不同样品制备方法对一次性使用灌流器热原试验的影响

曾裕 李伟松 杨立峰 田胜慧 广东省医疗器械质量监督检验所 （广东 广州 510663）

内容提要： 目的：研究一次性使用血液灌流器不同样品制备方法所获得的供试液对其热原质检测的影响。方法：参照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的试验原则，对一次性使用血液灌流器不同生产企业的不同批次不同规格，运用不同的样品制备方法进行了热原检测。结果与结论：模拟临床使用的样品制备方法适合灌流器的生物相容性试验。

不同样品制备方法所获得的供试液对其热原检测有一定的影响[1]。一般制样的方法是参照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的试验原则，但是对于特殊性状的医疗器械产品的制样需要结合各自的产品特性以及临床使用来进行制样[2-4]。结合实验数据进行研究。

血液灌流器，是开展血液灌流必不可少的医疗器械。灌流器外壳为塑料，内容物为已处理包膜吸附剂，属于三类高风险医疗器械，主要用于血液净化治疗。YY 0464-2009《一次性使用血液灌流器》[5]行业标准中，要求要做热原试验，但并未有具体的样品制备方法，本文主要讨论制样方法对热原试验的影响。

1.材料与方法

1.1 一般材料

试验样品：一次性使用血液灌流器；浸提介质：生理盐水；试验动物：新西兰大白兔，健康无孕，体重不低于2.0kg（广东省医学实验动物中心）。

1.2 方法

自兔耳缘静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38°C的样品浸提液。注射完毕，每隔30min测量体温1次，共6次。以6次体温中最高的1次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度[2]。

1.3 结果评价

3只兔子体温升高均低于0.6°C，且体温升高总和低于1.3°C。在该试验条件下，试验样品浸提液热原检查合格。

2.不同的制样方法

①参照GB16886.12-2005，不规则产品浸提比例0.2g/mL，对外壳进行切割后（型号规格HA130、HA330），取20g产品的各部件，加入100mL的生理盐水，在37°C下浸提72h。②取灭菌后的灌流器（型号规格：HA130、HA150、HA330），按产品说明书规定的盐水量（3000mL）预冲，再用生理盐水充满灌流器，37°C下浸提72h，取浸提液备用。③3000mL生理盐水冲洗灌流器后收集100mL作为检验液。④直接取填充液作为供试液。

3.实验结果

按照制样方法①，热原实验结果不合格，所有兔子的反应异常，三只兔子体温升高均高于0.6°C，三只兔子体温升高总和高于1.3°C。

用方法②制样后实验，实验过程兔子反应正常，兔子体温升高也正常。但是也有方法②做不合格的产品（型号规格：WG130）。整改的方法是制样方法③，整改后实验结果是三只兔体温升高均低于0.6°C。

有很多产品（型号规格如下表1），按方法④进行实验，按家兔体重每公斤注射10mL，注射完毕，新西兰兔反应正常，三只兔子体温升高均低于0.6°C，且体温升高总和低于1.3°C。反应出他们的填充液是没有热原反应的。见表1。

4.讨论

按照GB16886.12-2005，不规则产品浸提比例0.2g/mL的制样方案，显然对于一次性使用灌流器来说是不合适的，以至于现在所有的灌流器产品基本上都不会采用这种方法来制备样品试验液。因为灌流器内装的吸附剂大都是具有轻小、易黏附的特性，切割取出后容易污染，再加上被破坏的外壳，称取的比例不易把握。在称取样品时，也很容易使样品污染，导致热原的发生。

那么灌流器的样品制备方法就要参照GB/T16886.12-2005《医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照样品》[3]3.14，模拟使用浸提：符合GB/T16886本部分要求的浸提，通过评价在常规使用某一器械过程中，患者或者使用者接受可沥物质水平而使用的一种模拟产品使用的浸提。取填充液作为供试液和预冲洗后灌满浸提得出浸提液，实验的结果表明，这两种的样品制备方法可取。这是企业根据自己的灌流器的特性制定的制样方案。填充液是已经对灌流器内吸附剂（树脂）进行过冲洗排污后密封包装进血室内的无菌液体（符合《中华人民共和国药典》[6]2015年版要求的注射用水），保证了无菌状态下保存，不受污染的情况下，直接用填充液进行试验。而选取预冲后灌满浸提的操作，是参照一次性使用灌流器的使用说明书中[安装和使用说明]“治疗前的准备”和“预冲”[7]。实际使用中也有血浆灌流的方法：“连接灌流管路，用3000mL生理盐水冲洗管路[8]。自患者肘正中静脉插管双腔管，动脉血经血浆分离器后，形成血循环和血浆循环，血浆经过灌流器。”模拟临床使用的冲洗方法，预冲后灌满取浸提液备用，实验数据正常。

样品制备的方法，都是要在保证样品不受污染，并且在制样过程中，没有使样品及浸提液受污染的情况下进行。由于它组成成分的特殊性，以及在制样过程中不易污染的操作，在热原实验的样品制备时，可以参照样品的使用说明书上的操作进行制样，对它的“治疗前准备”与“预冲”均要参考，使样品的制备尽可能与实际临床应用相契合。若是有实验过程的异常，应采取复试来进行验证。

表1. 产品型号规格(mL)