替格瑞洛片的制备及其工艺稳定性研究

赵文聪

（郑州市妇幼保健院 药剂科，河南 郑州 450053）

替格瑞洛（ticagrelor）是一种新型环戊基三唑嘧啶类（CPTP）口服抗血小板聚集药物，其靶点为P2Y12受体[1-3]，商品名为倍林达（Brilinta），是由英国阿斯利康公司研制开发的一种新的治疗急性冠脉综合征的药物。替格瑞洛相比氯吡格雷起效更快[4]，并能显著地降低心血管不良事件的发生率及急性冠脉综合征（ACS）的死亡率[5-6]。目前已在全球多个国家得到批准，上市后，被众多国际治疗指南推荐用于ACS患者的治疗，包括欧洲心脏病学会（ESC）指南、美国心脏病学会（ACC）指南和美国心脏协会（AHA）指南等[7]。2012年在我国上市，同时我国《经皮冠状动脉介入治疗（PCI）指南》也将其列为抗血小板治疗药物之一。在生物药剂学分类系统（BCS）中，此种药物属于IV类化合物，具有难溶性，不同处方制备工艺可能都会对其溶出度造成影响。因此，探究替格瑞洛仿制片的制备方法并保证其工艺稳定性具有重要意义。本文探讨了替格瑞洛仿制片的制备，以溶出度为主要评价指标，筛选了与原研市售片溶出曲线一致的最佳处方工艺，并验证了3批次自制处方片剂的工艺稳定性。

1 仪器与材料

1.1 仪器

TDP-5单冲压片机（上海天峰）；YQ50-1气流粉碎机（上海塞山）；KJZ-10快速搅拌制粒机（上海信宜）；BY-300A包衣机（郑州泽铭）；YPD-2片剂硬度计（山东博科）；CS-2A脆碎度测试仪（天津盛达）；MF-50红外快速水分测定仪（日本AND）；AUW120D电子天平（日本岛津）；ZRS-8G智能药物溶出仪（天津天大天发）；pH-3C型pH计，（上海雷磁仪器厂）；UV-8500型紫外分光光度计（上海天美）等。

1.2 药品与试剂

替格瑞洛原料药（天润医药，纯度：99.5 %）；替格瑞洛片（阿斯利康，批号：TDGK-1509044，规格：90 mg/片）；甘露醇（法国罗盖特）；磷酸氢钙（湖州展望）；羧甲基淀粉钠（湖州展望）；羟丙基纤维素（安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：20120815）；硬脂酸镁（安徽山河）；欧巴代包衣（上海卡乐康）；盐酸，吐温，磷酸二氢钾，氢氧化钠，醋酸钠，95 %乙醇等。

2 方法与结果

2.1 处方筛选与确定

为确保与原研药的一致性，本研究参考替格瑞洛片原研处方组成，选择原研药所用辅料种类，并分别对替格瑞洛原料药粒径、片芯辅料（稀释剂甘露醇、稀释剂磷酸氢钙、黏合剂羟丙基纤维素、崩解剂羧甲基淀粉钠）的用量、包衣增重等进行筛选。经过筛选，最终确定处方为：片芯辅料种类为甘露醇、磷酸氢钙、羧甲基淀粉钠、羟丙基纤维素和硬脂酸镁，包衣增重为3 %；最终确定制备工艺为：湿法制粒压片。

2.2 替格瑞洛片的制备

原辅料预处理：将替格瑞洛原料药用气流粉碎机粉碎，控制粒径为d（0.9）≤25 μm；将所有辅料过100目药典筛，备用。

片剂制备：称取替格瑞洛90 g，甘露醇120 g、磷酸氢钙60 g、羧甲基淀粉钠10 g、羟丙基纤维素8 g，适量水，混匀，湿法制粒，加入硬脂酸镁3 g，混匀，压片，再进行包衣，连续制备3批次，即得替格瑞洛片。

2.3 溶出度测定方法的建立

替格瑞洛片为普通口服固体制剂，替格瑞洛溶解度低，参照替格瑞洛原研片质量标准，加入0.2 %吐温，分别以含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶出介质，桨法[8]，评价考察自制3批片剂与参比片剂的溶出一致性。

2.3.1 检测波长的确定 分别称取替格瑞洛原料药、片剂辅料、替格瑞洛原料药和片剂辅料的混合物适量，分别用含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶出介质溶解，200～400 nm扫描紫外图谱，并参考文献[9]，确定300 nm为检测波长，此波长下，辅料对替格瑞洛测定无干扰。

2.3.2 滤膜吸附试验 取自制替格瑞洛片剂，分别采用含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶出介质，按溶出度测定方法，于60 min时取溶出液适量，分别采用0.45 μm膜过滤和离心的方式处理，分别测定两者的吸光度。结果表明，4种不同介质的替格瑞洛溶出经滤膜和离心处理，吸光度无差异，方便起见，采用0.45 μm滤膜处理溶出液。

2.3.3 线性和范围 精密称取替格瑞洛对照品10.04，10.23，10.31，10.19 mg于4个100 ml量瓶，分别用含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶出介质溶解并定容至刻度，混匀，作为储备液。分别用储备液配制成浓度为5.07，10.14，15.21，20.28，25.35 μg/ml的pH 1.0介质中替格瑞洛系列标准溶液；浓度为5.12，10.23，15.35，20.46，25.58 μg/ml的pH 4.5介质中替格瑞洛系列标准溶液；浓度为5.16，10.31，15.47，20.62，25.78 μg/ml的pH 6.8介质中替格瑞洛系列标准溶液；浓度为5.10，10.19，15.29，20.38，25.48 μg/ml的水介质中替格瑞洛系列标准溶液，照紫外分光光度法在300 nm处测定吸光度（A）值。以质量浓度（μg/ml）为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。回归方程依次为：y=0.0299x+0.0033，R2=0.9998，线性范围为5.07～25.35 μg/ml；y=0.0295x+0.0085，R2=0.9999，线性范围为5.12～25.58 μg/ml；y=0.0290x+0.0140，线性范围为5.16～25.78 μg/ml；y=0.0298x+0.0017，线性范围为5.10～25.48 μg/ml。

