新疆南疆地区某规模奶牛场牛病毒性腹泻抗原检测

朱广艺，王哲红，赵玉宾，张迎春，宋健颖，胡建军

（1. 塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300；

2. 新疆生产建设兵团第一师畜牧兽医工作站，新疆阿拉尔 843300）

牛病毒性腹泻（bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的牛传染性疾病，以发热、消化道黏膜糜烂和溃疡、腹泻等特征为主，同时也存在免疫耐受与持续感染、免疫抑制，以及母牛配种延长、不孕、流产、产死胎或畸形胎等，不同品种、性别、年龄的牛都对其易感，其中幼龄牛最易感[1]。病牛和带毒牛是本病的主要传染源。BVDV 还会与其他细菌或病毒一起对牛造成混合感染，严重危害养牛业[2]。

随着新疆奶牛业的发展，新疆地区规模牛场目前也有该病的报道。多位学者在新疆不同地区检测出不同程度的BVDV 抗原/抗体阳性率，证实在新疆南北疆地区牛场存在BVDV 感染[3-8]。本研究结合王青青[9]对新疆南疆部分规模奶牛场BVDV 血清流行病学调查，对该地区某规模化养牛场开展了BVDV 血清学检测，以期为新疆规模牛场的BVD 防控、净化提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验样品 2018 年12 月至2019 年3 月，对新疆南疆地区某规模化奶牛场，按照“全群普查”的抽样策略，按栏圈进行分批采样，一次性采集栏圈内所有奶牛血样，共采集血清样本2 358 份，其中成年牛2 228 份、犊牛130 份；对在BVDV 检测期间当日出生的犊牛采集耳组织样品，共35 份；对第1 次BVDV 检测为抗原阳性的奶牛，间隔21 d后进行第2 次采样。所采样本资料完善，免疫背景清楚，未免疫BVD 疫苗。

1.1.2 主要试剂 BVDV 抗原检测试剂盒（敏感性、特异性均为99.9%）、BVDV抗原快速检测卡（敏感性、特异性均为99.9%）：均购自IDEXX 公司。

1.1.3 仪器设备 单道微量移液器：Finnpipette F3，Thermo 科技有限公司；多孔道微量移液器：Research plus，Eppendorf 科技有限公司；37 ℃培养箱：GSP-9080MBE，上海博讯有限公司；多功能全波长96 孔酶标仪：xMarkTM，美国Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 抗原ELISA 检测 对牛血清样品，参照BVDV 抗原检测试剂盒说明书进行ELISA 检测；对新生犊牛耳组织样品，参照BVDV 抗原快速检测卡说明书进行检测。

1.2.2 结果判定 BVDV 抗原ELISA 结果判定：被检样品OD 值-阴性对照OD 平均值≤0.300，判为抗原阴性；＞0.300，判为抗原阳性。BVDV抗原快速检测卡结果判定：被检样品检测线的红色强于背景，判为抗原阳性；与背景相同或弱于背景，判为抗原阴性。

1.2.3 数据分析 对所有检测数据，用 Excel 进行汇总分析。

2 结果

2.1 血清样品检测

从该场2 358 份血清样品中，检测出BVDV抗原阳性血清样品9 份（成年牛7 份、犊牛2 份），抗原阳性率为0.38%（9/2 358）。

2.2 耳组织样品检测

对35 份新生犊牛耳组织样品，经BVDV 抗原快速检测卡检测均为阴性。

2.3 持续感染牛鉴定

对9 份BVDV 抗原阳性血清样品对应的牛实施隔离，间隔21 d 后，第2 次采血进行BVDV抗原ELISA 检测，结果发现有1 份犊牛血清为BVDV 抗原阳性。

2.4 阳性犊牛追溯检测

对2头BVDV抗原检测阳性犊牛的母牛采血，进行BVDV 抗原检测，结果均为阴性。

3 讨论

BVDV 呈世界性分布，尤其在养牛业发达的地区，流行情况更加严重，严重危害畜牧业健康发展。流行病学调查表明，国内大多数省份牛群中普遍存在BVDV 感染[10]。

BVDV 感染存在暂时性感染和持续性感染两种形式。暂时性感染，是指健康牛被BVDV 感染后，短时间内出现腹泻等临床症状，但随着BVDV 的去除，这些症状或体征会很快随之消失。暂时性感染牛比较常见，发病率高，致死率低，大多数4 岁龄以下牛的血清中都含有BVDV 抗体。持续性感染（permanent infection，PI），即在怀孕40～120 d 内，BVDV 穿透透明带，通过胎盘感染胎儿，存活的胎儿出生后，便成为持续性感染牛。PI 牛生长缓慢，多有先天缺陷，终生散发大量病毒，并产生繁殖障碍，难以受孕或发生习惯性流产，最终死亡。

BVDV 可在母牛子宫内感染胎儿，导致胎儿免疫耐受，出生后成为PI 牛。PI 牛一生中会散播大量的BVDV 颗粒，是易感动物感染病毒的主要来源。欧洲一些国家或地区通过淘汰PI 牛后进行全群免疫，有效控制了BVD[11-12]。因此，识别和消除PI 牛及实施生物安全措施对于控制和预防BVD 至关重要[13]。

采用血清流行病学调查方法，可以大范围、快速地进行规模奶牛场BVDV 检测。本研究发现，该场BVDV 血清抗原阳性率为0.38%，且证实1 头犊牛为PI 牛，说明该场存在一定的和长时期的BVDV 流行，需要加强防控，建议采取以下措施：

（1）定期对全场奶牛进行BVDV 抗原ELISA检测，对阳性牛及时隔离，间隔21 d 后进行第2次采血复检，如果仍为阳性，则将其淘汰，同时跟踪检测其母代牛；（2）对当日新生犊牛，采集耳组织，应用BVDV 抗原快速检测卡进行检测，如为阳性，则隔离、淘汰；（3）对BVDV 抗原阴性牛群及时进行疫苗免疫接种。

4 结论

检测发现，该规模化牛场的BVDV 流行率虽然不高，仅为0.38%，但存在PI 牛，表明该场存在一定程度和较长时期的BVDV 流行，建议通过“检测+淘汰+免疫”的综合防控措施，开展牛场的BVDV 净化工作，逐步根除BVDV。