SLC30A8基因位点rs11558471 A/G多态性 与妊娠糖尿病的相关性研究

李 莹，张书巧，周 霞，武 闯

（1.厦门医学院药学系，福建 厦门 361023； 2.枣庄市中区人民医院妇产科，山东 枣庄 277000； 3.临沭县妇幼保健院妇产科，山东 临沂 276700）

妊娠期糖尿病（ gestational diabetes mellitus，GDM） 是指孕妇在妊娠期首次发病或发现的任何程度的糖代谢异常。GDM可增加母儿健康危害加大，并

伴有其他代谢功能紊乱，是妊娠期常见并发症之一[1]。相关研究表明，GDM有遗传倾向，与其易感基因突变有关[2]。SLC30A8基因即锌转运蛋白-8基因，其编码的胰岛腺特异性锌转运体-8（ZnT-8）是调节胰腺细胞分泌胰岛素的重要组成部分,可促进锌在胰岛β细胞的囊泡蓄积[3]。研究显示，SLC30A8可增加2型糖尿病的遗传易感性，但与不同地区孕妇GDM的发病的相关性存在较大差异，具有明显的地域性。为此，本研究对2015-2018年山东地区GDM与SLC30A8 rs11558471 A/G单核苷酸多态性的遗传易感性的相关性进行了调查分析，现报导如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

前瞻性收集2015年9月-2018年10月山东地区确诊为GDM孕妇患者149例，纳入GDM组。患者年龄22-41岁，平均27.9±8.03岁，孕周21-28周，平均23±2.0周。选取同期入院的健康孕妇163例，纳入对照组。对照组年龄23-41岁，平均28.3±6.9岁，孕周21-30周，平均24±1.2周。

GDM诊断标准[4]：采用2011年美国糖尿病学会（ADA）诊断标准，所有受试者于孕24-28w行口服葡萄糖耐量试验（glucose tolerance test，0GTT），空腹血糖（FPG）≥5.1 mmol/L，餐后1h血糖≥10.0mmoL/L，餐后2h血糖≥8.5mmol/L，血糖值符合其中1 项即诊断GDM。排除标准：（1）合并有其他妊娠疾病的患者；（2）妊娠前已确定为糖尿病的患者；（3）糖尿病患者合并有心、脑、肝、肾、肺等慢性病者； （4）有精神病史的患者；（5）肿瘤或服用影响糖代谢药物的患者等。所有研究均签订知情同意书，并经各医院伦理委员会批准执行。

1.2 研究方法

1.2.1 指标收集

收集所有研究对象的身高、孕前体质量，计算孕前BMI（BMI=体质量/身高2）。所有研究对象均于清晨空腹8小时后采集静脉血2-3ml，室温静置30min后分析血清，采用化学发光法检测FINS；同时采用糖激酶法检测FPG。采用稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评估胰岛素抵抗。（计算公式：FINS×FPG/22.5）

1.2.2 DNA提取

空腹抽取孕妇静脉血样标本2ml，按照DNA 基因组试剂盒（北京全式金生物试剂有限公司，中国）说明书提取各血液样本DNA，并检测DNA 的纯度和浓度。A260 /A280比值在1.7-1.9为符合DNA 纯度要求。将DNA统计标记标本置于-80℃冰箱保存备用。

1.2.3 rs11558471位点多态性分析

应用Pr imer Pr emer 5.0设计引物，引物上游为5’-ACCAGCCAAAGAATGTGGTT-3’，下游为：5’-AATGTTGGCCTGCACATCTT-3’。引物由华大基因公司合成。PCR扩增体系总体积为25μl：按体系加入PC R Master Mix 5μl；2U Taq DNA聚合酶0.5μl；上、下游引物体积各0.5μl ；DNA模板1μl；去离子水加至25μl。反应体系为：94℃预变性5min，94℃变性5s，62℃退火30s，72℃延伸30s，循环35 次，最后72℃延伸10min。PCR 扩增产物采用3% 琼脂凝胶电泳技术进行检测。PCR 扩增产物酶切后进行SLC30A8基因位点rs11558471 A/G基因型及等位基因检测。PCR 产物酶切反应体系为20μl： PCR产物10μl； 10XNEBuffer4缓冲液2μl；100XBSA 为0.2μl；ExoI 0.5μl；去离子水7.5μl。基因分型的检测由华大生物科技有限公司完成。

