苁蓉舒痉颗粒剂的薄层色谱鉴别

刘秀棉 ，洪丽婷 ，陈 丹 ，黄庆德 ，蔡 晶

（1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学中西医结合学院，福建 福州 350122）

苁蓉舒痉颗粒复方由酒苁蓉、丹参、赤芍等味药组成，具有提高脑内神经营养因子表达，减轻氧化损伤，降低凋亡，改善神经递质平衡的作用，临床可用于改善帕金森病的肌强直等。其中酒苁蓉中含有的苯乙醇苷类［1-2］，丹参中含有的丹参酮类［3］和丹酚酸 B［4］，芍药中含有的芍药苷［5］分别为各味药抗帕金森病的主要活性成分。因此，实验分别选择酒苁蓉中的松果菊苷、毛蕊花糖苷，丹参中的丹参酮ⅡA和丹酚酸B，芍药中的芍药苷作为其指标性鉴别成分，研究建立苁蓉舒痉颗粒剂薄层色谱鉴别法，分别对组成颗粒剂的处方药味酒苁蓉、丹参、赤芍三味药进行薄层色谱鉴别，排除阴性干扰，由此判断颗粒剂的真伪，实现整体质量控制和有效监管。

1 仪器与试药

1.1 仪器 AR2140万分之一分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；XS205十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；Yoko-PN电动喷雾器（武汉药科新技术开发有限公司）；ZF1-I型多功能紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。

1.2 试药 苁蓉舒痉颗粒（自制，生产批号：2018 0422、20180423、20180424，以下简称颗粒 A、颗粒B、颗粒 C）；松果菊苷对照品（HPLC≥98%，批号：111670-201706）、毛蕊花糖苷对照品（HPLC≥98%，批号：111530-201713）、芍药苷对照品（HPLC≥98%，批号：110736-201438）、丹参对照药材（批号：1209 23-201615）均购自中国食品药品检定研究院；丹参酮ⅡA对照品（批号：D17091802）、丹酚酸B对照品（批号：D18011007）购自南京狄尔格医药科技有限公司；薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；水为超纯水；三氯甲烷、甲酸等其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 苁蓉舒痉颗粒剂中酒苁蓉的薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 称取苁蓉舒痉颗粒1 g，加甲醇20 mL，超声提取15 min，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇2 mL使溶解，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备 分别取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，各加甲醇分别制成每1 mL含1 mg松果菊苷的溶液作为松果菊苷对照品溶液，及每1 mL含1 mg毛蕊花糖苷的溶液作为毛蕊花糖苷对照品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 取缺酒苁蓉的苁蓉舒痉颗粒阴性样品，按颗粒剂及供试品溶液制备同法操作，制备成缺肉苁蓉的阴性对照溶液。

2.1.4 薄层色谱分析 分别吸取松果菊苷对照品溶液、毛蕊花糖苷对照品溶液、三批供试品溶液、阴性对照品溶液各2 μL，点于同一块聚酰胺薄层板上，以甲醇-醋酸-水（2∶1∶7）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。实验结果表明：供试品色谱中，在与对照物质相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。提示苁蓉舒痉颗粒含有肉苁蓉主成分松果菊苷、毛蕊花糖苷，组方含有肉苁蓉。结果见图1。

2.2 苁蓉舒痉颗粒剂中丹参的薄层色谱鉴别

图1 苁蓉舒痉颗粒中酒苁蓉薄层色谱鉴别图

2.2.1 供试品溶液的制备 称取苁蓉舒痉颗粒1 g，加乙醇5 mL，超声处理15 min，离心，取上清液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 取丹参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品、丹酚酸B对照品适量，加乙醇制成每1 mL分别含0.5 mg和1.5 mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺丹参的苁蓉舒痉颗粒阴性样品，按颗粒剂及供试品溶液制备同法操作，制备成缺丹参的阴性对照溶液。

2.2.4 薄层色谱分析 分别吸取对照药材溶液、丹参酮ⅡA与丹酚酸B混合对照品溶液、三批供试品溶液各20 μL，点于同一块硅胶G薄层板上，使成条状，整个展开过程以氨水进行氨熏处理。先以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4）为展开剂，展开，展至约4 cm，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，展至约8 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在紫外光灯（302 nm）下检视。实验结果表明：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。提示苁蓉舒痉颗粒含有丹参主成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B，组方含有丹参。结果见图2。2.3 苁蓉舒痉颗粒剂中赤芍的薄层色谱鉴别

2.3.1 供试品溶液的制备 称取苁蓉舒痉颗粒0.5 g，加 95%乙醇 10 mL，振摇 5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，即得。

2.3.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3 阴性对照溶液的制备 取缺赤芍的苁蓉舒痉颗粒阴性样品，按颗粒剂及供试品溶液制备同法操作，制备成缺赤芍的阴性对照溶液。

图2 苁蓉舒痉颗粒中丹参薄层色谱鉴别图

2.3.4 薄层色谱分析 分别吸取对照品溶液、供试品溶液各4 μL，点于同一块硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。实验结果表明：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。提示苁蓉舒痉颗粒含有赤芍主成分芍药苷，组方含有赤芍。结果见图3。

图3 苁蓉舒痉颗粒中赤芍薄层色谱鉴别图

3 讨 论

3.1 薄层色谱法是目前中药鉴别最常用的方法，但是，由于薄层层析是一种“敞开”的分离系统，因此，在实际操作中，仪器、环境、温度、湿度、样品预处理等诸多因素的相互制约，往往会产生不理想的结果。实验结果表明：在使用聚酰胺薄膜对苁蓉舒痉颗粒酒苁蓉TLC展开分离时，可在展开剂中加入酸抑制剂，克服斑点拖尾，避免日光直射斑点导致其分解。

3.2 苁蓉舒痉颗粒丹参薄层鉴别中，为了让丹酚酸B显色更清晰，增加了氨熏及喷雾显色；丹参显色剂的选择当中，曾比较了2%三氯化铁乙醇溶液、5%三氯化铁乙醇溶液及10%硫酸乙醇溶液，最后，根据显色效果，选择10%硫酸乙醇溶液为显色剂；同时，实验曾比较了圆形点样与条状点样的分离效果，发现条状点样时样品分离效果更好，斑点更集中，在有效的展距里，能分离出更多的组分。

3.3 建立的苁蓉舒痉颗粒薄层色谱鉴别法结果提示：酒苁蓉、丹参、赤芍三味药的TLC色谱斑点清晰，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，方法重复性、稳定性良好。苁蓉舒痉颗粒为中药复方制剂，组成较为复杂，因此酒苁蓉及赤芍的薄层鉴别实验，还可考虑增加对应的对照药材，从而更全面地对其进行质量控制。