支气管哮喘并发幽门螺杆菌感染患儿粪便抗原与血清抗体特征分析*

赵含信，郝维敏

(宿州市立医院，安徽宿州 234000)

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，HP)感染与慢性萎缩性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等胃肠道疾病有关[1]。临床上常用的HP感染检测方法分为两大类[2，3]：一类为侵入性检测，另外一类为非侵入性检测(14C-呼气试验、粪便HP抗原检测、血清HP抗体检测)，有文献报道在成人体检人群中粪便HP抗原检测可以完全取代14C呼气试验[3]，而在儿童人群中HP检测的方法评价较少。另外，支气管哮喘(哮喘)作为常见的儿童呼吸道疾病，其发病率呈现逐年上升的趋势，这与机体免疫、环境改变以及病原感染密切相关[4]。自有文献报道了HP感染阳性患者中发生哮喘的比例明显降低以来[5]，HP感染与过敏性疾病的发病相关性研究已成为热点，但HP在儿童支气管哮喘与健康体检儿童间的血清HP抗体谱和血清型差异性及流行病学调查未见报道，本文拟研究在儿童人群中三种HP检测方法的结果的可比性；调查支气管哮喘患儿与健康体检儿童两组感染HP阳性率及其差异性；比较分析两组人群中血清HP抗体谱的表达及血清型分布。研究如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2016年12月～2017年12月，安徽省宿州市立医院儿科支气管哮喘患儿135例作为疾病组，其中男童78例，年龄8.4±1.6岁，女童57例，年龄8.7±1.2岁；儿童体检中心健康体检者147例作为对照组，其中男童85例，年龄8.9±0.9岁，女童62例，年龄8.5±1.1岁，两组间性别、年龄构成无差异，具有可比性。研究对象的筛选原则：① 进行14C-尿素呼气试验(14C-UBT)前1个月内未进行HP治疗和未服用与幽门螺杆菌治疗有关的抗生素；②严格审查各肝肾功能，必要时行影像学检查予以排除肝肾功能不全，以及其他对研究结果可能造成影响的疾病。对照组(健康体检儿童)除上述筛选原则外，必须满足未有支气管哮喘病史或处于支气管哮喘急性发作期。疾病组患儿需满足处于支气管哮喘急性发作期，且未进行相应的治疗前。所有研究对象进行14C呼气试验检验并登记结果，另外收集患儿和健康体检儿童血清各1ml，-80℃冻存备用。支气管哮喘疾病组由儿科医生遵循2008 年修订的《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[6]对儿童支气管哮喘做出诊断并予以随访。

1.2 试剂与仪器14C放射性液闪仪及0.75μCi/粒(14C-UBT)尿素胶囊(深圳市中核海得威生物科技有限公司)，幽门螺杆菌粪便抗原、血清抗体检测试剂盒(均来自杭州艾康生物有限公司)，HP免疫印迹试验试剂盒(深圳市伯劳特生物制品有限公司)。

1.3 方法

1.3.114C-UBT：受检者清晨空腹或餐后2 h口服一粒14C尿素胶囊，静坐25 min后开启CO2吸收剂一瓶，向瓶内平静吹气约1～3 min，然后向瓶内加入稀释闪烁液4.5 ml，加盖密封，于闪烁仪上作14C放射性测试2 min，结果判断：14C-UBT≥100 dpm/mmol CO2可判断为HP阳性。

1.3.2 胶体金粪便HP抗原与血清HP抗体检测：同时收集受检者的粪便与血清标本，按试剂盒说明书进行操作和结果判断。

1.3.3 免疫印迹试验血清抗体谱检测及血清分型：当血清HP抗体检测结果阳性时，进行HP血清抗体谱分析，操作按试剂盒说明书进行操作；区带结果判断：细胞毒素相关蛋白(CagA-116KD)、空泡毒素(VacA-95KD，VacA-91KD)、尿素酶亚单位(UreA-66KD，UreB-30KD)区带相关抗体显色深浅低于质控带判断为阴性结果，反之则为阳性结果；严格按照试剂说明书进行分型结果判断：根据文献标准进行分型，CagA-116KD，VacA-95KD，VacA-91KD区带相关抗体中有任一阳性结果判为血清型I型，三者都阴性则为II型。

