2015—2017年我国部分地区猪乙型脑炎血清抗体监测

吴文婷，喻红艳，郭雨丝，李 慧，胡星星，宋文博，汤细彪

（武汉科前生物股份有限公司，湖北武汉 430070）

流行性乙型脑炎，又称日本乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE），简称乙脑，是乙型脑炎病毒（JEV）引起的一种由三带喙库蚊传播的人兽共患病。JEV属黄病毒科、黄病毒属，可感染多种动物，其中以马和猪为主，感染后的动物成为隐性传染源[1-2]。

猪是JEV的重要储存宿主和扩增宿主，感染后临床表现为，公猪发生睾丸炎，妊娠母猪出现流产，产死胎或木乃伊胎，仔猪呈现脑炎等[3-4]。JEV不仅能在蚊体内繁殖或越冬，还可经卵垂直传播，并通过“蚊—猪—蚊—人”循环传播[5]。据世界卫生组织（WHO）估计，全球每年的乙型脑炎感染人数达5万人[6]。我国是全球JE发病人数最多的国家，据报道，每年有2万多JEV感染病例，病死率在10%以上[7]。因此，控制JE不仅对养猪业至关重要，而且对人类健康也具有重要的公共卫生学意义。

JEV的血清诊断方法有ELISA、血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验、胶体金免疫层析法、中和试验等[8]。中和试验是国际公认的JEV血清学检测金标准，但操作复杂，而ELISA方法操作方便、灵敏性高，在JEV抗体临床检测中被广泛应用。本研究采用ELISA方法，对2015—2017年送检的血清样品进行JEV血清抗体检测，评估我国猪场不同季节、不同地区和不同猪群的抗体水平，以期对JEV的诊断、预防和控制提供参考。

1 材料

1.1 血清样品

本研究共收集来自华东、华北、华中、华南、西南和西北6个地区529家猪场的10 991份血清：2015年3 077份，来自147家猪场；2016年2 689份，来自145家猪场；2017年5 225份，来自237家猪场。其中，2 379份血清样品有详细的猪群日龄阶段信息，包括公猪、经产母猪、后备母猪和商品猪4个阶段。血清样品保存于-20 ℃。

1.2 试剂及仪器

猪乙型脑炎ELISA试剂盒：购自武汉科前生物股份有限公司；离心机：购自德国SIGMA公司，型号为5415R；酶标仪：Thermo公司产品，型号为MULTISKAN MK3；恒温箱：购自北京东联哈尔仪器制造有限公司，型号为SHI9270B。

2 方法

按照试剂盒说明书进行操作。试验成立的条件是，阳性对照孔平均OD630nm≥0.8，阴性对照孔平均OD630nm＜0.3。S为样品OD630nm，P为阳性对照OD630nm平均值，计算样品S/P。若样品S/P≥0.21，判为抗体阳性，S/P＜0.21，判为抗体阴性。

3 结果与分析

检测结果显示：我国猪群JE免疫水平整体较好，抗体总阳性率为88.39%（9 715/10 991），2015—2017年的抗体阳性率分别为89.86%（2 765/3 077）、83.79%（2 253/2 689）和89.89%（4 697/5 225）。对检测结果按不同季节、不同区域和不同猪群进行统计分析，结果如下。

3.1 不同季节

按春季（3—5月）、夏季（6—8月）、秋季（9—11月）和冬季（12月—次年2月）进行JEV抗体阳性率统计。结果显示：春夏季节，JEV抗体阳性率呈上升趋势，其中2017年春季抗体阳性率相对2015年有显著性增长（χ2=5.31，df=1，CI=95%），夏季抗体阳性率虽逐年增长，但经卡方检验，增长不显著；秋冬季节，JEV抗体阳性率呈现先下降、后上升趋势，且总体比春夏季节要高（表1）。

表1 2015—2017年不同季节JEV抗体检测结果统计

3.2 不同地区

对不同地区猪场送检样品的JEV抗体检测结果进行统计发现，各地区的JEV抗体阳性率在80.09%～93.57%之间（表2），其中华东地区JEV抗体阳性率最高，为93.57%（1 135/1 213），西南地区最低，为80.09%（185/231），不同地区间的抗体阳性率差异不显著（χ2=1.34，df=1，CI=95%）。

表2 2015—2017年不同地区JEV抗体检测结果统计

3.3 不同猪群

对有日龄阶段信息的2 379份血清样品进行JEV抗体检测结果分析，由结果（表3）可知：送检血清中经产母猪抗体阳性率最高，达到了95.61%（1 545/1 616），其次是公猪和后备母猪，血清抗体阳性率分别为92.11%（327/355）和88.16%（283/321），而商品猪血清的JEV抗体阳性率最低，仅为41.38%（36/87）。

表3 2015—2017年不同猪群猪乙型脑炎抗体检测结果统计

4 讨论

JE是季节性传染病，主要经蚊虫传播，而夏秋季是蚊虫大量滋生的季节，也是JE的高发季节。从2015—2017年不同季节的JEV血清学调查发现，从春季到冬季，JEV抗体阳性率整体呈上升趋势，在秋季有较大幅度的提高，到冬季抗体水平达到最高，这可能和大部分猪场9月份加强免疫一次JE疫苗有关。这一结果与喻红艳等[9]、李晓华等[10]报道的结果基本相符。黄育浩等[11]对2009—2011年广东东莞市养猪场4 282 份血清进行检测，发现JE总抗体阳性率为56.58% （2 217/4 282），比本研究结果低，但其中的母猪抗体阳性率85.93%（1 081/1 258）和育肥猪抗体阳性率34.08%（743/2 180）与本研究结果基本相符，因此总阳性率的高低可能与样品组成有关。

本研究送检的血清均采集自疫苗免疫猪场。JE为季节性疾病，一般在每年的3—4月、9—10月进行接种免疫，免疫后抗体水平会上升， 2个月后达到一个较高的水平。本研究的抗体检测结果与这一规律基本相符。2016年秋冬两季抗体水平低于春夏季节，造成这一结果原因可能是9—10月份部分猪场未免疫JE疫苗有关。

不同地区的抗体检测统计结果显示，华中地区送检量最大，样品数量达8 421份，这可能与本实验室所处地理位置有关。华东地区JEV抗体阳性率最高（93.57%，1 135/1 213），这可能与检测样本量小有一定的关系。2017年送检的猪场数量和血清数量均比2015、2016年的多，说明养殖场对JEV抗体监测的重视程度在逐年增加。

JEV感染妊娠母猪后，可造成妊娠母猪流产，产死胎、木乃伊胎或弱仔，公猪感染后睾丸单侧或双侧肿大，逐渐萎缩变硬，造成精液品质不良，种用性能丧失[11-12]，因此种猪的JE免疫至关重要。不同猪群的抗体统计结果显示，经产母猪和公猪抗体阳性率较高，说明种猪群JEV疫苗免疫效果良好。然而商品猪JEV抗体阳性率偏低，仅为41.38%（36/87），说明商品猪免疫率不高，存在较高的感染风险。

5 结论

本研究对2015—2017年我国华东、华北、华中、华南、西南和西北6个地区529家猪场进行JEV抗体监测，证明我国猪群JE疫苗免疫水平整体情况较好，每年的JEV抗体阳性率基本稳定。但不同季节、不同地区和不同猪群的JEV抗体阳性率有一定的差异，如春季抗体阳性率偏低，商品猪群抗体阳性率不及其他阶段猪群的一半，还有部分猪场免疫效果较差，因此仍需要加强JE疫苗免疫和监测，将JE纳入常规化免疫程序。