中药复方多糖对鸡传染性法氏囊疫苗的免疫增强作用

方磊涵，王 留，郭全海,王中华

(商丘职业技术学院，河南 商丘 476100)

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，简称IBD)是由法氏囊病毒(IBDV)引起鸡的免疫机能障碍，导致鸡的免疫力降低的一种急性、高度接触性传染病，一旦发病可导致鸡的死亡率高达80%以上，由于该病的病原血清型和变异株较多，给疫苗免疫带来了很大难度，造成养鸡业严重损失[1]，[2]2-3.近年来，研究发现许多中草药都具有免疫增强作用，主要通过促进免疫器官发育来实现[3]812-814.随着中药的广泛研究，中药不仅可以增强机体细胞免疫及体液免疫，而且还具有免疫抑制功能[4]156.大多数中草药都含有多糖的活性成分，在激活免疫细胞，增强免疫功能等方面表现出了很好的作用，并成为了中药免疫增强剂的典型代表.

本试验利用中药多糖成分的免疫增强作用，与IBD 疫苗配合使用，来探讨中药复方多糖和两者混合使用对鸡传染性法氏囊疫苗免疫雏鸡血清抗体效价及外周血淋巴细胞增殖变化的影响，旨在筛选出一种高效中草药免疫增强剂，以提高鸡的免疫力，同时为治疗鸡法氏囊病的药理作用提供依据.

1 材料与方法

1.1 试验药物

中药复方多糖(CHCP) 即选用黄芪、党参、山楂、丹参、白术、茯苓、淫羊藿、补骨脂、生地、熟地、马齿苋、甘草12味具有补气生津、活血化瘀、健脾和胃、温肾壮阳、扶正祛邪的中药(购于商丘市天伦大药房)，由商丘华康动物药业有限公司提取其中的多糖而成，多糖含量为69.80%.

黄芪多糖(APS)： 由商丘市华康动物药业有限公司提供，含量为75%.

IBD活疫苗(B87株)：购自商丘市动物疫病防控中心，青岛易邦生物有限公司生产.

IBD标准血清、抗原：标准抗原(批号：2013008)、阴性血清(批号：2013020)和阳性血清(批号：2013032)，由中国兽医药品监察所生产，阳性血清AGP效价1∶128.

1.2 试验动物

选择150羽1日龄罗曼蛋公鸡，饲养至10日龄(母源抗体效价平均为1.0±0.0 Log2)选取120羽随机分为4组，每组30只，14日龄和28日龄分别全部用1羽份的法氏囊疫苗点眼滴鼻，每次免疫的同时，第1组在基础日粮中添加1%的中药复方多糖，第2组在基础日粮中添加1%的黄芪多糖，连续3 d，第3组为免疫不用药疫苗对照组，第4组为不免疫不用药空白对照组(见表1).

表1 试验鸡的分组及处理

1.3 检测指标

首免后第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)、35(D35)日，每组随机抽取6只鸡，翼下静脉采血0.3 mL，分离血清，用琼脂扩散法(AGP)测定法氏囊特异性抗体滴度[5]127-128.首免后第7(D7)、21(D21)、35(D35)日，每组抽取5只进行心脏采血，并用MTT法对外周血淋巴细胞增殖转化率进行测定[6]23-24.

1.4 数据统计

用SPSS 15.0软件进行Duncan’s差异显著性分析.

2 结果与分析

2.1 血清抗体效价的变化

由表2可见，在D7，各用药组AGP效价明显高于疫苗对照组，但差异不显著(P>0.05)；在D14，中药复方多糖AGP效价显著高于疫苗对照组(P<0.05)；在D 21和D28，中药复方多糖组AGP抗体效价显著高于黄芪多糖组和疫苗对照组(P<0.05)；在D35中药复方多糖组AGP效价显著高于疫苗对照组(P<0.05).

