快速石蜡切片技术在病理检验中的临床应用分析

吴玉戈

临床需实施外科手术治疗的患者， 术中取病灶组织进行病理检验， 在手术方案选择、预后改善等方面发挥重要作用［1］。以往， 临床多采用加温石蜡切片、冰冻切片等方式进行病理检验， 但也存在不足之处， 如耗时长等。有研究考虑术中病理检验时间紧迫、组织样本小特点， 提出实施快速石蜡切片技术， 认为其操作简单， 且出片时间短， 染色质量佳，诊断效果确切［2］。本研究为证实这一点， 在124 例手术患者术中病理检验时分别实施常规石蜡切片技术、快速石蜡切片技术。此外， 考虑到不同疾病发生、发展、诊断、病理特点、手术转归等存在差异， 为故为细化分析， 以乳腺肿瘤手术患者为纳入对象， 现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料

收集2017 年6 月～2018 年6 月本院124 例女性乳腺肿瘤术中切取活检标本， 所有患者术前均行针吸细胞学检查怀疑乳腺肿瘤， 且资料完整。患者年龄25～72 岁，平均年龄(51.02±7.22)岁；切片大小均为1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm。

1. 2 仪器与试剂

仪器包括江苏常州中威电子仪器厂生产的BMJ-Ⅲ型超声波快速组织处理仪及程序化控制系统、德国SLEE 全自动旋转式石蜡切片机CUT6062、梵缇斯密闭恒温全自动染片机［苏宁食药监械(准)字2013 第1410027 号］等。试剂包括北京诺博莱德科技有限公司提供的100 ml/L AF 液(950 ml/L 酒精9 份， 400 ml/L 甲醛1 份)、石蜡(熔点58～60℃)、丙酮等。

1. 3 检验方法

实施快速石蜡切片技术、常规石蜡切片技术行病理检验。先实施快速石蜡切片技术， 具体方法为：超声波快速处理仪开机预热， 直至72℃。分别在1 号、2 号烧杯内置入快速固定液50 ml、丙酮50 ml， 在3 号烧杯内融50 ml石蜡备用。以手术刀将组织切割为1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm大小组织块， 先置入1 号烧杯固定， 持续5 min， 期间进一步修整组织块， 确保厚度均匀， 边缘整齐， 随后将组织块取出，以吸水纸吸干水分。随后置入2 号烧杯， 浸泡5 min， 组织块以镊子轻压， 确保气泡快速涌出， 脱水。随后浸入熔化石蜡，持续5 min， 组织块以镊子轻压， 加快浸蜡速度， 确保气泡快速涌出， 以上操作均在超声波快速处理仪内实施。熔化预备好蜡块凹槽底， 凹槽内快速包埋处理好的组织块， 置入冰箱冷却， 持续2 min。随后做切片处理， 切片厚度3～5 µm， 切片置于含蛋白甘油载玻片上， 以酒精灯烘烤， 直至石蜡熔化，快速HE 染色， 封片。

以快速石蜡制片后剩余组织进行常规石蜡切片技术， 以资对照。操作步骤：标本以福尔马林溶液固定， 持续4 min。随后液体以吸水纸吸干， 先置于30%酒精， 再分别置于70%、85%、95%酒精， 进行脱水处理。取出组织， 置入透明剂，持续2 h。随后置入石蜡、二甲苯混合液， 持续2 h。再置入石蜡液， 持续3 h， 待蜡液表层凝固， 置入冷水处理。取出切片，切片厚度为3 µm， 进行常规染色、封片。

1. 4 观察指标及判定标准

①比较两种技术标本制作时间；②比较两种技术诊断结果， 一般分为良性、恶性；③分析快速石蜡切片图像特征。

1. 5 统计学方法

采用SPSS22.0 统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示， 采用t 检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两种技术标本制作时间比较

快速石蜡切片技术标本制作时间为(42.01±5.26)min， 常规石蜡切片技术标本制作时间为(1325.65±25.12)min， 比较差异有统计学意义(t=556.950，P=0.000＜0.05)。

