免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物在胃癌诊断中的价值分析*

侯洁心 ，郭 萍

1.陕西省友谊医院病理科(西安710068)，2.陕西省友谊医院消化内科(西安710068)

胃癌是肿瘤科常见的消化道恶性肿瘤，其发病率及病死率在全球范围内仅次于肺癌，但在我国却位居首位。临床通常采用胃镜组织活检进行胃癌的确诊，但该方式技术要求高、患者耐受低、诊断费用高，且容易造成早期胃癌漏诊[1]。在人体中血清肿瘤标志物早于临床症状表达，因此可作为肿瘤早期诊断的重要指标，但目前并未发现诊断效率高的单项标志物[2-3]。此外，免疫组化标志物也是恶性肿瘤早期诊断、治疗及预后判断的重要标志[4]。人类表皮生长因子受体2(HER-2/neu)是机体内的原癌基因，与多种肿瘤发生和预后均具有相关性，其阳性表达在胃癌、肺癌和结直肠癌等均有存在[5-6]。本研究就免疫组化标志物Her-2与肿瘤标志物糖类抗原199(CA199)、CA242、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)联合检测对早期胃癌诊断的临床效果进行了观察分析。

资料与方法

1 一般资料 选择2014年6月至2018年1月陕西省友谊医院接收的胃镜检出患者78例作为研究对象，其中男41例、女37例；年龄29～75岁，平均(55.62±12.58)岁；病变类型：腺癌69例(高度分化9例、中度37例、低分化18例、未分化5例)、印戒细胞癌9例。纳入排除标准：受试者均经胃镜检查证实，且对本研究内容详细知晓；排除伴发血液系统、免疫系统、内分泌系统等对肿瘤相关标志物测定产生干扰的相关疾病者。

2 研究方法 患者胃黏膜标本均由胃镜取材，3.7%中性甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，切片厚度4 μm，烤片、脱蜡，免疫组织化学染色，Envision二步法测定两组患者胃黏膜Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA表达状况，其中一抗包括鼠抗人单克隆抗体Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA显色试剂盒(试剂盒及抗体均购自于上海沪震生物科技有限公司)。采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为判定结果的阴性对照组，胃癌Her-2表达阳性片则作为阳性对照。所有染色结果均由病理科2名经验丰富的医师以双盲原则进行评定。胃黏膜活检标本Her-2表达判读标准如表1；CA199、CA242、AFP、CEA判读标准：细胞质出现淡黄至黄褐色颗粒状着色则为阳性，综合阳性细胞占比及着色强度进行半定量处理，即细胞未着色或着色细胞数目占总细胞数目比<10%为(—)；着色细胞占比10%～25%为(+)；着色细胞占比26%～50%为(++)；着色细胞占比>51%为(+++)，阳性即+～+++。每张切片选择5个高倍视野进行免疫组化结果判读。

表1 胃黏膜Her-2免疫组化染色判读标准

3 统计学方法 以SPSS17.0统计学软件进行处理数据。各类计数资料以[例(%)]表示，采用χ2检验，检验因子为α=0.05。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 两组5项标志物免疫组织化学染色结果 见表2。免疫组化分析结果显示，胃癌患者胃黏膜组织中肿瘤标志物CEA表达阳性率最高，其次为CA199、CA242。而免疫组化Her-2及肿瘤标志物AFP表达阳性率均相对较低，与肿瘤标志物CEA、CA199、CA242表达阳性率比，差异均具有统计学意义(P<0.05)。但肿瘤标志物CEA、CA199、CA242表达阳性率间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 两组5项标志物免疫组织化学染色结果[例(%)]

注：与CA199比，*P<0.05；与CA242比，#P<0.05；与CEA比，▲P<0.05

2 胃癌免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物阳性率比较 见表3。检测结果发现，随着肿瘤细胞分化程度降低，胃癌免疫组化Her-2和肿瘤标志物CA199、CA242、AFP、CEA检测阳性率呈明显升高趋势(P<0.05)。免疫组化Her-2和肿瘤标志物CA199、CA242、AFP、CEA在腺癌患者中检测阳性率与印戒细胞癌间差异无统计学意义(P>0.05)。

