肠可宁微丸质量标准研究

王明华

（辽宁省沈阳市肛肠医院，辽宁 沈阳 110002）

中医认为，慢性结肠炎主要是由湿寒之邪内侵脏腑所致运化失调，或湿热中阻导致气滞血瘀而引发的寒热错杂，病机是脾胃功能障碍，故治疗的根本应是恢复、调和脾胃功能[1-2]。肠可宁微丸由黄芪、黄连、黄柏、白术、厚朴等中药组方，为我院经验用方，有健脾益气、清热利湿、厚肠止泻功效，对慢性结肠炎有较好疗效[3-4]。为保证该制剂的质量，本研究中采用薄层色谱（TLC）法定性鉴别制剂中的黄芪、黄柏，采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中的盐酸小檗碱含量。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；KQ118型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA1004A型电子分析天平（上海精天电子仪器有限公司）；TGL-16型台式离心机（湖南湘仪实验仪器有限公司）。

试药：肠可宁微丸（我院自制，批号分别为20180311，20180313，20180315，规格为每袋 10 g）；黄芪甲苷对照品（批号为 110781-01616，纯度为 97.4%），盐酸小檗碱对照品（批号为110713-201212，纯度为86.8%），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈和磷酸二氢钠为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

黄芪[5]302：取样品 20 g，加甲醇60 mL，加热回流 1 h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100～200目，5 g，内径为10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次50 mL，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成质量浓度为1 g／L的对照品溶液。按样品处方和工艺制备缺黄芪的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。按 2015年版《中国药典（四部）》通则 0502“薄层色谱法”试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2，V／V／V）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。

黄柏[5]305：取样品 10 g，加甲醇 30 mL，超声（功率为250 W，频率为 40 kHz）处理 15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄柏对照药材0.1 g，同法制成对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成质量浓度为0.5 g／L的对照品溶液。按肠可宁微丸处方和工艺制备缺黄柏、黄连药材的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。按2015年版《中国药典（四部）》通则0502“薄层色谱法”试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 -异丙醇 -甲醇 -浓氨液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，V／V／V／V／V）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

图1 薄层色谱图

2.2 盐酸小檗碱含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：YMC-Pack ODS 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -0.05 mol／L 磷酸二氢钾溶液（25 ∶75，V／V）；流速：1.0 mL ／min；检测波长：345 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

称取盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制得质量浓度为 40 μg ／mL 的对照品溶液。取样品 0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 -甲醇（1∶100，V／V）混合溶液100 mL，密塞，称定质量，置50℃水浴中加热15 min，取出，放冷，超声处理30 min，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，10 000 r／min离心5 min，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按样品处方和工艺制备缺黄连、黄柏的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验和专属性考察：取上述3种溶液各适量，按拟订色谱条件进行测定，记录色谱图，详见图2。理论板数按盐酸小檗碱峰计应不低于4 000，分离度＞1.5，基线分离良好，阴性对照在与盐酸小檗碱对照品相同保留时间处无干扰峰，表明系统适用性和专属性良好。

线性关系考察：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加流动相制得质量浓度为 10，20，50，80，100 μg ／mL的系列对照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、盐酸小檗碱质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝44193X-36 309，r＝0.999 7（n＝5）。结果表明，盐酸小檗碱质量浓度在10～100 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

图2 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取对照品溶液适量，按拟订色谱条件连续进样6次测定，记录峰面积。结果的 RSD为1.27%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品（批号为2180311）溶液适量，分别于室温下放置 0，2，4，6，8 h，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果的 RSD为 2.31%（n＝5），表明供试品溶液在室温放置8 h内基本稳定。

重复性试验：称取同批（批号为20180311）样品适量，精密称定5份，依法制备供试品溶液，再按拟订色谱条件进样分析，记录峰面积。结果的 RSD为1.53%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量样品（批号为20180311，盐酸小檗碱含量为7.315 2 mg／g），精密称定6份，分别加入一定质量浓度的对照品溶液，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

2.2.4 样品含量测定

取3批样品各适量，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件平行进样测定3次，记录峰面积，并计算样品含量。结果3批样品中盐酸小檗碱的含量分别为7.315 2，7.626 5，7.135 4 mg ／g。

3 讨论

肠可宁微丸是我院应用多年的临床制剂，其原方为散剂，但由于味苦、服用不方便，患者用药依从性差，故将其剂型改良为微丸，并对其质量标准进行了研究。

鉴别黄柏时，尝试了药典方法及多种展开剂[6-7]，分离效果均不理想，最后选用甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇 -浓氨液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，V／V／V／V／V）为展开剂，展开效果最好，能满足黄柏的TLC鉴别要求。

盐酸小檗碱是黄柏和黄连的主要成分，因此选取该成分为含量指标，考察了不同的流动相[8-10]，结果以乙腈 -0.05 mol／L 磷酸二氢钠溶液（25∶75，V／V）为流动相时，分离度最好，样品无干扰，适合盐酸小檗碱的含量测定。

本研究中建立的方法操作简单，精密度、稳定性、重复性均好，专属性强，可用于肠可宁微丸的质量控制。