA鸡的NDV-Ab、IgG含量和LZM都有不同程度提高，并且呈现剂量效应关系。其中,0.025%枯草芽孢杆菌添加组AA鸡的NDV-Ab显著高于对照组，0.015%、0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌添加组AA鸡IgG含量显著高于对照组，但组间差异不显著；AA鸡的LZM在2个生长阶段表现出一定差异，0.020%、0.025%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的LZM显著高于对照组，0.020%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的LZM显著高于对照组。各试验组42日龄AA鸡的NDV-Ab分别比对照组高5.22%(P>0.05)、15.13%(P>0.05)、13.57%(P>0.05)和21.74%(P<0.05)；各试验组42日龄AA鸡的IgG含量比对照组高19.41%(P>0.05)、33.53%(P<0.05)、22.94%(P<0.05)和32.94%(P<0.05)，除此之外，0.020%、0.025%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的IgG含量比0.010%枯草芽孢杆菌添加组分别升高2.95%(P<0.05)、11.33%(P<0.05)；各试验组42日龄AA鸡的LZM均大于对照组，其中0.020%枯草芽孢杆菌添加组提高最多，为10.36%(P<0.05)。

表4 枯草芽孢杆菌对AA鸡部分免疫指标的影响Tab.4 Effect of Bacillus subtilis on partial immune indexe of AA chickens

3 结论与讨论

饲粮添加枯草芽孢杆菌可在一定程度上提高动物的生长发育和免疫器官指数，同时提高血清NDV-Ab、IgG含量和LZM。因此，以生长性能、免疫器官和免疫指标为综合指标进行评价后，得出枯草芽孢杆菌的适宜添加剂量为0.020%。

3.1 高温环境下饲粮添加枯草芽孢杆菌对AA鸡生长性能的影响

芽孢杆菌在动物生产中常用来调节肠道菌群内环境平衡、提高饲料利用效率、增强机体免疫功能、产生生物活性物质促进机体健康[5-7]。唐志刚等[8]研究表明，日粮添加0.01%的益生菌可促进AA鸡快速生长和免疫器官发育，也可提高机体抗病力和蛋白质利用率。研究发现，日粮添加枯草芽孢杆菌制剂可提高肉鸡日增体质量和饲料利用率，刺激机体分泌肠道酶和其他酶，促进饲料消化吸收[9-12]。但不同的研究结果间也有差异。余东游等[13]发现，饲粮中添加1×105cfu/g的枯草芽孢杆菌对308罗斯肉鸡前期生长不明显，但后期效果优于前期，且全期料重比降低，饲料转化率增大。本研究结果表明，0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌添加组1—21日龄、22—42日龄以及饲养全期AA鸡的ADG均高于对照组。这与陈彩文等[14]、谭荣炳等[15]和郑春芳等[16]研究结果一致，但与齐博等[17]研究结果不一致，推测可能与鸡品种、菌群种类及活菌数、添加剂量和饲养环境有关。在饲粮中添加0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌有利于促进AA鸡的生长发育，并提高饲料利用率。分析其相关作用机制，可能与枯草芽孢杆菌能够增加肠道有益菌群数量和比例，补充内源酶的不足并提高了营养物质的利用率有关[18]。

3.2 高温环境下饲粮添加枯草芽孢杆菌对AA鸡免疫指标的影响

饲料添加微生态制剂可提高血清中的IgG、补体(C3)和AKP[19]，降低料重比，显著提高鸡只免疫器官指数和消化器官指数[20]。刘明超等[21]发现，添加0.03%的枯草芽孢杆菌可明显提高36日龄罗斯308肉鸡的胸腺指数；添加0.1%的枯草芽孢杆菌制剂(一类为Pa02制剂，另一类为PAS38，活菌数均为1×106cfu/g)可明显改善4周龄和6周龄爱维因肉鸡的胸腺、脾脏和法氏囊器官发育[22]。不同微生态制剂之间的效果也有差异，利明[23]在日粮中添加枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.lichenlformis)和迟缓芽孢杆菌(B.lentus)，探究其对雄性AA鸡免疫器官发育和免疫细胞吞噬能力，以枯草芽孢杆菌的效果最好。本研究检测得，0.020%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的胸腺指数、脾脏指数分别高于对照组61.25%(P<0.05)和59.26%(P<0.05)，0.025%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的胸腺指数高于对照组52.50%(P<0.05)。0.025%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的脾脏指数分别高于对照组和其他试验组43.43%(P<0.05)、39.21%(P>0.05)、36.54%(P>0.05)、23.48%(P>0.05)。利明[23]通过研究B.subtilis、B.lichenlformis和B.lentus对雄性AA鸡生产性能和免疫功能的影响，结果表明，法氏囊指数较对照组均有不同程度增加，但差异不显著，与本试验结果相似。

枯草芽孢杆菌主要通过好氧呼吸的方式进行发酵，可作为免疫因子刺激并激活生命体免疫细胞，使免疫系统成熟加快。倪耀娣等[24]报道，口服活菌微生态制剂可延缓病毒免疫后新城疫抗体滴度消长速度；DUC等[25]发现，饲喂枯草芽孢杆菌可提高小鼠免疫球蛋白G效价水平，并能诱导和促进炎细胞因子白细胞介素-6生成；王雄等[26]研究发现，饲喂银鲫微生态制剂后，饲喂组在第7天、第14天、第21天和第28天的LZM均高于未饲喂组。本研究中，0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌添加组21日龄AA鸡的IgG含量和LZM均高于对照组，0.015%、0.020%和0.025%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的IgG含量均高于对照组(P<0.05)，0.020%、0.025%枯草芽孢杆菌添加组42日龄AA鸡的IgG含量比0.010%枯草芽孢杆菌添加组分别升高2.95%(P<0.05)、11.33%(P<0.05)。各试验组42日龄AA鸡的LZM均大于对照组，其中，0.020%枯草芽孢杆菌添加组提高10.36%(P<0.05)。因此，饲粮中添加不同剂量的枯草芽孢杆菌可明显提高血清NDV-Ab、IgG含量和LZM，进而提高AA鸡的免疫功能。