2. 2 两种技术诊断结果比较

快速石蜡切片技术确诊率为95.97%(119/124)， 其中恶性肿瘤105 例， 包括95 例浸润性导管癌， 5 例小叶癌， 3 例小细胞癌， 2 例黏液癌；良性肿瘤14 例， 均为乳腺纤维腺瘤。3 例未定性(有待常规石蜡切片证实)， 肿瘤组织图像不够典型未能确诊2 例， 漏诊率为4.03%(5/124)。常规石蜡切片技术确诊率为96.77%(120/124)，其中恶性肿瘤105 例， 包括95 例浸润性导管癌， 5 例小叶癌， 3 例小细胞癌， 2 例黏液癌；良性肿瘤15 例， 均为乳腺纤维腺瘤。肿瘤组织图像不够典型未能确诊4 例， 漏诊率为3.23%(4/124)。两种技术确诊率比较差异无统计学意义(χ2=0.115， P＞0.05)。

2. 3 图像特征

经快速石蜡切片技术进行病理检验， 镜下显示组织结构清晰， 组织原有形态得以保持， 且细胞形态完整， 且胞核胞质清晰， 切片较薄， 且较为完整， 染色清晰， 切片质量接近常规石蜡切片。

3 讨论

目前外科手术患者病理检验中石蜡切片发挥重要作用，便于快速、准确判断病情， 指导治疗方案制定。以往多经加温石蜡切片、冰冻切片技术行病理处理。但常规加温石蜡切片具有制备步骤繁琐、易收缩、组织易硬变等弊端；而相较于加温石蜡切片， 冰冻石蜡切片诊断效果更佳， 但也具有易发生细胞肿胀、成本高、技术要求高等弊端。近年来， 人们开始越来越多地关注术中病理检验中快速石蜡切片技术的应用， 认为其能克服常规石蜡切片技术耗时长、成本高等问题，可尽快确定病理性质， 指导治疗方案制定［3-5］。

快速石蜡切片主要是经由超声迅速处理标本进行， 可缩短标本制作时间， 且能避免标本形态出现改变。此外， 以快速石蜡切片技术进行病理检验期间， 采用超声波快速处理仪处理石蜡切片固定、浸蜡、脱水等环节， 并应用微波辐射技术，可促使制作出的蜡片得以长期保存， 不会导致出现理化性状变化［6-8］。

本研究结果显示， 快速石蜡切片技术确诊率为95.97%(119/124)， 常规石蜡切片技术确诊率为96.77%(120/124)。快速石蜡切片中， 3 例未定性(有待常规石蜡切片证实)， 肿瘤组织图像不够典型未能确诊2 例。分析可能与切除组织期间切取质量未达标准， 切片过小， 或厚度不符标准， 脱水时间短等因素有关。而在图像特征上， 快速石蜡切片镜下显示组织结构清晰， 细胞形态完整， 且胞核胞质清晰， 切片较薄， 且较为完整， 染色清晰， 切片质量与常规石蜡切片相符。组织经超声处理后， 能保持柔韧性和外形， 还能克服常规石蜡切片易收缩、易变形等弊端。本研究结果显示， 快速石蜡切片技术标本制作时间为(42.01±5.26)min， 常规石蜡切片技术标本制作时间为(1325.65±25.12)min， 比较差异有统计学意义(t=556.950， P=0.000＜0.05)。分析是因快速石蜡切片技术可经由超声快速组织脱水机， 以超声震荡、恒温控制技术促使组织及有机溶剂或预熔石蜡高速震荡， 出现周期性缩张活动， 以有机溶剂代替组织内水分， 并促使预熔石蜡浸入组织内时间缩短， 最大限度控制固定、脱水、浸蜡等操作时间， 缩短标本制作时间， 满足快速病理诊断需求。故快速石蜡切片技术具有操作时间短、图像清晰、准确率高等优势， 可作为手术病理检验有效手段应用于临床。此外，快速石蜡切片操作中需注意以下问题：①切片需快速完成，并确保切片大小适宜， 切片时尽量去除难以切除的钙化组织， 以免影响诊断结果准确性；②尽量选择密封的容器进行固定， 以便加快固定， 缩短操作时间；③合理安排脱水时间， 依据组织质地、颜色等判断是否结束脱水， 通常组织颜色苍白、质地疏松时， 可做脱水结束处理；④温度尽量控制在78℃以下， 防止温度过高或过低导致组织内抗原、酶丢失， 影响检验准确性。

综上所述， 病理检验中快速石蜡切片技术应用价值较高，可保持组织原有形态， 且细胞结构完整， 细胞核、细胞质清楚，诊断效果与常规石蜡切片技术相符， 还可缩短标本制作时间，值得临床推广。