常用藏药材丛菔质量标准提升

1.青海省藏医药研究院，青海 西宁 810006；2.金诃藏药股份有限公司，青海 西宁 810003

丛菔现行质量标准载于《中华人民共和国卫生部药品标准 藏药》第一册[5]和《青海省藏药炮制规范》2010年版[7]，质量控制项目仅限于性状和显微鉴别，由于藏医口耳相传的传统以及地域环境不同导致对丛菔药材的来源尚不明确，笔者在文献资料的基础上结合藏区各地对丛菔药材的使用情况，确定了丛菔的药材来源，为十字花科植物宽果丛菔Solms-laubachiapulcherrima(Maxim.) Bofsch.的干燥全草，并对其化学成分定性鉴别、水分和重金属控制及含量测定方法进行了详细研究，为更好地控制丛菔药材的质量提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 超声波清洗器(KQ-250型)；高效液相色谱仪(岛津LC-20AT)； METTLER AG204万分之一分析天平，METTLER AX205十万分之一分析天平(瑞士梅特勒)； HH-4恒温水浴锅(上海科学仪器厂)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；TAS-986原子吸收分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，GFH-986石墨炉电源，AFS-830原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司)。

1.2 试药 迪马C18色谱柱；β-谷甾醇对照品(批号：872-200204供含量测定用)；精氨酸对照品(批号：872-201304供含量测定用)；以上对照品购自中国药品生物制品鉴定所；双蒸馏水(自制)；乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。铅标准单元素溶液：标准值为1000μg·mL-1，证书编号为GBW08619；砷标准单元素溶液：标准值为1000μg·mL-1，证书编号为GBW08611；汞标准单元素溶液：标准值为1000μg·mL-1，证书编号为GBW08617；丛菔对照药材(溯源样品，采自青海贵南)：由青海藏医学院尕玛措尼教授鉴定为十字花科植物宽果丛菔Solms-laubachiapulcherrima(Maxim.) Bofsch.样品信息详见表1。

表1 丛菔药材收集情况

2 方法与结果

2.1 β-谷甾醇的TLC鉴别 取本品粉末2.0 g，加三氯甲烷30 mL，超声处理(功率300 W,频率40 khz)30 min，滤过，滤液浓缩至2 mL作为供试品溶液。另取丛菔对照药材2.0 g，同法制成对照药材溶液。再取β-谷甾醇对照品适量，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按TLC法试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮 (25∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，并在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光和紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点和荧光斑点(如图1和图2所示)。

2.2 检查

2.2.1 水分 取丛菔药材粉末(过3号筛)约2 g，精密称定，照水分测定法《中国药典》2015年版一部附录IXH第一法烘干法测定。每批平行测定2份，结果见表2。

2.2.1 重金属检测 随机抽取9批样本中3批原药材，按照《中国药典》2015年版一部附录Ⅸ B项下(铅、砷、汞)的测定方法进行测定，测定结果见表3。

2.3 浸出物测定 取丛菔药材粉末(过3号筛)约2～4 g，精密称定，以水为溶剂，照水溶性浸出物测定法热浸法测定，每批平行测定2份，测定结果见表2。

表2 丛菔药材水分及浸出物测定结果

表3 丛菔药材中重金属测定结果

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲液(pH=6)-乙腈(84∶16)为流动相；检测波长为360 nm，柱温30 ℃。理论板数按精氨酸峰计算应不低于2000。

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取精氨酸对照品适量，加蒸馏水制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得精氨酸贮备液；精密吸取1.0 mL贮备液于10 mL量瓶中，加入0.5 mol·L的碳酸氢钠溶液和1%DNFB乙腈溶液各1 mL，避光，于60 ℃水浴上反应30 min，取出，冷却，以0.05 mol·L磷酸盐缓冲溶液(pH=6.8)定容，即得20.0 μg·mL-1的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 取1 g苁菔药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL水，称定重量，超声30 min，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤，取2.0 mL续滤液于10 mL容量瓶中，加入0.5 mol·l-1碳酸氢钠溶液和1%DNFB乙腈溶液各1 mL，避光，于60℃水浴上反应30 min，取出，冷却，以磷酸盐缓冲液定容，即得供试品溶液。[8]

