忌酸颗粒的药物依赖性研究

王彦礼，马旭冉，刘佳星，宋红新，杨伟鹏

(中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

忌酸丸记载于清代医家何书田著《救迷良方》中，在林则徐的禁烟运动中发挥了显著作用[1]，经现代考证，忌酸丸组成为东洋参15 g，炒白术9 g，白当归7.5 g，真川柏12 g，川黄连12 g，炙甘草9 g，广陈皮7.5 g，生柴胡10.5 g，明天麻9 g，广木香7.5 g，炙黄芪9 g，绿升麻0.5 g，沉水香7.5 g，生附子2.1 g，鸦片膏16.8 g组成，各药以面糊为丸服用，具有温补脾肾，益气升阳，滋阴平肝，制瘾戒毒的功效。

忌酸颗粒是根据戒毒古方忌酸丸进行组方优化而成，在忌酸丸原方基础上，去鸦片膏，用西洋参等量替代东洋参，加洋金花0.5 g，酸枣仁12 g，延胡索12 g，制成颗粒制剂后，成人日用量为27 g生药/日，用于阿片类毒品急性戒断之后稽延性症状的治疗，经药效学研究证明具有镇痛、镇静、提高机体免疫力、止泻等作用。

药物依赖性是指带有强制性的渴求、追求与不能间断使用某种或某些药物或物质。药物依赖是由成瘾物质和肌体相互作用而产生的精神与躯体状况，以强制性地使用药物或物质来取得特定的心理效应，并借此避免戒断综合征的不适感受。对于新药尤其是戒毒相关新药的研究，为发现其是否存在潜在的依赖性，应进行药物依赖性的试验。所以本研究通过自然戒断试验和条件性位置偏爱试验来考察和评价忌酸颗粒产生药物依赖性的潜力和相对于吗啡的依赖程度。

1 实验材料

1.1 动物

SD大鼠， SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号:SCXK(京)2012-0001。行为学测试前在测试实验环境适应3 d。

1.2 药品及试剂

受试药物：忌酸颗粒，由中国中医科学院中药研究所中药制剂研究中心提供。用无菌注射用水配成所需浓度溶液。现用现配，常温保存。盐酸吗啡，青海制药厂有限公司生产，批号20150505。

1.3 仪器

大鼠条件性位置偏爱(CPP)装置(美国，Med Associates Inc.)由电脑、主机和训练箱组成。训练箱的大小为70 cm×22 cm×22 cm，被分割为3个部分，分别为黑盒、灰盒和白盒，灰盒位于黑、白盒之间。黑盒的底部为1 cm宽的铁丝栅栏，白盒的底部为1 cm见方的铁丝网，灰盒底部为灰色塑料底板。黑盒和灰盒之间、白盒和灰盒之间均有可打开的门。训练箱分别放在具有通风和照明装置的隔音箱内。实验过程中的数据记录由计算机自动完成。

2 实验方法

2.1 大鼠条件性位置偏爱试验

分四步进行，采用无偏平衡设计[2]。第一步:(Test-0)天然倾向性测定及分组：在第1天，将大鼠放入隔门打开的条件性位置偏爱训练箱内，测定大鼠在 15 min内在各盒停留时间，以此判断大鼠的天然倾向性。计算大鼠在黑、白盒停留时间的差值的均数，去除天然倾向性比较大的(黑、白盒停留时间大于或接近200 s)。适合要求的45只大鼠共分为5组，每组9只。分10笼饲养。分组依据：各组大鼠的训前条件性位置偏爱得分值接近，组间无统计学差异。5个组别包括：溶剂对照组，吗啡组(阳性药对照)组，受试药物低、中、高三个剂量组。

第二步:条件性位置偏爱训练。第1、3、5、7天，阳性药物组和受试药物组动物灌胃给予药物，然后放入CPP设备的伴药盒内停留45 min；第2、4、6、8天，灌胃给予溶剂放入CPP设备的非伴药盒内停留45 min。溶剂对照组均灌胃给予溶剂，其它处置方式与受试药物组相同。

第三步:(Test-1)条件性位置偏爱效应的测定：在第6天, 将各组动物放入CPP测试箱内测试15 min，记录大鼠在伴药盒和非伴药盒内停留时间和停留次数。以各组大鼠给药后伴药盒与非伴药盒停留时间差值，作为评价条件性位置偏爱效应形成与否的得分。根据得分情况判断受试药物的精神依赖性的有无和相对强度。

大鼠随机分为5组，每组9只，♀♂各半，5组分别为NS对照组(皮下注射)，吗啡对照组(皮下注射，10 mg/kg)，忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。先进行基础值测试，然后进行分组，然后按照以上剂量隔天给予大鼠，共4次，为期8天的训练。训练结束之后进行测试位置偏爱。

2.2 大鼠自然戒断试验

大鼠随机分为5组，每组10只，♀♂各半，5组分别为NS对照组(皮下注射)，吗啡对照组(皮下注射，40 mg/kg)，忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。以上剂量每天分3次经口灌胃给药(8:00，13:00，18:00)，连续给药30 d，第31天停止给药。第30天给药结束之后每天称量大鼠体质量3次(8:00，14:00，20:00)，连续称量8 d。以给药前一天体质量均值为基础值，计算各组戒断后各天体质量变化率。

2.3 数据处理

数据以均数±标准差表示，组间均值的比较采用成组t检验或方差分析，组内不同时间点比较使用重复测量方差分析。当P<0.05时认为均值差别有统计学意义。

3 结果

3.1 忌酸颗粒给药训练大鼠的条件性位置偏爱得分

图1 忌酸颗粒给药训练大鼠的条件性位置偏爱得分

t检验结果显示，吗啡训练后的CPP值显著升高(P<0.05)，而生理盐水(P>0.05)、低剂量组(P>0.05)、中剂量组(P>0.05)和高剂量组(P>0.05)训练后CPP值无显著差异，提示吗啡训练能够形成大鼠CPP，而忌酸颗粒低、中、高三个剂量组不能够训练形成CPP。