1.4 统计学分析 不同HP感染检测方法之间阳性结果(率)差异的比较采用配对χ2检验，抗体谱中各抗体的阳性率差异采用χ2检验，计数资料用百分率(%)表示，所有数据在SPSS 19.0统计软件包上进行。

2 结果

2.1 幽门螺杆菌感染检测不同方法间阳性率的比较 目前在临床上儿童幽门螺杆菌常见的检测方法主要为：幽门螺杆菌14C-UBT实验、粪便中的HP抗原检测以及血清中的幽门螺杆菌抗体检测三种，本文通过对三者之间的检测结果进行比较分析，14C-UBT阳性率32.6%(92/282)，粪便HP抗原阳性率33.7%(95/282)，血清HP抗体阳性率35.1%(99/282)。以14C-UBT为参考方法，经计算三种方法间的统计结果，差异无统计学意义(χ2=0.77～0.88，P>0.05)。

2.2 健康体检组与哮喘患儿疾病组HP感染调查情况 见表1。

表1 疾病组与对照组采用三种方法对其流行病学调查结果[%(n)]

三种检测方法在疾病组和对照组中HP感染率结果间差异无统计学意义(P>0.05)。另外，在疾病组与对照组间HP感染率(30.4%～37.4%)间差异无统计学意义(χ2=1.06，0.77，0.72，均P>0.05)。

2.3 疾病组与对照组间的幽门螺杆菌抗体谱及血清型比较分析 见表2。

表2 疾病组与对照组间血清抗体谱与血清型差异性比较[n(%)]

类别指标组别(n)疾病组(44)对照组(55) 统计指标χ2P值血清抗体谱 CagA-116KDVacA-95KDVacA-91KDUreA-66KDUreB-30KD16(36.4)14(31.8)14(31.8)29(65.9)28(63.6)31(56.4)28(50.9)28(50.9)30(54.5)29(52.7) 3.923.643.641.311.190.0470.0560.0560.2520.275血清型 ⅠⅡ16(36.4)26(63.6)31(56.4)24(43.6) 3.920.047

对健康体检组与患儿疾病组进行比较，VacA-95KD，VacA-91KD，UreA-66KD和UreB-30KD抗体在两组间的差异无统计学意义(χ2=3.64，3.64，1.31，1.19，均P>0.05)，而CagA-116KD抗体在两组间的差异有统计学意义(χ2=3.92，均P<0.05)。血清Ⅰ型和Ⅱ型感染率在两组间差异有统计学意义(χ2=3.92，P<0.05)。

3 讨论

哮喘作为儿童最常见的呼吸道慢性疾病之一，在全球范围内发病率及其引起的病死率呈现逐年上升的趋势，给儿童的学习教育、成长发育和身心健康等造成了巨大的影响。截止目前，哮喘的主要特征是慢性气道非特异性炎症以及高反应性，这已得到了广大学者的认可和赞同，但哮喘发作和发病的具体病理机制尚不清楚，文献报道可能与遗传易感、呼吸道感染、气道神经痉挛等因素密切相关。近年来，HP感染与支气管哮喘发病的相关性研究已引起了儿科学、呼吸病学以及病原微生物学等专家的广泛关注。在临床上对于HP 感染和儿童支气管哮喘的相关性研究结果多是基于流行病学调查和相关资料对照所得出的结论，未见有文献报道HP感染的抗体、抗体谱、血清型与儿童支气管哮喘的报道，而本文则从血清学角度说明HP抗体与儿童支气管哮喘发生的内在联系。