2.4.4 提取方法考察 对样品分别进行超声处理、回流提取，结果超声处理的效果最好，可消除对所有待测组分的干扰并且含量较高。结果见表4。

表4 提取方法学考察试验结果

2.4.5 测定波长的选择 取对照品溶液和供试品溶液分别在190～400 nm的波长内测吸光度，结果在360 nm处有最大吸收，故选此波长为测定波长。

2.4.6 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液3、6、9、12、15 μL注入液相色谱仪测定，按2. 1项下的色谱条件测定峰面积，以进样量为横坐标(X)，以峰面积的积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线。得精氨酸回归方程为Y=229766X-41832.50，r=0.9992。结果表明，在上述色谱条件下，精氨酸在0.0612～0.306 μg范围内呈良好的线性关系。结果见表5。

表5 线性关系实验结果(精氨酸)

2.4.7 精密度试验 精密吸取精氨酸对照品溶液10 μL，重复进样6次，测得精氨酸峰面积RSD为1.4%。表明仪器进样精密度良好。结果见表6。

表6 精密度试验结果

2.4.8 稳定性试验 精密吸取样品溶液10 μL，分别于2，6，8，10，12 h进样，测定精氨酸的含量，结果RSD为1.8%，即样品溶液在12 h内稳定。结果见表7。

表7 稳定性试验结果

2.4.9 重现性试验 取不同批次样品5份，按【含量测定】项下色谱条件测定，测定含量RSD为1.3%，表明该方法的重现性良好。结果见表8。

表8 重现性试验结果

2.4.10 回收率试验 取已知含量的样品6份，精密加入精氨酸对照品溶液，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算得平均回收率为97.0%，RSD为0.9%。实验结果见表9。

表9 加样回收实验结果

2.4 样品测定 取1g样品粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL水，称定重量，超声30 min，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤，取2.0 mL续滤液于10 mL容量瓶中，加入0.5mol·l-1碳酸氢钠溶液和1%DNFB乙腈溶液各1 mL，避光，于60 ℃水浴上反应30 min，取出，冷却，以磷酸盐缓冲液定容，即得。吸取10 μL进样,测定，结果3批样品(2个平行样)中精氨酸平均含量为0.314%。结果见表10。

表10 样品中精氨酸的含量

3 讨论

3.1 薄层色谱 研究过程中分别对丛菔所含不同成分(亚油酸、亚麻酸)的进行了薄层色谱分析，但始终效果不理想，只有β-谷甾醇的薄层色谱图较为清晰，易于辨认，效果较好，通过对展开系统的筛选，分别以三氯甲烷-丙酮 (25∶1)、乙酸乙酯-丙酮 (20∶6) 、三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮 (12∶7∶3)等展开系统进行试验，发现以三氯甲烷-丙酮 (25∶1)展开后效果最佳，Rf值符合要求；分别用10%硫酸乙醇溶液和香草醛硫酸溶液进行显色实验，发现10%硫酸乙醇溶液效果较好，斑点清晰，在日光下及紫外灯下均可见清晰斑点，说明本方法专属性强、操作简便，方法稳定。

3.2 水分 按中国药典2010年版一部附录IXH第一法烘干法测定9批样品水分，根据测定结果显示，暂定水分不得过12.0%。

3.3 重金属 3批样品检测结果显示重金属含量非常小,未超限度。由于药材中的重金属与产地的自然生态环境土壤、水分及空气中的重金属含量有直接的关系，丛菔主要生长在海拔3500～4500 m的高山砂质土或岩石隙缝中，高海拔，重金属无污染，控制药材重金属意义不大，故可暂列入标准正文。

3.4 浸出物 本研究依据药典中关于浸出物的方法，分别对药材进行了冷浸法和热浸法的测定试验，结果表明热浸法优于冷浸法，且乙醇和水为溶剂的热浸法比较显示，以水为溶剂效果更好，因此选用以水为溶剂的热浸法为浸出物测定方法。

3.5 含量测定 关于丛菔药材的定量测定方面研究资料很少，巴桑旺姆等[8]曾用HPLC法测定丛菔药材的精氨酸含量，笔者在上述方法的基础上增加了样品量，并对样品制备方法和流动相进行了调整，使得精氨酸的分离度更好，准确度更高。鉴于考虑丛菔药材中精氨酸的含量有所差异且9批样品所得平均值后，故规定本品按干燥品计算，含精氨酸(C6H14N4O2)不得少于0.20%。