中药菟丝子对肉仔鸡免疫和抗氧化指标的影响

■ 周昭希 杨 柳 高立杰 高 明 刘玉芝*

(1.河北农业大学动物医学院，河北保定071000；2.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000)

中草药在我国应用历史悠久，其疗效持久、作用广泛，是预防治疗疾病的理想药物。随着人们对绿色无污染肉、蛋、奶需求量的日益增加，中草药也因其具有纯天然、无抗药性、无药物残留等优点成为国内外畜禽养殖业疾病防治的研究热点[1]。尽管有关中草药在禽类中的应用试验屡见报道，但在家禽养殖业中仍有许多中草药有待被开发利用。菟丝子（Cuscuta chi⁃nensis Lam.）又名吐丝子，为旋花科植物菟丝子的干燥成熟种子，具有补益肝肾、益精壮阳、明目、止泻之功效[2]。菟丝子主要含有甾醇、黄酮、多糖等成分，另外还有氨基酸、铁、铜、锰等微量元素，其中主要药用成分是黄酮类和多糖类化合物[3]。菟丝子的药理作用主要表现在免疫、抗氧化和抗衰老、营养神经以及保肝等方面[4-5]。因此菟丝子在家禽养殖业中具有很高的开发利用价值，而目前少见或未见菟丝子单方对肉鸡免疫和抗氧化指标的专门研究。本试验通过在肉鸡饲料中添加菟丝子饲喂肉鸡，分析菟丝子对肉鸡免疫和抗氧化指标的影响，旨在为菟丝子在家禽养殖业的应用提供新的参考。

1 材料

1.1 试验动物

180只1日龄健康、体重相近的爱拔益加肉仔鸡（保定市清苑养鸡场提供）。

1.2 药品

菟丝子购自保定市药材公司。

1.3 主要试剂

试验所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 试验动物分组与给药

将菟丝子用酒浸72 h，将酒炙的和未酒炙的菟丝子分别炒干，40目粉碎备用[6]。选用1日龄健康、体重相近的爱拔益加肉仔鸡180只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复10只鸡。对照组（DZ组）：饲喂基础饲粮（见表1）；菟丝子试验组（TS组）：饲喂基础饲粮+2%菟丝子；酒炙菟丝子试验组（JTS组）：饲喂基础饲粮+2%酒炙菟丝子。试验鸡进行常规饲养管理，自由采食和饮水。试验期为42 d。

2.2 样品的采集与制备

在第21 d和第42 d，每个重复分别随机抽取1只鸡，称重后，颈静脉采血，一部分血液用肝素钠抗凝分离血浆，另一部分不抗凝，静置过夜后离心得血清，血清和血浆收集在EP管中置于-20℃冰箱保存，分别用于测定免疫指标和抗氧化指标。将鸡只放血致死解剖，分别迅速摘除脾、胸腺、法氏囊，去除附着组织分别称鲜重，计算免疫器官指数；再胸肌取样，放于4℃冰箱冷藏，24 h后，研磨再用冷生理盐水稀释制成10%的组织匀浆液，用于测定胸肌中抗氧化指标。

2.3 测定指标与方法

2.3.1 血清免疫指标的测定

血清球蛋白（GLB）含量用总蛋白含量和白蛋白含量之差计算；总蛋白（TP）含量用双缩脲法测定；白蛋白（ALB）含量用溴甲酚绿比色法测定；血清溶菌酶（LZM）活性用比浊法测定；血清与应用菌液反应后，根据透光度计算溶菌酶含量。

2.3.2 免疫器官指数的测定

免疫器官指数（%）=器官重量/活体体重×100

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

2.3.3 血浆和胸肌抗氧化指标的测定

血浆和胸肌中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性用黄嘌呤氧化酶法测定；谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性以催化谷胱甘肽（GSH）的反应速度来表示；胸肌匀浆蛋白质测定采用考马斯亮蓝法测定；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸比色法测定。上述试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，严格按说明书进行操作。

2.4 数据分析

采用SPSS 17.0软件中One Way ANOVA对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准差”表示，差异显著性用LSD法进行多重比较，P＜0.05为差异显著水平。

3 结果与分析

3.1 菟丝子对肉仔鸡血清免疫指标的影响(见表2)

由表2可知，在21日龄，酒炙菟丝子组肉仔鸡血清LZM活性显著高于对照组（P＜0.05），在42日龄，酒炙菟丝子组和菟丝子组血清TP和GLB水平均显著高于对照组（P＜0.05）。

3.2 菟丝子对肉仔鸡免疫器官指数的影响(见表3)

表2 菟丝子对肉仔鸡血清免疫指标的影响

表3 菟丝子对肉仔鸡免疫器官指数的影响（%）

由表3可知，在21日龄，酒炙菟丝子组肉仔鸡胸腺指数显著高于对照组（P＜0.05）和菟丝子组（P＜0.05）。在42日龄，酒炙菟丝子组肉仔鸡脾脏指数显著高于对照组（P＜0.05）。