1.3 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件对所测数据进行统计分析。其中计量资料采用平均值±标准差表示；组间比较采用t检验；计数资料采用率（%）表示。各组组间基因型分布及等位基因频率比较采用x2检验，并以Hardy-Weiberg定律检验样本遗传平衡。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组临床指标比较

GDM组孕妇的BMI、FPG、FINS及HOMA-IR水平均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组临床指标比较

2.2 rs11558471 A/G基因型与频率

SLC30A 8（rs11558471）基因型表现为AA、AG和GG。GDM组和对照组SLC30A8（rs11558471）位点三种基因型及A、G等位基因频率符合Hardy-Weiberg遗传平衡定律，具有群体代表性。GDM组SLC30A8基因位点rs11558471的AA基因型频率及A等位基因频率分别为26.85%和44.63%，明显高于对照组，差异具有统计学意义。见表2。

表2 两组SLC30A8基因位点rs11558471A/G基因型及等位基因频率的比较

3 讨 论

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是糖尿病的一种特殊类型，是妊娠期间发生或者首次发现的具有不同程度的OGTT异常。目前，GDM在我国的发病率为6.8%-10.4%，且呈逐年上升的趋势，远高于全球发病率[5]。目前有关GDM的发病机理尚不完全清楚，但研究显示遗传因素在的GDM的发病过程中起着至关重要的作用，而具有糖尿病家族史的孕期女性发生GDM的风险明显增加。不同地区GDM发病率因受环境、遗传背景等因素的影响而存在巨大差异[6,7]，逐步开展不同地区GDM的遗传易感性调查具有重要的临床意义。

SLC30A 8基因位于人类染色体8q24.11上，全长41.62KB，可在胰腺中特异性高表达。SLC30A8基因可编码含有369个氨基酸的锌离子转运蛋白-8（ZnT-8）是胰岛素成熟、储存和分泌过程中具有重要作用的蛋白[8]。ZnT-8位于胰岛素分泌颗粒膜中，能够促进锌离子从细胞质到胞内胰岛素囊泡中聚集，随后使胰岛素与锌离子结合，从而形成较为稳定的六聚体。当胰岛β细胞受到刺激时，六聚体从囊泡中分泌出去，从而介导胰岛素的成熟和分泌[9,10]。

本研究结果显示，G D M组的孕妇血清中BM I、FINS、FPG及HOM A-IR结果均高于对照组（P＜0.05）。SLC30A 8的多态性位点较多，常见的研究位点为rs11558471，rs1326634,rs7002176,rs1995222及rs17738231等。该研究中选取了与妊娠性糖尿病相关性最大的位点rs11558471进行测定和分析。实验结果显示，GDM组孕妇SLC30A8基因位点rs11558471（A/G）多态性AA、AG、GG基因型频率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05），同时DGM组孕妇的A等位基因频率明显高于对照组。这提示，携带SLC30A8基因rs11558471（A/G）多态性A等位基因可使孕妇发生GDM的风险增加。因此，加强孕妇SLC30A8基因rs11558471（A/G）突变的检测，对山东地区孕妇GDM 发病的诊断具有重要意义。

综上所述，山东地区孕妇SLC30A8基因rs11558471（A/G）突变与GDM的发病具有明显的关联性，因本研究纳入样本量相对较小，SLC30A8基因rs11558471（A/G）多态性与GDM发病风险的相关性，尚需更多大样本及随机对照研究结果证实。