动态生化组织分析在人癌组织发展中的应用

李贤，苏秀兰

（内蒙古医科大学附属医院 临床医学研究中心，内蒙古 呼和浩特 010050）

0 引言

越来越多的证据表明，循环肿瘤细胞上的L-选择素配体通过与白细胞上的L-选择素结合而促进转移。常用的检测组织中L-选择素配体的方法，如免疫染色，是在静态、无血流条件下进行的。目前，免疫染色是检测组织中表达的选择素配体的标准方法，但这种方法不能确定选择素配体是否具有功能。也就是说，在平衡条件下用静态(无力)免疫染色法检测所称的选择素配体，并不要求反应抗原在非平衡条件下能够介导细胞与血流动力学的结合。由于缺乏足够的检测方法，功能选择素配体作为生物标记物的相关性目前尚不清楚[1]。针对这些不足，我们提出了一种新的组织检测方法，即动态生化组织分析(Dynamic biochemical tissue analysis，DBTA)，在微流控制装置中，可以原位检测功能选择素配体[2]。动态生化组织分析可以检测在乳房、结直肠、肝脏、肺、卵巢、胰腺、前列腺和胃癌组织上表达的功能选择素配体[1]。

1 人癌组织

在转移过程中，循环肿瘤细胞(CTCS)上表达的唾液酸糖基化葡聚糖(CTCS)介导了与血液中造血细胞表达的选择素分子的粘附。选择素介导的细胞粘附(由活化的内皮细胞、活化的血小板和白细胞表达)与肿瘤细胞表达的选择性选择素配体结合可能与转移有关[3]。因此，对人体组织中表达的选择素配体进行表征的方法可以作为一种有价值的检测方法。检测在人体组织上表达的功能选择素配体的创新方法，该方法采用动态方法，允许对探针与目标分子之间的键施加力进行控制。动态生化组织分析是指在血流动力学条件下，用L-选择素包裹的微球对功能选择素配体进行原位检测。使用选择素包被探针的DBTA，能够检测在原发灶和转移部位的多种肿瘤组织中表达的功能选择素配体[4]。

然而，这种分析不能测定功能性的L-选择素配体，特别是那些在剪切流动条件下促进粘附的配体。因此，用DBTA探针可以检测L-选择素配体活性的人结肠组织。选择素/选择素配体相互作用参与介导循环肿瘤细胞在转移过程中对远处部位的粘附。并证明了静态生化组织分析(SBTA)在检测组织上表达的功能性选择素配体时的局限性。

2 结肠癌组织

E-，P-，L-选择素(分别由活化的血管内皮细胞、活化的血小板和白细胞表达)与它们各自的配体(由癌细胞表达)之间的粘附作用促进了转移。例如，与结肠癌模型中野生型对照相比，敲除P-选择素小鼠表现出明显较低的转移速率，通过肝素治疗的选择素抑制降低了小鼠的转移[4]。此外，人头颈部癌细胞还能在低淋巴FOW条件下表达，与L-选择素结合L-选择素配体相关[5]。病理组织中的L-选择素配体的原位检测传统上是通过免疫染色等组织学技术，如免疫组织化学(IHC)或免疫荧光技术来实现的。因此，应用动态生物化学组织技术(DBTA)分析原位表达功能L-选择素配体，这种技术弥补传统组织分析方法检测配体的不足[6]。为了确定DBTA是否可用于检测在原发肿瘤、转移瘤、发炎组织和增生组织中表达的功能性L-选择素配体，选用51例结肠组织进行了功能性L-选择素配体检测[7]。结果证实DBTA产生了检测功能L-选择素配体所需的条件，这些配体与结肠癌转移过程中的循环肿瘤细胞（CTC）转运有关[8]。非癌组织和癌组织在内的多种类型结肠组织的连续切片可以定量评价DBTA法的敏感性和重复性。DBTA不仅可重复检测病变组织中的功能性L-选择素配体，如癌变或发炎的组织，还揭示了结肠癌组织中功能L-选择素配体的异质分布[6]。

3 应用前景和展望

随着标准的组织分析方法，如免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交(FISH)，DBTA可能被用作癌症的诊断或预后工具，因为在这种癌症中，高表达的功能选择素配体与转移和不良的患者预后有关[9]。虽然小鼠研究表明，L-选择素或L-选择素配体的表达降低，减少了肿瘤与白细胞的相互作用，减少了肿瘤的转移[10]，但L-选择素/配体介导的人类转移的机制仍不清楚。使用动态生化组织分析能够检测在主要和转移部位的多种癌症类型的组织上表达的功能选择素配体。因此，功能选择素配体在人组织上的特征不再是难以理解的，这种方法可以被纳入新的复用组织试验中。更广泛地说，功能粘附分子的表征（例如，选择素配体、整合素等）在人体组织上表达可作为有价值的诊断和预后试验。