表2 各组抗体效价的动态变化(Log2)

2.2 外周血淋巴细胞增殖变化

由表3可见，各组OD570值的变化，首次免疫后第7 d和21 d，中药复方多糖组OD570值显著高于黄芪多糖组，后者显著高于疫苗对照组(P<0.05)；首次免疫后第35 d，各用药组的OD570显著高于疫苗对照组(P<0.05)；与空白对照组相比，试验各组OD570均显著提高.

表3 各组淋巴细胞增殖的变化

3 讨论

3.1 中药复方多糖对雏鸡体内抗体水平的影响

免疫增强剂具有调节机体免疫功能、提高机体免疫应答反应的作用，在治疗和预防传染性疾病方面具有非常重要的作用[7]102-103.而抗体效价作为评价机体免疫状态的主要指标之一，在预防病原入侵和消灭病原体等方面起着重要作用，也是鸡免疫后反映体液免疫功能的重要指标[8]57.体液免疫主要是由T细胞辅助的B细胞产生的抗体，是机体抵抗疫病的一个重要因素.抗体是由B细胞分泌产生的，而鸡法氏囊又是B细胞发育成熟的主要场所，其抗体的形成在抵御和消除病原体等方面具有非常重要的作用，因此抗体水平的高低直接反映了机体免疫应答水平的高低[9]50-52.张瑞婷[10]研究表明，用绞股蓝微粉发酵液以1%、0.5%、0.25%的量添加在鸡的日粮中，均可显著提高鸡新城疫和法氏囊抗体滴度(P<0.01或P<0.05)，并延长抗体的有效存活时间.王海龙[11]采用不同剂量的玉屏风散拌入鸡的饲料中，于21、28、35、42、49日龄对免疫后的鸡进行法氏囊病毒抗体测定，结果表明，玉屏散显著提高鸡血清中的IBDV抗体水平，以1%和0.75%的量添加效果最好.

本试验利用CHCP的免疫增强作用，与IBD 疫苗配合使用，测定法氏囊特异性抗体效价，结果显示，中药复方多糖能显著提高雏鸡免疫法氏囊疫苗后的抗体水平，效果优于黄芪多糖组和疫苗对照组.胡元亮[12]3-5、张国祖[13]27-30的研究也得到了类似的结果.

3.2 中药复方多糖对雏鸡外周血淋巴细胞增殖变化的影响

外周血淋巴细胞的增殖水平能够反映机体的细胞免疫.近年来，免疫激发型中药对雏鸡外周血淋巴细胞增殖变化影响方面有不少的报道，高雪丽等[14]907-909IBD疫苗免疫雏鸡研究中发现，使用免疫增强剂“禽福、亿妙灵”，均不同程度地提高了外周血液的细胞免疫和体液免疫应答水平，攻毒后疫苗保护率达到 80%以上，可见“禽福、亿妙灵”起到提高疫苗的免疫活性，提高血清抗体水平的作用，从而有效抵抗病毒的攻击.郭振环等[15]1015-1019按一定规律将硫酸化黄芪多糖、硫酸化淫羊藿多糖、硫酸化香菇多糖组成 4个复方 sPSP 1、sPSP 2、sPSP 3 和 sPSP 4，用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定淋巴细胞增殖情况，结果表明，4个复方可以单独或协同 PHA、LPS显著刺激鸡脾淋巴细胞增殖、协同 ConA显著刺激外周血淋巴细胞，以sPSP1、sPSP 2 的作用最强.

本试验用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖，中药复方多糖能显著提高雏鸡免疫法氏囊苗后的淋巴细胞增殖，效果优于黄芪多糖和疫苗对照组.这表明，中药复方多糖具有很好的免疫增强作用.

4 结论

在鸡的日粮中添加中药多糖，能显著提高鸡免疫法氏囊疫苗后的抗体水平和淋巴细胞增殖，在增强免疫功能方面表现出了很好的作用，其效果明显好于黄芪多糖，在临床应用上中药复方多糖效果也要好于单味多糖的效果.因此，中药复方多糖可作为免疫增强剂广泛应用于家禽的生产上，具有很好的研究价值与应用前景.