2.3.4 准确度 按处方量的50 %，80 %，100 %分别精密称取替格瑞洛对照品约45，72，90 mg各12份，加入相应处方比例的空白辅料，置于12个100 ml量瓶中，分别用含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶出介质溶解并定容至刻度（同一介质的相同浓度水平溶液配制3份）。分别移取2 ml溶液，置100ml量瓶中，分别用相应的溶出介质稀释定容至刻度，混匀，照紫外分光光度法在300 nm处测定吸光度（A）值，并配制相应的对照品溶液，测定吸光度值并计算回收率。结果显示，替格瑞洛在4种溶出介质中回收率良好。见表1～4。

表1 替格瑞洛在pH 1.0介质中回收率

表2 替格瑞洛在pH 4.5介质中回收率

表3 替格瑞洛在pH 6.8介质中回收率

表4 替格瑞洛在水中回收率

2.3.5 精密度

2.3.5.1 重复性 取自制片剂6片，分别以含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水900 ml为溶出介质，转速75 r/min。于60 min时取溶液5 ml，过0.45 μm滤膜，取续滤液2 ml，加入10 ml量瓶，并用溶出介质稀释至刻度，混匀，照紫外分光光度法在300 nm处测定吸光度（A）值。结果显示重复性良好，见表5。

表5 4种溶出介质中测定的重复性

表6 4种溶出介质中测定的中间精密度

2.3.5.2 中间精密度 取自制片剂6片，由另一试验人员在不同日期采用不同的溶出度测定仪和紫外分光光度计进行测定，结果显示中间精密度良好，见表6。

2.3.5.3 仪器精密度 取重复性测定样品（pH 1.0介质中溶出），重复测定6次。结果RSD=0.04 %（n=6），显示仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性 取2.2.5.1项下重复性测定的4种溶出介质中的4个样品，分别于0，0.5，1，2，4，8 h测定，结果8 h内，替格瑞洛在4种溶出介质中稳定性良好，见表7。

表7 替格瑞洛在4种溶出介质中的稳定性

2.3.7 溶出曲线的绘制及比较 取自制片剂和参比制剂各12片，分别以含0.2 %吐温的pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水900 ml为溶出介质，转速75 r/min。分别于5，10，15，30，45，60 min取溶液5 ml，并及时补充相应溶出介质5 ml，过0.45 μm滤膜，取续滤液2 ml，加入10 ml量瓶，并用溶出介质稀释至刻度，混匀，照紫外分光光度法在300 nm处测定吸光度（A）值；同时配制相应介质的对照品溶液，测定A值，并以外标法计算累积溶出度，比较自制片剂和参比制剂的溶出相似因子f2。见图1、表8。

图1 替格瑞洛片在4种不同溶出介质中的溶出曲线

表8 自制替格瑞洛片与原研制剂在4种溶出介质中的溶出度及f2

3 讨论

随着人们生活条件的改善、人口老龄化的不断加剧以及环境的逐渐恶化，我国血栓性疾病的发病率和死亡率呈逐年升高的趋势，且不断年轻化[10]。血栓的形成是血栓性疾病的发病原因，而抗血小板药物对于预防和治疗血栓性疾病有较好的效果，故探究制备安全有效的抗血小板药物的方法具有重要实际意义。

本研究中，首先对替格瑞洛片进行了处方筛选，并按标准流程和方法成功制备了替格瑞洛片。进一步采用体外溶出评价方法，比较溶出相似因子f2来检验自制片剂的质量，结果显示，替格瑞洛在4种不同溶出介质（pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液和纯水）中，均显示出良好的线性关系；且在上述4种溶出介质回收率均较高，均在99 %以上；此外，其在上述4种介质中重复性、中间精密度和稳定性均显示良好。提示替格瑞洛自制制剂与原研制剂质量具有一致性[11]。

此外，本实验结果表明，采用紫外分光光度法测定溶出度方法简单可靠，且具有良好的线性关系，方法学等各方面均符合要求，这有利于对工艺质量稳定性进行评价。同时，本实验完成的3批自制片剂在4种溶出介质中与原研片剂比较f2[12]均大于50，即提示自制片剂在4种溶出介质中与原研制剂比较体外释放一致性良好，有利于实现工业化生产。

以往相关研究显示，替格瑞洛在pH 1.0盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液和纯水这4种常见介质中的累积溶出度低于10 %，缺乏临床指导意义[13]。但本研究结果仍显示其累积溶出度良好，可能与不同的制作工艺和原料选择有关。本研究中替格瑞洛仿制片处方为：替格瑞洛90 g、甘露醇120 g、磷酸氢钙60 g、羧甲基淀粉钠10 g、羟丙基纤维素8 g、硬脂酸镁3 g，包衣增重3 %。因此可考虑按此处方进行大批量工业化生产。

综上所述，替格瑞洛片制备工艺稳定且自制制剂与参比制剂在不同溶出介质中的体外溶出行为一致，具有较好的工艺稳定性。