3.3 菟丝子对肉仔鸡抗氧化指标的影响（见表4）

由表4可知，在42日龄，酒炙菟丝子组和菟丝子组的肉仔鸡血浆GSH-Px活性都显著升高（P＜0.05）；胸肌MDA含量都显著低于对照组（P＜0.05）。

表4 菟丝子对肉仔鸡抗氧化指标的影响

4 讨论

4.1 菟丝子对肉仔鸡免疫指标的影响

免疫球蛋白是血清中GLB的主要组成成分，血清中GLB含量反映了机体免疫力的高低。LZM是广泛存在于生物体液、血清和巨噬细胞中的一种水解酶，在免疫中发挥重要作用，其活性体现了机体细胞免疫和机体抗感染的能力[7]。本试验中，和对照组相比，酒炙菟丝子显著提高了21日龄肉仔鸡的血清LZM活性和42日龄的血清GLB含量。徐何方等[8]试验结果显示，菟丝子乙醇提取物能提高大鼠的血清免疫球蛋白水平，而张庆平等[9]试验证实菟丝子的乙醇提取物提高了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,说明菟丝子是一种能够增强体液免疫及细胞免疫的免疫增强剂。脾脏、胸腺和法氏囊是禽类的主要免疫器官,参与机体的体液免疫和细胞免疫,其指数是评价家禽免疫力的重要指标。本试验中，和对照组相比，酒炙菟丝子显著提高了21日龄肉仔鸡的胸腺指数和42日龄的脾脏指数，说明酒炙菟丝子促进了胸腺和脾脏的发育，能提高机体的细胞免疫机能。与菟丝子组相比，酒炙菟丝子组21日龄肉仔鸡胸腺指数显著升高，而其他指标均无显著差异。说明酒炙菟丝子增强机体免疫力的作用比菟丝子更好。本试验中酒炙菟丝子和菟丝子都提高了42日龄肉鸡血清TP含量，说明菟丝子可以促进肉鸡体内蛋白质的沉积作用。菟丝子对肉仔鸡的免疫增强作用应该主要和菟丝子中含有的大量黄酮类物质有关。黄酮类化合物因为结构类型多、作用机理复杂，其免疫调节作用及其机制的研究还有待新的试验逐渐被揭示阐明[10]。

4.2 菟丝子对肉仔鸡抗氧化指标的影响

抗氧化酶系统的功能是清除物质代谢过程中产生的活性中间产物，特别是清除自由基，保护细胞免受损伤。SOD是体内清除自由基的关键物质，能对抗自由基和修复受损细胞。GSH-Px是一种重要的催化过氧化氢分解的酶，催化GSH变为GSSG的同时，使有毒的过氧化氰还原成无毒的化合物，从而保护细胞不受损害。机体内MDA的含量是反映机体内脂质过氧化程度高低的指标。检测SOD、GSH-Px活性和MDA的含量可以反映机体抗氧化的能力及细胞受损的程度。张培全等[11]试验证明菟丝子的乙酸乙酯、正丁醇提取物以及90%醇沉多糖能清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）和超氧阴离子自由基（O2-·），且菟丝子乙酸乙酯、正丁醇提取物比GSSG清除自由基的能力还强。本试验中，酒炙菟丝子和菟丝子都能显著升高42日龄肉仔鸡的血浆GSH-Px活性而降低胸肌MDA含量，说明菟丝子是天然抗氧化剂的良好来源。但本试验血浆和胸肌T-SOD活性升高都未达显著水平，这也许和试验所用菟丝子剂量有关。本试验设计中由于酒炙菟丝子添加剂量单一，因此不能确定2%是否为最佳剂量，关于酒炙菟丝子的适宜添加剂量还需要后续新的试验来验证，而菟丝子活性成分抗氧化作用的机制有待进一步研究[12]。

4.3 菟丝子酒炙的作用

菟丝子入药有生品和炮制品之分，其生品质地较硬比较难以粉碎，且其中的有效化学成分难以溶出，因此临床上宜将菟丝子炮制后再入药。菟丝子炮制历史悠久，方法有多种，其中酒制又分为酒浸、酒煮、酒蒸和酒炙等[13]。将净选或切制后的药物，加入一定量的液体辅料拌炒的炮制方法称炙法。现代菟丝子炮制以清炒、盐炙、酒炙、制饼为主。中药经酒制，不但有助于有效成分溶出，增加疗效、还能引药上行、增强活血通络作用、改变药物性味、矫臭去腥以及降低药物的毒副作用等，如生黄连中小檗碱的溶出率为58.17%,经酒制后，溶出率为85%，说明酒制促进了黄连中小檗碱在煎液中的溶出率[14]。菟丝子除了含有氨基酸、铁、铜、锰等微量元素外，其主要含有甾醇、黄酮、多糖类成分，主要药用成分是黄酮类和多糖类化合物。肖岚等[15]报道，菟丝子经清炒、盐制、酒制后，其中的5种黄酮类物质包括槲皮素、金丝桃苷、山奈酚、绿原酸、异鼠李素含量均比生品菟丝子高，且酒制菟丝子中，金丝桃苷含量比清炒菟丝子增加3.47%；比盐制菟丝子增加10.25%，比生品菟丝子增加37.78%[15]。试验证实，酒炙菟丝子多糖含量是清炒菟丝子的1.62倍，是生菟丝子的1.98倍，说明酒炙能显著提高菟丝子中多糖的含量[16]，而多糖具有提高免疫力和抗氧化抗衰老作用[17]，本试验将酒浸菟丝子和生菟丝子对比，试验结果表明酒炙菟丝子增强机体免疫力的作用比菟丝子更好，与肖岚等[15]的试验结果相符合。而菟丝子炮制作用机理还有待进一步研究。

5 结论

菟丝子能提高肉鸡的免疫力和抗氧化能力并促进肉鸡蛋白质沉积，酒炙菟丝子效果更好。