3 免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物对胃癌的诊断评价 见表4。单项免疫组化标志物Her-2及肿瘤标志物AFP灵敏度均明显低于肿瘤标物CA199、CA242、CEA(χ2=46.968～67.089，P<0.05)。但Her-2与AFP对胃癌诊断灵敏度间及CA199、CA242、CEA三者在胃癌诊断中的灵敏度间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与单独Her-2检测相比，Her-2+CA242、Her-2+CA199、Her-2+CEA联合检测灵敏度明显均明显提高，差异具有统计学意义(χ2=4.026、4.210、4.286，P<0.05)。

表3 胃癌免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物阳性率比较[例(%)]

注：不同分化程度间比较，*P<0.05

表4 免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物诊断胃癌的灵敏度(%)

讨 论

Her-2/neu基因是一种细胞原癌基因，主要定位于细胞膜，少量可在细胞质中表达，在细胞正常分裂及生长中扮演一定角色。Her-2/neu在胚胎发育时即开始表达，正常成年人组织中其表达强度弱。病理状态下，Her-2过表达具有抑制肿瘤细胞凋亡的作用，同时了促进肿瘤心血管再生、增加肿瘤细胞侵袭力等功效[7]。研究显示，在腺癌中，常见到Her-2基因扩增、RNA和蛋白质过表达，而在非癌组织中却未检测到，提示其在胃癌发生发展及侵袭转移方面具有重要作用[8-9]。通常对Her-2基因表达水平测定癌症原发病灶手术标本为准，但对于早期诊断患者无此标本，如何形成检测Her-2阳性表达成为癌症患者早期诊断的难题。李惠等对胃癌活检标本及手术标本中Her-2表达水平进行免疫组化及原位杂交扩增发现，胃镜活检标本Her-2状态评估可作为胃癌手术大标本的替代品[10]。因此本研究中所选标本为胃经活检标本。CEA是一类具有人体胚胎抗原特异度的酸性糖蛋白类物质，在各类肿瘤疾病诊断中得到广泛应用[11-12]。CA199是一类对消化道肿瘤具有高度特异性的抗原物质。报道显示，其与肿瘤大小、浸润程度及淋巴转移状况等具有相关性，可作为消化道肿瘤诊断及预后判断的可靠指标[13]，但其敏感度不如CEA，该结果与本研究相一致[14]；CA242为酸化的黏蛋白，主要存在于胚胎组织，正常人群和良性组织病变患者血清表达量低，但恶性消化道肿瘤病变部位含量明显增加，因此可作为恶性肿瘤诊断的指标之一[15]。汪桂霞报道显示，CA242胃癌诊断敏感性仅28.53%，而其与CA242、CA199和CEA联合检测，敏感性达86.78%[16]。AFP是一类癌胚糖蛋白，是一个肝细胞癌肿瘤标志物，但某些情况下，其在良性肝病变患者中也有异常表达，且一些病理学和免疫学研究发现，其对恶性肿瘤的意义不仅在于对干细胞癌的诊断，部分胃腺癌患者可分泌AFP，尤其是男性胃窦部位。

本研究中，入选者胃黏膜组织中Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA均出现阳性表达，尤其是肿瘤标志物CA199、CA242、CEA表达阳性率明显高于免疫组化标志物Her-2及肿瘤标志物AFP。说明胃黏膜组织中免疫组化标志物Her-2和肿瘤标志物CA199、CA242、AFP、CEA的异常升高可能预示初期癌发生或组织癌前病变发生，其可作为胃癌早期诊断的辅助指标。胃癌组织分化程度低或未分化者胃镜标本中Her-2、CA199、CA242、AFP、CEA表达检测阳性率均明显高于分化程度中高分化者。提示上述免疫组化标志物和肿瘤标志物阳性表达与胃癌病理分化程度具有高度相关性。上述5项指标单项检测敏感度均较低，尤其是Her-2灵敏度才达到15.38%，但其分别U与CA199、CA242、CEA联合检测时灵敏度均明显提高，使得三项肿瘤标志物灵敏度均在83 %以上。提示，使用免疫组化与肿瘤标志物联合检测可提高胃癌早期诊断的灵敏度。

综上所述，胃镜活检组织中Her-2的免疫组化分析及肿瘤标志物CA199、CA242、AFP、CEA在胃癌的普查、诊断及肿瘤细胞分化程度等方面占有重要位置，但各项指标单项检测灵敏度较低，其Her-2与肿瘤标志物联合检测可显著提高其灵敏度。