HP是全球范围内流行的病原菌，尤其是在发展中国家儿童HP感染的阳性率高达50%[7]。与本研究中HP在儿童中流行率(30.4%～37.4%)基本一致，与张忠夫等[3]报道的体检人群阳性率(43.5%～45.6%)相近。目前临床上诊断HP感染的方法主要有两类：侵入性试验和非侵入性试验[8，9]。由于非侵入性试验(14C-UBT，HP抗原、抗体检测)对人体损害小，各试验检测的诊断效能已得到认可[12]，在临床已逐步得到普及和应用，但14C-UBT相比HP抗原、抗体检测的应用还存在一定的局限性，如14C-UBT存在一定的放射性(该放射性伤害小)、需要患者的配合吹气(与患者的依从性相关)、试验时间较长以及不适合大规模的人群筛查。通过本文对体检儿童和哮喘儿童采用三种HP感染的检测方法比较可知，粪便HP抗原胶体金试验可以取代14C-UBT用于儿童HP感染检测，同时与血清抗体联合检测不仅有助于诊断HP感染，同时也能监测药物疗效和了解疾病的感染阶段。因此，HP抗原与抗体检测具有取材方便、操作时间短、价格低廉等优点[10]，更适用于儿童HP的检测与诊断。

已有研究表明，血清中HP刺激机体产生的不同抗体与其致病程度、疾病的治疗以及预后密切相关[11]。目前临床上将HP感染分为Ⅰ和Ⅱ型2种血清型，其中Ⅰ型为抗-CagA或抗-VacA抗体阳性；Ⅱ型为抗-CagA和抗-VacA抗体阴性，抗-UreA或抗-UreB阳性。文献报道不同的血清型引起胃肠道疾病的结局不完全一样[12]。本研究采用14C-UBT，粪便HP抗原与血清HP抗体三种方法联合检测哮喘患儿与正常体检儿童的HP感染情况，三种实验结果显示，在儿童支气管哮喘患者与健康体检儿童间HP感染率差异无统计学意义。这与Tsang等[13]和Wang等[14]报道的HP感染与支气管哮喘并没必然的联系结论相一致，从儿童HP的感染率角度并没有充足的证据说明两者之间存在相关性。

本文对HP抗体阳性的支气管哮喘患儿和健康体检儿童血清抗体谱进行了进一步比较分析，结果显示VacA-95KD，VacA-91KD，UreA-66KD和UreB-30KD抗原刺激产生的抗体在两组间差异无统计学意义(P>0.05)，而CagA-116KD刺激机体产生的抗体在两组间差异有统计学意义(P<0.05)，且两组中的血清型分布差异具有统计学意义(P<0.05)，支气管哮喘患儿中的I型比例明显低于健康体检组儿童。另外，我们通过数据发现虽然VacA-95KD，VacA-91KD抗原刺激机体产生抗体在两组间差异无统计学意义(P>0.05)，但统计的P值与0.05较为接近，可能是本文选取的样本例数少导致，随着样本量的加大可能两组的差异就可以统计出来，下一步我们将加大样本量进行多中心研究，以了解VacA-95KD，VacA-91KD抗体谱在两者之间分布的差异性。CagA-116KD在两组之间的分布存在差异，与Chen等[15]报道的CagA菌株感染率与哮喘的发病率呈现出反比的关系相一致。CagA阳性HP菌株感染的儿童中，支气管哮喘发病率降低的形成原因可能与其感染后刺激引起的过敏性反应下降相关，低浓度的IgE对于T细胞应答具有调节作用，CagA抗体阳性的患者血清中IgE含量相对偏低[16]。

综上所述，目前在临床上对于儿童HP感染可以采用HP抗原与抗体联合检测取代现用的C-UBT，另外通过本文的研究HP感染后是否能够刺激机体产生CagA抗体，与儿童支气管哮喘存在负相关，那么其是否是直接导致和抑制支气管哮喘的直接因素还有待下一步的研究证实。