在研究剂量范围内(忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸颗粒给药大鼠没有形成条件性位置偏爱。

3.2 忌酸颗粒给药大鼠自然戒断后的体质量变化

图2 忌酸颗粒给药大鼠自然戒断后的体质量变化

采用重复测量方差分析，以测试时间作为组内因素(自然戒断后第1～7天)，以处理方式(生理盐水组、吗啡组、忌酸颗粒低、中、高三个剂量组)作为组间因素，结果显示随着自然戒断时间的延长，大鼠体质量显著增高(时间效应：F6,38=68.775,P<0.001)，且时间和分组无交互作用(分组×时间交互效应：F6.38=1.522，P>0.05)，说明时间因素(即戒断后1～7 d)的作用不随分组的不同而不同；同时结果显示组间效应(F4,43=27.404，P<0.001)具有统计学差异，表明生理盐水、吗啡、忌酸颗粒低、中、高三个剂量对大鼠自然戒断后体质量变化具有显著影响。Post-hoc分析显示，生理盐水组(P<0.001)、低剂量组(P<0.001)、中剂量组(P<0.001)和高剂量组(P<0.001)的体质量变化与吗啡组相比具有显著性差异。此外，生理盐水组、低剂量、中剂量和高剂量组间无统计学差异(P>0.05)。进一步分析表明自然戒断后第1～7天，低剂量组、中剂量组、高剂量组和生理盐水组与吗啡组相比，差异具有统计学意义(第1天：F4,43=47.415，P<0.001； 第2天：F4,43=50.574，P<0.001； 第3天：F4,43=32.148，P<0.001；第4天：F4,43=21.103，P<0.001；第5天：F4,43=18.557，P<0.001；第6天：F4,43=20.826，P<0.001；第7天：F4,43=11.855，P<0.001)。此外，低剂量、中剂量和高剂量组与生理盐水间无统计学差异(P>0.05)。说明吗啡组在自然戒断后体质量变化明显低于其他各组。

在研究剂量范围内(忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸颗粒给药30 d戒断之后大鼠的体质量没有出现明显的下降。

4 讨论

忌酸丸具有温补脾肾，益气升阳，滋阴平肝，制瘾戒毒的功效，用于久吸阿片成瘾之脾肾不足，气虚阳陷，而见倦怠乏力，食少呕恶，大便溏泻，萎黄羸瘦，心烦头痛，周身痠疼，头晕目眩，盗汗遗精，脉虚无力者。忌酸颗粒是基于戒毒古方忌酸丸进行处方优化而制成，即在忌酸丸原方基础上，去鸦片膏，用西洋参等量替代东洋参，加洋金花、酸枣仁、延胡索，用于阿片类毒品急性戒断之后稽延性症状的治疗。相比于目前上市的戒毒药物多针对急性戒断症状的治疗[3]，忌酸颗粒对于急性戒断症状之后出现的稽延性症状具有较好的治疗作用。

世界卫生组织将药物依赖性分为精神依赖性和身体依赖性。精神依赖性又称心理依赖性，凡能引起令人愉快意识状态的任何药物即可引起精神依赖性，精神依赖者为得到欣快感而不得不定期或连续使用某些药物。主要有镇静催眠药，如安定、舒乐安定、巴比妥类、甲喹酮等。身体依赖性也称生理依赖性，用药者反复地应用某种药物造成一种适应状态，停药后产生戒断症状，使人非常痛苦，甚至危及生命。常见于麻醉性镇痛药(多为阿片类)，如吗啡、海洛因、哌替啶、曲马多、美沙酮、丁丙诺啡(布诺啡)等，其中美沙酮和布诺啡因戒断症状轻较而用于戒毒时的“替代递减法”。能引起依赖性的药物常兼有精神依赖性和身体依赖性，阿片类和催眠镇痛药在反复用药过程中，先产生精神依赖性，后产生身体依赖性。

阿片类药物、镇静催眠药等长时间应用易产生成瘾性[4]，药物或行为引起的欣快感强化了脑内愉快中枢的记忆, 形成一种奖赏机制,可使成瘾者产生难以抑制的渴求感，临床表现主要有精神依赖性和身体依赖性。忌酸颗粒中含有洋金花、制附子、延胡索和酸枣仁等具有镇痛和安神作用的中药，有必要在肯定药效作用的同时考察人体对其的药物依赖性。

条件性位置偏爱试验是用来评价精神依赖性的经典实验。在本项研究中，通过大鼠的位置偏爱试验，发现在研究剂量范围内(忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸颗粒给药大鼠没有形成条件性位置偏爱。提示在灌胃给药方式下，在条件性位置偏爱的模型中，研究剂量范围内的忌酸颗粒无明显的精神依赖性。自然戒断试验是评价躯体依赖性的实验。通过大鼠的躯体依赖性试验，发现在研究剂量范围内(忌酸颗粒低、中、高三个剂量组生药量分别10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸颗粒给药30 d戒断之后大鼠的体质量没有出现明显的下降。提示在灌胃给药方式下，在自然戒断的模型中，研究剂量范围内的忌酸颗粒无明显的躯体依赖性。

忌酸颗粒作为来源于古方的戒毒候选药物，其成药性研究应侧重于药效学和安全性，本次研究和前期研究证明忌酸颗粒对于稽延性症状相关药效指标具有较好的治疗作用，并且无明显的药物依赖性，初步说明其具有较好的新药开发的潜质，还应结合其他安全性研究进行综合评估。